Påføringen av C18AQ -kolonner i rensing av sterke polare peptider

Rui Huang, Bo Xu
Søknad FoU -senter

Introduksjon
Et peptid er en forbindelse sammensatt av aminosyrer, som hver har unike fysiske og kjemiske egenskaper på grunn av de forskjellige typene og rekkefølgen på aminosyrerester som utgjør dens sekvens. Med utviklingen av kjemisk syntese av fast fase har den kjemiske syntesen av forskjellige aktive peptider gjort store fremskritt. På grunn av den kompliserte sammensetningen av peptidet oppnådd ved fastfasesyntese, bør imidlertid sluttproduktet renses ved pålitelige separasjonsmetoder. De ofte brukte rensemetodene for peptider inkluderer ionutvekslingskromatografi (IEC) og reversert fase med høy ytelse væskekromatografi (RP-HPLC), som har ulemper med lav prøvelastingskapasitet, høye kostnader for separasjonsmedier, komplisert og kostbar separasjonsutstyr, et vellykket rensing av små molekylpepsjoner (mww <1 kw <1 kw <1 kw <1 kw. som en sepaflash RP C18-kassett ble brukt for rask rensing av tymopentin (TP-5) og målproduktet som oppfyller kravene ble oppnådd.

Figur 1. 20 Vanlige aminosyrer (gjengitt fra www.bachem.com).

Det er 20 typer aminosyrer som er vanlige i sammensetningen av peptider. Disse aminosyrene kan deles inn i følgende grupper i henhold til deres polaritet og syre-baseegenskap: ikke-polar (hydrofob), polar (uladet), sur eller basisk (som vist i figur 1). I en peptidsekvens, hvis aminosyrene som utgjør sekvensen, er stort sett polare (som markert i rosa farge i figur 1), slik som cystein, glutamin, asparagin, serin, treonin, tyrosin, etc. da kan dette peptidet ha en sterk polaritet og være sterkt løselig i vann. Under rensingsprosedyren for disse sterke polare peptidprøvene ved reverseringsfasekromatografi, vil et fenomen kalt hydrofob fase kollaps oppstå (se en tidligere publisert applikasjonsnotat av Santai-teknologier: hydrofob fase kollaps, AQ reverserte fasekromatografisolonger og deres anvendelser). Sammenlignet med de vanlige C18 -kolonnene, er de forbedrede C18aq -kolonnene mest egnet for rensing av sterke polare eller hydrofile prøver. I dette innlegget ble et sterkt polært peptid benyttet som prøven og renset av en C18aq -kolonne. Som et resultat ble målproduktet som oppfyller kravene oppnådd og kunne brukes i følgende forskning og utvikling.