Mingzu Yang, Bo Xu
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Introdução
Os antibióticos são uma classe de metabólitos secundários produzidos por microorganismos (incluindo bactérias, fungos, actinomicetos) ou compostos similares que são quimicamente sintetizados ou semi-sintetizados. Os antibióticos podem inibir o crescimento e a sobrevivência de outros microorganismos. O primeiro antibiótico descoberto por humano, penicilina, foi descoberto pelo microbiologista britânico Alexander Fleming em 1928. Ele observou que as bactérias nas proximidades do molde não podiam crescer no prato de cultura de Staphylococcus, que foi contaminado com mofo. Ele postulou que o molde deve secretar uma substância antibacteriana, que ele chamou de penicilina em 1928. No entanto, os ingredientes ativos não eram purificados naquele momento. Em 1939, Ernst Chain e Howard Florey, da Universidade de Oxford, decidiram desenvolver um medicamento que poderia tratar infecções bacterianas. Depois de entrar em contato com Fleming para obter cepas, eles extraíram e purificaram com sucesso a penicilina das cepas. Para o desenvolvimento bem -sucedido da penicilina como uma droga terapêutica, Fleming, Chain e Florey compartilharam o Prêmio Nobel de 1945 em medicina.
Os antibióticos são usados como agentes antibacterianos para tratar ou prevenir infecções bacterianas. There are several main categories of antibiotics used as antibacterial agents: β-lactam antibiotics (including penicillin, cephalosporin, etc.), aminoglycoside antibiotics, macrolide antibiotics, tetracycline antibiotics, chloramphenicol (total synthetic antibiotic), and etc. The sources of antibiotics include biological fermentation, Semi-síntese e síntese total. Os antibióticos produzidos pela fermentação biológica precisam ser estruturalmente modificados por métodos químicos devido à estabilidade química, efeitos colaterais tóxicos, espectro antibacteriano e outros problemas. Após modificação quimicamente modificada, os antibióticos poderiam alcançar maior estabilidade, redução de efeitos colaterais tóxicos, espectro antibacteriano expandido, resistência reduzida a medicamentos, biodisponibilidade aprimorada e, assim, melhorou o efeito do tratamento medicamentoso. Portanto, os antibióticos semi-sintéticos são atualmente a direção mais popular no desenvolvimento de medicamentos antibióticos.
No desenvolvimento de antibióticos semi-sintéticos, os antibióticos têm as propriedades de baixa pureza, muitos subprodutos e componentes complexos, pois são derivados de produtos de fermentação microbiana. Nesse caso, a análise e controle de impurezas nos antibióticos semi-sintéticos são particularmente importantes. Para identificar e caracterizar efetivamente as impurezas, é necessário obter uma quantidade suficiente de impurezas do produto sintético de antibióticos semi-sintéticos. Entre as técnicas de preparação de impureza comumente usadas, a cromatografia flash é um método econômico, com vantagens, como grande quantidade de carga de amostra, baixo custo, economia de tempo, etc. A cromatografia flash tem sido cada vez mais empregada por pesquisadores sintéticos.
Neste post, a principal impureza de um antibiótico semi-sintético aminoglicosídeo foi utilizada como amostra e purificada por um cartucho Sepaflash C18AQ combinado com o sistema de cromatografia flash Sepabean ™. O produto -alvo que atende aos requisitos foi obtido com sucesso, sugerindo uma solução altamente eficiente para a purificação desses compostos.
Seção experimental
A amostra foi gentilmente fornecida por uma empresa farmacêutica local. A amostra era um tipo de carboidrato amino policíclico e sua estrutura molecular foi semelhante aos antibióticos aminoglicosídeos. A polaridade da amostra era bastante alta, tornando -a muito solúvel em água. O diagrama esquemático da estrutura molecular da amostra foi mostrado na Figura 1. A pureza da amostra bruta foi de cerca de 88%, conforme analisado por HPLC. Para a purificação desses compostos de alta polaridade, a amostra mal seria retida nas colunas C18 regulares de acordo com nossas experiências anteriores. Portanto, uma coluna C18AQ foi empregada para a purificação da amostra.
Figura 1. O diagrama esquemático da estrutura molecular da amostra.
Para preparar a solução da amostra, 50 mg de amostra bruta foram dissolvidos em água pura de 5 ml e depois ultrassonicados, a fim de torná -la uma solução completamente clara. A solução de amostra foi então injetada na coluna Flash por um injetor. A configuração experimental da purificação flash foi listada na Tabela 1.
| Instrumento | Sepabean ™ Machine 2 | |
| Cartuchos | 12 g Sepaflash C18AQ RP CARTRIGED FLASH (sílica esférica, 20-45μm, 100 Å, número do pedido: SW-5222-012-SP (aq)) | |
| Comprimento de onda | 204 nm, 220 nm | |
| Fase móvel | Solvente A: Água Solvente B: acetonitrila | |
| Taxa de fluxo | 15 ml/min | |
| Carregamento de amostra | 50 mg | |
| Gradiente | Tempo (min) | Solvente B (%) |
| 0 | 0 | |
| 19.0 | 8 | |
| 47.0 | 80 | |
| 52.0 | 80 | |
Resultados e discussão
O cromatograma flash da amostra no cartucho C18AQ foi mostrado na Figura 2. Como mostrado na Figura 2, a amostra altamente polar foi efetivamente retida no cartucho C18AQ. Após a liofolização para as frações coletadas, o produto alvo teve uma pureza de 96,2% (como mostrado na Figura 3) pela análise HPLC. Os resultados indicaram que o produto purificado poderia ser utilizado ainda mais na próxima etapa de pesquisa e desenvolvimento.
Figura 2. O cromatograma flash da amostra em um cartucho C18AQ.
Figura 3. O cromatograma HPLC do produto de destino.
Em conclusão, o cartucho flash Sepaflash C18AQ RP combinado com o sistema de cromatografia flash Sepabean ™ pode oferecer uma solução rápida e eficaz para a purificação de amostras altamente polares.
Sobre o Sepaflash C18AQ RP Flash Cartides
Há uma série de cartuchos flash sepaflash C18AQ RP com diferentes especificações da tecnologia Santai (como mostrado na Tabela 2).
| Número do item | Tamanho da coluna | Taxa de fluxo (ml/min) | Max.Pressure (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP (aq) | 5,4 g | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP (aq) | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP (aq) | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP (aq) | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP (aq) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP (aq) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP (AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP (aq) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
Tabela 2. Sepaflash C18AQ RP Cartuchos flash. Materiais de embalagem: sílica esférica de alta eficiência C18 (aq), 20-45 μm, 100 Å.
Para obter mais informações sobre especificações detalhadas da máquina Sepabean ™ ou as informações de pedidos sobre os cartuchos flash da série Sepaflash, visite nosso site.
Hora de postagem: 26-2018 de outubro