A aplicação de colunas C18AQ na purificação de peptídeos polares fortes

Rui Huang, Bo Xu
Centro de P&D do aplicativo

Introdução
Um peptídeo é um composto composto por aminoácidos, cada um com propriedades físicas e químicas únicas devido aos diferentes tipos e ordem dos resíduos de aminoácidos que constituem sua sequência. Com o desenvolvimento da síntese química de fase sólida, a síntese química de vários peptídeos ativos fez um grande progresso. No entanto, devido à composição complicada do peptídeo obtido por síntese de fase sólida, o produto final deve ser purificado por métodos confiáveis ​​de separação. Os métodos de purificação comumente usados ​​para peptídeos incluem cromatografia em troca iônica (IEC) e cromatografia líquida de alto desempenho em fase reversa (RP-HPLC), que tem as desvantagens de baixa capacidade de carga de amostra, alteração de mídia de separação, mídia mais complicada e de separação, etc. Tecnologias, nas quais um cartucho Sepaflash RP C18 foi utilizado para a rápida purificação da timopentina (TP-5) e o produto-alvo que atende aos requisitos foi obtido.

Figura 1. 20 Aminoácidos comuns (reproduzidos em www.bachem.com).

Existem 20 tipos de aminoácidos comuns na composição dos peptídeos. Esses aminoácidos podem ser divididos nos seguintes grupos de acordo com sua polaridade e propriedade ácida: não polar (hidrofóbica), polar (não carregada), ácido ou básico (como mostrado na Figura 1). Em uma sequência peptídica, se os aminoácidos que constituem a sequência são principalmente polares (como marcado em cor rosa na Figura 1), como cisteína, glutamina, asparagina, serina, treonina, tirosina etc., então esse peptídeo pode ter uma forte polaridade e ser altamente solúvel em água. Durante o procedimento de purificação para essas fortes amostras de peptídeos polares por cromatografia em fase reversa, ocorrerá um fenômeno chamado colapso da fase hidrofóbica (consulte uma nota de aplicação publicada anteriormente por tecnologias de Santai: colapso da fase hidrofóbica, colunas de cromatografia de fase reversa de AQ e suas aplicações). Comparado com as colunas C18 regulares, as colunas C18AQ aprimoradas são mais adequadas para a purificação de amostras polares ou hidrofílicas fortes. Neste post, um forte peptídeo polar foi utilizado como amostra e purificado por uma coluna C18AQ. Como resultado, o produto -alvo que atende aos requisitos foi obtido e pode ser usado na pesquisa e desenvolvimento a seguir.