Mingzu Yang, bo xu
Centrum badań i rozwoju aplikacji
Wstęp
Antybiotyki są klasą wtórnych metabolitów wytwarzanych przez mikroorganizmy (w tym bakterie, grzyby, aktynomycetes) lub podobne związki, które są chemicznie syntetyzowane lub częściowo-syntetyzowane. Antybiotyki mogą hamować wzrost i przeżycie innych mikroorganizmów. Pierwszy antybiotyk odkryty przez człowieka, penicylinę, został odkryty przez brytyjskiego mikrobiologa Alexandra Fleminga w 1928 r. Zauważył, że bakterie w pobliżu pleśni nie mogły rosnąć w naczyniu hodowlanym Staphylococcus, który został zanieczyszczony pleśnią. Postulował, że pleśń musi wydzielić substancję przeciwbakteryjną, którą nazwał penicyliną w 1928 r. Jednak w tym czasie nie zostały w tym czasie oczyszczone. W 1939 r. Ernst Chain i Howard Florey z Oxford University postanowili rozwinąć lek, który może leczyć infekcje bakteryjne. Po skontaktowaniu się z Flemingiem w celu uzyskania szczepów, z powodzeniem wyodrębnili i oczyszczali penicylinę ze szczepów. Za udany rozwój penicyliny jako leku terapeutycznego, Fleming, Chain i Florey podzielił nagrodę Nobla z 1945 roku w medycynie.
Antybiotyki stosuje się jako środki przeciwbakteryjne w leczeniu lub zapobieganiu infekcjom bakteryjnym. Istnieje kilka głównych kategorii antybiotyków stosowanych jako środki przeciwbakteryjne: antybiotyki β-laktamowe (w tym penicylina, cefalosporyna itp.), Antybiotyki aminoglikozydowe, antybiotyki makrolidowe obejmują biologiczne fermentacyjne, chlorampo-chilikoliko (całkowitą syntetyczne) i itd. Źródło antybiotyków biologiczne, chloramfenikolu. półsynteza i całkowita synteza. Antybiotyki wytwarzane przez fermentację biologiczną muszą być strukturalnie modyfikowane metodami chemicznymi ze względu na stabilność chemiczną, toksyczne skutki uboczne, spektrum przeciwbakteryjne i inne problemy. Po chemicznie zmodyfikowaniu antybiotyki mogą osiągnąć zwiększoną stabilność, zmniejszone skutki uboczne, rozszerzone spektrum przeciwbakteryjne, zmniejszoną odporność na leki, lepszą biodostępność, a tym samym poprawione działanie leczenia lekami. Dlatego półsyntetyczne antybiotyki są obecnie najpopularniejszym kierunkiem w rozwoju leków antybiotykowych.
W rozwoju półsyntetycznych antybiotyków antybiotyki mają właściwości niskiej czystości, wiele produktów ubocznych i złożonych składników, ponieważ pochodzą one z produktów fermentacji drobnoustrojów. W tym przypadku szczególnie ważna jest analiza i kontrola zanieczyszczeń w półsyntetycznych antybiotykach. Aby skutecznie zidentyfikować i scharakteryzować zanieczyszczenia, konieczne jest uzyskanie wystarczającej ilości zanieczyszczeń z syntetycznego produktu półsyntetycznych antybiotyków. Wśród powszechnie stosowanych technik przygotowania zanieczyszczeń chromatografia Flash jest opłacalną metodą z zaletami, takimi jak duża ilość ładowania próbki, niski koszt, oszczędzanie czasu itp. Chromatografia Flash była coraz bardziej stosowana przez syntetycznych badaczy.
W tym poście główny nieczystość półsyntetycznego antybiotyku aminoglikozydowego zastosowano jako próbkę i oczyszczoną przez kaseta SEPAFLASH C18AQ w połączeniu z systemem chromatografii flash Sepabean ™. Z powodzeniem uzyskano produkt docelowy spełniający wymagania, co sugeruje wysoce skuteczne rozwiązanie do oczyszczania tych związków.
Sekcja eksperymentalna
Próbka została uprzejmie dostarczona przez lokalną firmę farmaceutyczną. Próbka była rodzajem aminowych wielopierścieniowych węglowodanów, a jej struktura molekularna była podobna z antybiotykami aminoglikozydowymi. Polaryzacja próbki była dość wysoka, co czyni ją bardzo rozpuszczalną w wodzie. Schemat struktury molekularnej próbki pokazano na rycinie 1. Czystość surowej próbki wynosiła około 88%, jak analizowano za pomocą HPLC. W przypadku oczyszczania tych związków o wysokiej polarności próbka byłaby ledwo zatrzymana w regularnych kolumnach C18 zgodnie z naszymi wcześniejszymi doświadczeniami. Dlatego do oczyszczania próbki zastosowano kolumnę C18AQ.
Ryc. 1. Schemat struktury molekularnej próbki.
Aby przygotować roztwór próbki, 50 mg surowej próbki rozpuszczono w 5 ml czystej wodzie, a następnie ultradźwiękowe, aby stać się całkowicie wyraźnym roztworem. Roztwór próbki następnie wstrzyknięto do kolumny Flash za pomocą wtryskiwacza. Eksperymentalna konfiguracja oczyszczania Flash została wymieniona w tabeli 1.
| Instrument | SEPABEAN ™ Machine 2 | |
| Wkłady | 12 g SEPAFLASH C18AQ RP Flash Nabójca (krzemionka sferyczna, 20–45 μm, 100 Å, numer zamówienia ： SW-5222-012-SP (AQ)) | |
| Długość fali | 204 nm, 220 nm | |
| Faza mobilna | Rozpuszczalnik A: Woda Rozpuszczalnik B: Acetonitryl | |
| Natężenie przepływu | 15 ml/min | |
| Ładowanie próbki | 50 mg | |
| Gradient | Czas (min) | Rozpuszczalnik B (%) |
| 0 | 0 | |
| 19.0 | 8 | |
| 47,0 | 80 | |
| 52,0 | 80 | |
Wyniki i dyskusja
Chromatogram flash próbki na wkładce C18AQ pokazano na rycinie 2. Jak pokazano na rycinie 2, wysoce polarną próbkę skutecznie zatrzymano na wkładce C18AQ. Po liofolizacji zebranych frakcji produkt docelowy miał czystość 96,2% (jak pokazano na rycinie 3) według analizy HPLC. Wyniki wskazują, że oczyszczony produkt można dalej wykorzystać w następnym etapie badań i rozwoju.
Ryc. 2. Chromatogram flash próbki na wkładce C18AQ.
Rysunek 3. Chromatogram HPLC produktu docelowego.
Podsumowując, SEPAFLASH C18AQ RP Flash Case w połączeniu z maszyną do chromatografii flash Sepabean ™ może zaoferować szybkie i skuteczne rozwiązanie do oczyszczania wysoce polarnych próbek.
O SEPAFLASH C18AQ RP Flash Naboczy
Istnieje seria kaset flash SEPAFLASH C18AQ RP z różnymi specyfikacjami z technologii Santai (jak pokazano w tabeli 2).
| Numer pozycji | Rozmiar kolumny | Natężenie przepływu (ML/min) | MAX. Pressure (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP (AQ) | 5,4 g | 5-15 | 400/27,5 |
| SW-5222-012-SP (AQ) | 20 g | 10-25 | 400/27,5 |
| SW-5222-025-SP (AQ) | 33 g | 10-25 | 400/27,5 |
| SW-5222-040-SP (AQ) | 48 g | 15-30 | 400/27,5 |
| SW-5222-080-SP (AQ) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP (AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20,7 |
| SW-5222-220-SP (AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20,7 |
| SW-5222-330-SP (AQ) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
Tabela 2. SEPAFLASH C18AQ RP Flash Wkłady. Materiały opakowani: krzemionka z kulistą wysokowydajną C18 (AQ), 20–45 μm, 100 Å.
Więcej informacji na temat szczegółowych specyfikacji maszyny SEPABEAN ™ lub informacji o zamawianiu w SEPAFLASH Series Flash Flash, odwiedź naszą stronę internetową.
Czas po: 26-2018 października