هونګ چینګ وانګ، بو سو
د غوښتنلیک R&D مرکز
پیژندنه
د سټیشنري مرحلې او ګرځنده مرحلې د نسبي قطبیت له مخې ، مایع کروماتګرافي په نورمال مرحله کروماتګرافي (NPC) او د بیرته راګرځیدونکي مرحله کروماتګرافي (RPC) ویشل کیدی شي.د RPC لپاره، د ګرځنده مرحلې قطبیت د سټیشنري مرحلې په پرتله پیاوړی دی.RPC د خپل لوړ موثریت، ښه ریزولوشن او روښانه ساتلو میکانیزم له امله د مایع کروماتګرافي جلا کولو حالتونو کې ترټولو پراخه کارول شوی.له همدې امله RPC د مختلفو قطبي یا غیر قطبي مرکبونو د جلا کولو او پاکولو لپاره مناسب دی، په شمول د الکالویدونو، کاربوهایډریټ، غوړ اسیدونو، سټرایډونو، نیوکلیک اسیدونو، امینو اسیدونو، پیپټایډونو، پروټینونو او نورو په شمول، په RPC کې، ترټولو عام کارول کیږي سټیشنري مرحله ده. د سیلیکا جیل میټریکس چې د مختلفو فعالو ګروپونو سره تړلی دی، پشمول د C18، C8، C4، فینیل، سیانو، امینو او نور. د دې تړل شوي فعال ګروپونو په منځ کې، ترټولو پراخه کارول کیږي C18 دی.اټکل کیږي چې د RPC 80٪ څخه ډیر اوس د C18 تړل شوي مرحله کاروي.له همدې امله د C18 کروماتګرافي کالم د هر لابراتوار لپاره یو لازمي نړیوال کالم ګرځیدلی.
که څه هم د C18 کالم په پراخه کچه غوښتنلیکونو کې کارول کیدی شي، په هرصورت، د ځینو نمونو لپاره چې خورا قطبي یا خورا هایدروفیلیک وي، منظم C18 کالم ممکن ستونزې ولري کله چې د داسې نمونو پاکولو لپاره کارول کیږي.په RPC کې، په عام ډول کارول شوي elution محلولونه د دوی د قطبیت سره سم ترتیب کیدی شي: اوبه < میتانول < اکټونیتریل < ایتانول < ټیټراایډروفوران < isopropanol.د دې نمونو لپاره په کالم کې د ښه ساتلو ډاډ ترلاسه کولو لپاره (قوي قطبي یا خورا هایدروفیلیک)، د اوبو سیسټم لوړ تناسب اړین دی چې د ګرځنده پړاو په توګه وکارول شي.په هرصورت، کله چې د پاکو اوبو سیسټم (د پاکو اوبو یا خالص مالګې محلول په شمول) د ګرځنده مرحلې په توګه وکاروئ، د C18 کالم په سټیشنري مرحله کې د کاربن اوږد سلسله د اوبو څخه مخنیوی کوي او یو له بل سره مخلوط کوي، چې په پایله کې د سمدستي کمښت المل کیږي. د کالم د ساتلو ظرفیت یا حتی هیڅ ساتل.دې پدیدې ته د "هایډروفوبیک پړاو سقوط" ویل کیږي (لکه څنګه چې د 1 شکل په کیڼ اړخ کې ښودل شوي).که څه هم دا حالت د بیرته راګرځیدو وړ دی کله چې کالم د عضوي محلولونو لکه میتانول یا اکټونیټریل سره مینځل کیږي، بیا هم کولی شي ستون ته زیان ورسوي.له همدې امله، دا اړینه ده چې د دې وضعیت مخه ونیول شي.
شکل 1. د منظم C18 کالم (کیڼ اړخ) او C18AQ کالم (ښي) کې د سیلیکا جیل په سطحه د تړل شوي مرحلو سکیماتیک ډیاګرام.
د پورته ذکر شویو ستونزو د حل لپاره، د کروماتګرافیک بسته بندي موادو جوړونکو تخنیکي پرمختګونه کړي دي.یو له دې پرمختګونو څخه د سیلیکا میټریکس په سطح کې ځینې بدلونونه رامینځته کول دي ، لکه د هایدروفیلیک سیانو ګروپونو معرفي کول (لکه څنګه چې د 1 شکل ښي برخه کې ښودل شوي) ، ترڅو د سیلیکا جیل سطح نور هایدروفیلیک کړي.په دې توګه د سیلیکا په سطحه د C18 زنځیرونه په بشپړ ډول د خورا اوبو شرایطو لاندې پراخ کیدی شي او د هایدروفوبیک مرحلې سقوط مخه نیول کیدی شي.دا تعدیل شوي C18 کالمونه د Aqueous C18 کالمونو په نوم یادیږي، د C18AQ کالمونو په نوم یادیږي، کوم چې د ډیرو اوبو ایستلو شرایطو لپاره ډیزاین شوي او د 100٪ آبی سیسټم برداشت کولی شي.د C18AQ کالمونه په پراخه کچه د قوي قطبي مرکباتو په جلا کولو او پاکولو کې پلي شوي ، پشمول د عضوي اسیدونو ، پیپټایډونو ، نیوکلیوسایډونو او په اوبو کې محلول شوي ویټامینونه.
پاکول د نمونو لپاره د فلش پاکولو کې د C18AQ کالمونو یو له عادي غوښتنلیکونو څخه دی، کوم چې د نمونې محلول کې مالګه یا بفر اجزا لرې کوي ترڅو په راتلونکو مطالعاتو کې د نمونې پلي کول اسانه کړي.پدې پوسټ کې ، د قوي قطبي سره عالي نیلي FCF د نمونې په توګه کارول شوی او د C18AQ کالم کې پاک شوی.د نمونې محلول د بفر محلول څخه د عضوي محلول لخوا بدل شوی و، په دې توګه د لاندې روټري تبخیر او همدارنګه د محلولونو او عملیاتي وخت خوندي کول اسانه کوي.سربیره پردې، د نمونې پاکوالی په نمونه کې د ځینو ناپاکو په لرې کولو سره ښه شوی.
تجربه برخه
شکل 2. د نمونې کیمیاوي جوړښت.
بریلینټ نیلي FCF پدې پوسټ کې د نمونې په توګه کارول شوی و.د خامې نمونې پاکوالی 86% وه او د نمونې کیمیاوي جوړښت په 2 شکل کې ښودل شوی. د نمونې د محلول د چمتو کولو لپاره، د 300 ملی ګرامه پوډر خام جامد د بریلینټ نیلي FCF په 1 M NaH2PO4 بفر محلول کې حل شوی او په ښه توګه وغورځول شو ترڅو جوړ شي. په بشپړه توګه روښانه حل.د نمونې محلول بیا د انجیکټر لخوا د فلش کالم ته داخل شو.د فلش پاکولو تجربوي ترتیب په جدول 1 کې لیست شوی.
| وسیله | SepaBean™ ماشین2 | |||
| کارتوسونه | 12 g SepaFlash C18 RP فلش کارتریج (کروی سیلیکا، 20 - 45 μm، 100 Å، د ترتیب شمیره: SW-5222-012-SP) | 12 g SepaFlash C18AQ RP فلش کارتریج (کروی سیلیکا، 20 - 45 μm، 100 Å، د ترتیب شمیره: SW-5222-012-SP(AQ)) | ||
| طول موج | 254 nm | |||
| ګرځنده پړاو | محلول A: اوبه محلول ب: میتانول | |||
| د بهېدنې کچه | 30 ملی لیتر/ دقیقه | |||
| د نمونې بارول | 300 ملی ګرامه (بریلینټ نیلي FCF د 86٪ پاکوالي سره) | |||
| تدریجي | وخت (CV) | محلول ب (٪) | وخت (CV) | محلول ب (٪) |
| 0 | 10 | 0 | 0 | |
| 10 | 10 | 10 | 0 | |
| 10.1 | 100 | 10.1 | 100 | |
| 17.5 | 100 | 17.5 | 100 | |
| 17.6 | 10 | 17.6 | 0 | |
| 22.6 | 10 | 22.6 | 0 | |
نتیجه او بحث
د SepaFlash C18AQ RP فلش کارتریج د نمونې پاکولو او پاکولو لپاره کارول شوی و.د مرحلې تدریجي کارول شوي چې په کې پاکې اوبه د ګرځنده مرحلې په توګه د ایولوشن په پیل کې کارول شوي او د 10 کالم حجم (CV) لپاره چلول کیږي.لکه څنګه چې په 3 شکل کې ښودل شوي، کله چې د ګرځنده مرحلې په توګه خالص اوبه کارول کیږي، نمونه په فلش کارتریج کې په بشپړه توګه ساتل شوي.بیا، په ګرځنده مرحله کې میتانول مستقیم 100٪ ته لوړ شوی او تدریجي د 7.5 CV لپاره ساتل شوی.نمونه له 11.5 څخه تر 13.5 CV پورې جلا شوې وه.په راټولو شویو برخو کې، د نمونې محلول د NaH2PO4 بفر محلول څخه میتانول ته بدل شوی.د لوړ آبی محلول سره پرتله کول، میتانول په راتلونکی مرحله کې د روټری تبخیر په واسطه لیرې کول خورا اسانه وو، کوم چې لاندې څیړنه اسانه کوي.
شکل 3. د نمونې فلش کروماتګرام په C18AQ کارتوس کې.
د قوي قطبي نمونو لپاره د C18AQ کارتریج او منظم C18 کارتریج د ساتلو چلند پرتله کولو لپاره ، موازي پرتله کولو ازموینه ترسره شوه.د SepaFlash C18 RP فلش کارتریج کارول شوی او د نمونې لپاره فلش کروماتګرام په 4 شکل کې ښودل شوی. د منظم C18 کارتوسونو لپاره، ترټولو لوړ زغمل شوي د اوبو پړاو تناسب شاوخوا 90٪ دی.له همدې امله د پیل درجه په 90٪ اوبو کې 10٪ میتانول ټاکل شوې.لکه څنګه چې په 4 شکل کې ښودل شوي، د C18 زنځیرونو د هایدروفوبیک مرحلې سقوط له امله چې د لوړ آبی تناسب له امله رامینځته شوی، نمونه په منظمه توګه په منظم C18 کارتریج کې ساتل شوې وه او په مستقیم ډول د ګرځنده مرحلې لخوا بهر شوې وه.د پایلې په توګه، د نمونې پاکولو یا پاکولو عملیات نشي بشپړ کیدی.
شکل 4. د نمونې فلش کروماتګرام په منظم C18 کارتوس کې.
د خطي تدریجي سره پرتله کول، د مرحلې تدریجي کارول لاندې ګټې لري:
1. د نمونې پاکولو لپاره د محلول کارولو او چلولو وخت کم شوی.
2. د هدف محصول په ګړندۍ چوکۍ کې راښکته کیږي، کوم چې د راټول شویو برخو حجم کموي او په دې توګه د لاندې روټري تبخیر او همدارنګه د وخت خوندي کولو اسانتیا برابروي.
3. راټول شوی محصول په میتانول کې دی چې په آسانۍ سره تبخیر کیږي، په دې توګه د وچولو وخت کم شوی.
په پایله کې، د نمونې پاکولو لپاره چې په کلکه قطبي یا خورا هایدروفیلیک وي، د SepaFlash C18AQ RP فلش کارتوسونه د چمتو کونکي فلش کروماتګرافي سیسټم سره یوځای کول SepaBean™ ماشین کولی شي ګړندی او موثر حل وړاندې کړي.
د SepaFlash بانډډ لړۍ C18 RP فلش کارتوسونو په اړه
دلته د SepaFlash C18AQ RP فلش کارتوسونو لړۍ شتون لري چې د سانټای ټیکنالوژۍ څخه مختلف مشخصات لري (لکه څنګه چې په 2 جدول کې ښودل شوي).
| د توکو شمیره | د کالم اندازه | د بهېدنې کچه (mL/min) | Max.Pressure (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5.4 ګرامه | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 ګرامه | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 ګرامه | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 ګرامه | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 ګرامه | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 ګرامه | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 ګرامه | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 ګرامه | 40-80 | 250/17.2 |
جدول 2. د SepaFlash C18AQ RP فلش کارتوس.
بسته بندي مواد: د لوړ موثریت کروی C18 (AQ) - بانډ شوی سیلیکا، 20 - 45 μm، 100 Å.
logy (لکه څنګه چې په 2 جدول کې ښودل شوي).
د پوسټ وخت: اګست-27-2018