होङचेङ वाङ, बो जू
आवेदन आर एन्ड डी केन्द्र
परिचय
स्थिर चरण र मोबाइल चरणको सापेक्ष ध्रुवता अनुसार, तरल क्रोमाटोग्राफीलाई सामान्य चरण क्रोमाटोग्राफी (NPC) र उल्टो चरण क्रोमाटोग्राफी (RPC) मा विभाजन गर्न सकिन्छ।RPC को लागि, मोबाइल चरणको ध्रुवता स्थिर चरणको भन्दा बलियो छ।RPC यसको उच्च दक्षता, राम्रो रिजोल्युसन र स्पष्ट रिटेन्सन मेकानिज्मको कारणले तरल क्रोमेटोग्राफी विभाजन मोडहरूमा सबैभन्दा व्यापक रूपमा प्रयोग हुने एक भएको छ।तसर्थ RPC विभिन्न ध्रुवीय वा गैर-ध्रुवीय यौगिकहरूको अलगाव र शुद्धीकरणको लागि उपयुक्त छ, जसमा अल्कालोइड, कार्बोहाइड्रेट, फ्याटी एसिड, स्टेरोइड, न्यूक्लिक एसिड, एमिनो एसिड, पेप्टाइड्स, प्रोटिन, आदि समावेश छन्। RPC मा, सबैभन्दा सामान्य रूपमा प्रयोग हुने स्थिर चरण हो। सिलिका जेल म्याट्रिक्स जुन C18, C8, C4, फिनाइल, cyano, एमिनो, आदि सहित विभिन्न कार्यात्मक समूहहरूसँग बाँडिएको छ। यी बन्डेड कार्यात्मक समूहहरू मध्ये, सबैभन्दा व्यापक रूपमा प्रयोग गरिएको C18 हो।यो अनुमान गरिएको छ कि RPC को 80% भन्दा बढी अब C18 बन्डेड चरण प्रयोग गर्दैछ।त्यसैले C18 क्रोमेटोग्राफी स्तम्भ प्रत्येक प्रयोगशालाको लागि एक सार्वभौमिक स्तम्भ भएको छ।
यद्यपि C18 स्तम्भहरू अनुप्रयोगहरूको धेरै विस्तृत दायरामा प्रयोग गर्न सकिन्छ, तथापि, धेरै ध्रुवीय वा अत्यधिक हाइड्रोफिलिक नमूनाहरूको लागि, नियमित C18 स्तम्भहरूमा यस्ता नमूनाहरू शुद्ध गर्न प्रयोग गर्दा समस्या हुन सक्छ।RPC मा, सामान्यतया प्रयोग हुने इल्युसन सॉल्भेन्टहरू तिनीहरूको ध्रुवता अनुसार अर्डर गर्न सकिन्छ: पानी < मेथानोल < एसिटोनिट्रिल < इथानोल < टेट्राहाइड्रोफुरान < आइसोप्रोपनोल।यी नमूनाहरू (बलियो ध्रुवीय वा अत्यधिक हाइड्रोफिलिक) को लागि स्तम्भमा राम्रो अवधारण सुनिश्चित गर्न, जलीय प्रणालीको उच्च अनुपात मोबाइल चरणको रूपमा प्रयोग गर्न आवश्यक छ।यद्यपि, मोबाइल चरणको रूपमा शुद्ध पानी प्रणाली (शुद्ध पानी वा शुद्ध नुन घोल सहित) प्रयोग गर्दा, C18 स्तम्भको स्थिर चरणमा लामो कार्बन चेनले पानीलाई बेवास्ता गर्छ र एकअर्कासँग मिसाउँछ, परिणामस्वरूप तात्कालिक कमी हुन्छ। स्तम्भको अवधारण क्षमता वा कुनै अवधारण छैन।यस घटनालाई "हाइड्रोफोबिक चरण पतन" भनिन्छ (चित्र 1 को बायाँ भागमा देखाइएको छ)।यद्यपि यो अवस्था उल्टाउन सकिने छ जब स्तम्भलाई मेथानोल वा एसिटोनिट्रिल जस्ता जैविक विलायकहरूले धोइन्छ, यसले अझै पनि स्तम्भमा क्षति पुर्याउन सक्छ।त्यसैले यस्तो अवस्था आउन नदिन आवश्यक छ ।
चित्र 1. नियमित C18 स्तम्भ (बायाँ) र C18AQ स्तम्भ (दायाँ) मा सिलिका जेलको सतहमा बन्डेड चरणहरूको योजनाबद्ध रेखाचित्र।
माथि उल्लेखित समस्याहरूलाई सम्बोधन गर्न, क्रोमेटोग्राफिक प्याकिंग सामग्री निर्माताहरूले प्राविधिक सुधारहरू गरेका छन्।यी सुधारहरू मध्ये एउटा सिलिका म्याट्रिक्सको सतहमा केही परिमार्जनहरू गर्दैछ, जस्तै हाइड्रोफिलिक साइनो समूहहरूको परिचय (चित्र 1 को दायाँ भागमा देखाइएको छ), सिलिका जेलको सतहलाई थप हाइड्रोफिलिक बनाउन।यसरी सिलिका सतहमा C18 चेनहरू अत्यधिक जलीय अवस्थाहरूमा पूर्ण रूपमा विस्तार गर्न सकिन्छ र हाइड्रोफोबिक चरणको पतनबाट बच्न सकिन्छ।यी परिमार्जित C18 स्तम्भहरूलाई जलीय C18 स्तम्भहरू भनिन्छ, अर्थात् C18AQ स्तम्भहरू, जुन अत्यधिक जलीय उत्सर्जन अवस्थाहरूको लागि डिजाइन गरिएको हो र 100% जलीय प्रणालीलाई सहन सक्छ।C18AQ स्तम्भहरू जैविक एसिड, पेप्टाइड्स, न्यूक्लियोसाइडहरू र पानीमा घुलनशील भिटामिनहरू सहित बलियो ध्रुवीय यौगिकहरूको विभाजन र शुद्धीकरणमा व्यापक रूपमा लागू गरिएको छ।
डिसल्टिङ नमूनाहरूको लागि फ्ल्यास शुद्धीकरणमा C18AQ स्तम्भहरूको विशिष्ट अनुप्रयोगहरू मध्ये एक हो, जसले नमूना विलायकमा नुन वा बफर कम्पोनेन्टहरू हटाउँदछ जसले पछिको अध्ययनहरूमा नमूनाको आवेदनलाई सहज बनाउँदछ।यस पोष्टमा, बलियो ध्रुवता भएको ब्रिलियन्ट ब्लू FCF नमूनाको रूपमा प्रयोग गरिएको थियो र C18AQ स्तम्भमा शुद्ध गरिएको थियो।नमूना विलायकलाई बफर समाधानबाट जैविक विलायकद्वारा प्रतिस्थापन गरिएको थियो, यसरी निम्न रोटरी वाष्पीकरणको साथसाथै सॉल्भेन्टहरू र सञ्चालन समयको बचत हुन्छ।यसबाहेक, नमूनामा केही अशुद्धताहरू हटाएर नमूनाको शुद्धता सुधार गरिएको थियो।
प्रयोगात्मक खण्ड
चित्र २. नमूनाको रासायनिक संरचना।
ब्रिलियन्ट ब्लू FCF यस पोस्टमा नमूनाको रूपमा प्रयोग गरिएको थियो।कच्चा नमूनाको शुद्धता 86% थियो र नमूनाको रासायनिक संरचना चित्र 2 मा देखाइएको थियो। नमूना समाधान तयार गर्न, ब्रिलियन्ट ब्लू FCF को 300 mg पाउडर कच्चा ठोस 1 M NaH2PO4 बफर घोलमा घोलियो र राम्रो बन्नको लागि हल्लायो। एक पूर्ण स्पष्ट समाधान।नमूना समाधान त्यसपछि इन्जेक्टरद्वारा फ्लैश स्तम्भमा इन्जेक्ट गरिएको थियो।फ्ल्यास शुद्धीकरणको प्रयोगात्मक सेटअप तालिका 1 मा सूचीबद्ध छ।
| साधन | SepaBean™ मेसिन2 | |||
| कारतूस | 12 g SepaFlash C18 RP फ्ल्यास कार्ट्रिज (गोलाकार सिलिका, 20 - 45 μm, 100 Å, अर्डर नम्बर: SW-5222-012-SP) | 12 g SepaFlash C18AQ RP फ्ल्यास कार्ट्रिज (गोलाकार सिलिका, 20 - 45 μm, 100 Å, अर्डर नम्बर：SW-5222-012-SP(AQ)) | ||
| तरंगदैर्ध्य | २५४ एनएम | |||
| मोबाइल चरण | विलायक A: पानी विलायक बी: मेथानोल | |||
| बग्ने गति | ३० एमएल/मिनेट | |||
| नमूना लोड गर्दै | 300 मिलीग्राम (86% को शुद्धता संग शानदार ब्लू FCF) | |||
| ग्रेडियन्ट | समय (CV) | विलायक B (%) | समय (CV) | विलायक B (%) |
| 0 | 10 | 0 | 0 | |
| 10 | 10 | 10 | 0 | |
| १०.१ | १०० | १०.१ | १०० | |
| १७.५ | १०० | १७.५ | १०० | |
| १७.६ | 10 | १७.६ | 0 | |
| २२.६ | 10 | २२.६ | 0 | |
परिणाम र छलफल
एक SepaFlash C18AQ RP फ्ल्यास कार्ट्रिज नमूना डिसल्टिङ र शुद्धीकरणको लागि प्रयोग गरिएको थियो।चरण ढाँचा प्रयोग गरिएको थियो जसमा शुद्ध पानीलाई मोबाइल चरणको रूपमा इलुसनको सुरुमा प्रयोग गरिएको थियो र 10 स्तम्भ भोल्युमहरू (CV) को लागि चलाइएको थियो।चित्र 3 मा देखाइएको रूपमा, मोबाइल चरणको रूपमा शुद्ध पानी प्रयोग गर्दा, नमूना फ्ल्यास कार्ट्रिजमा पूर्ण रूपमा राखिएको थियो।अर्को, मोबाइल चरणमा मेथानोल प्रत्यक्ष रूपमा 100% मा बढाइएको थियो र 7.5 CV को लागि ग्रेडियन्ट कायम गरिएको थियो।नमूना 11.5 देखि 13.5 CV सम्म बाहिर निकालिएको थियो।संकलित अंशहरूमा, नमूना समाधान NaH2PO4 बफर समाधानबाट मेथानोलमा प्रतिस्थापन गरिएको थियो।अत्यधिक जलीय समाधानसँग तुलना गर्दा, पछिको चरणमा रोटरी वाष्पीकरणद्वारा मेथानोल हटाउन धेरै सजिलो थियो, जसले निम्न अनुसन्धानलाई सहज बनाउँछ।
चित्र 3. C18AQ कार्ट्रिजमा नमूनाको फ्ल्यास क्रोमेटोग्राम।
बलियो ध्रुवता को नमूनाहरु को लागी C18AQ कार्ट्रिज र नियमित C18 कार्ट्रिज को अवधारण व्यवहार को तुलना गर्न, समानांतर तुलना परीक्षण प्रदर्शन गरिएको थियो।एक SepaFlash C18 RP फ्ल्यास कार्ट्रिज प्रयोग गरिएको थियो र नमूनाको लागि फ्ल्यास क्रोमेटोग्राम चित्र 4 मा देखाइएको थियो। नियमित C18 कारतूसहरूको लागि, उच्चतम सहनशील जलीय चरण अनुपात लगभग 90% हो।त्यसकारण 90% पानीमा 10% मिथानोलमा स्टार्ट ग्रेडियन्ट सेट गरिएको थियो।चित्र 4 मा देखाइएको रूपमा, उच्च जलीय अनुपातको कारण C18 चेनहरूको हाइड्रोफोबिक चरण पतनको कारणले गर्दा, नमूना नियमित C18 कार्ट्रिजमा मात्रै राखिएको थियो र मोबाइल चरणद्वारा सीधा बाहिर निकालिएको थियो।नतिजाको रूपमा, नमूना डिसल्टिङ वा शुद्धीकरणको कार्य पूरा हुन सक्दैन।
चित्र 4. नियमित C18 कार्ट्रिजमा नमूनाको फ्ल्यास क्रोमेटोग्राम।
रैखिक ढाँचासँग तुलना गर्दै, चरण ढाँचाको प्रयोगमा निम्न फाइदाहरू छन्:
1. नमूना शुद्धीकरणको लागि विलायक प्रयोग र चल्ने समय घटाइएको छ।
2. लक्षित उत्पादन तीव्र चुचुरोमा बाहिर निस्कन्छ, जसले सङ्कलन गरिएका अंशहरूको मात्रा घटाउँछ र यसरी निम्न रोटरी वाष्पीकरणको साथसाथै समय बचत गर्न पनि मद्दत गर्छ।
3. सङ्कलन गरिएको उत्पादन मेथानोलमा हुन्छ जुन वाष्पीकरण गर्न सजिलो हुन्छ, यसरी सुकाउने समय कम हुन्छ।
अन्त्यमा, कडा ध्रुवीय वा अत्यधिक हाइड्रोफिलिक भएको नमूनाको शुद्धिकरणको लागि, SepaFlash C18AQ RP फ्ल्यास कारतूसहरू तयारी फ्लैश क्रोमेटोग्राफी प्रणालीसँग संयोजन गर्ने SepaBean™ मेसिनले छिटो र प्रभावकारी समाधान प्रस्ताव गर्न सक्छ।
SepaFlash Bonded श्रृंखला C18 RP फ्ल्यास कारतूसहरूको बारेमा
त्यहाँ Santai टेक्नोलोजी (तालिका 2 मा देखाइएको रूपमा) बाट विभिन्न विशिष्टताहरु संग SepaFlash C18AQ RP फ्ल्यास कारतूस को एक श्रृंखला छ।
| वस्तु नम्बर | स्तम्भ आकार | बग्ने गति (mL/मिनेट) | अधिकतम दबाव (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | ५.४ ग्राम | ५-१५ | ४००/२७.५ |
| SW-5222-012-SP(AQ) | २० ग्राम | १०-२५ | ४००/२७.५ |
| SW-5222-025-SP(AQ) | ३३ ग्राम | १०-२५ | ४००/२७.५ |
| SW-5222-040-SP(AQ) | ४८ ग्राम | १५-३० | ४००/२७.५ |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 ग्राम | २५-५० | ३५०/२४.० |
| SW-5222-120-SP(AQ) | १५५ ग्राम | ३०-६० | ३००/२०.७ |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 ग्राम | 40-80 | ३००/२०.७ |
| SW-5222-330-SP(AQ) | ४२० ग्राम | 40-80 | 250/17.2 |
तालिका 2. SepaFlash C18AQ RP फ्ल्यास कार्ट्रिजहरू।
प्याकिङ सामग्री: उच्च दक्षता गोलाकार C18 (AQ)-बन्डेड सिलिका, 20 - 45 μm, 100 Å।
logy (तालिका 2 मा देखाइएको छ)।
पोस्ट समय: अगस्ट-27-2018