Rui Huang ၊ Bo Xu
လျှောက်လွှာ R&D စင်တာ
နိဒါန်း
peptide သည် အမိုင်နိုအက်ဆစ်များဖြင့် ဖွဲ့စည်းထားသည့် ဒြပ်ပေါင်းတစ်ခုဖြစ်ပြီး တစ်ခုစီတွင် အမျိုးအစားများနှင့် အမိုင်နိုအက်ဆစ်အကြွင်းအကျန်များ၏ အစီအစဥ်များကြောင့် ထူးခြားသော ရုပ်ပိုင်းဆိုင်ရာနှင့် ဓာတုဂုဏ်သတ္တိများ ရှိသည်။အစိုင်အခဲအဆင့် ဓာတုပေါင်းစပ်မှု ဖွံ့ဖြိုးတိုးတက်လာသည်နှင့်အမျှ၊ တက်ကြွသော peptides အမျိုးမျိုး၏ ဓာတုပေါင်းစပ်ပေါင်းစပ်မှုသည် ကြီးစွာသောတိုးတက်မှုကို ရရှိခဲ့သည်။သို့ရာတွင်၊ အစိုင်အခဲအဆင့်ပေါင်းစပ်မှုမှရရှိသော peptide ၏ရှုပ်ထွေးသောဖွဲ့စည်းမှုကြောင့်၊ နောက်ဆုံးထုတ်ကုန်အား ယုံကြည်စိတ်ချရသော ခွဲထုတ်နည်းများဖြင့် သန့်စင်သင့်သည်။peptides အတွက် အသုံးများသော သန့်စင်သည့်နည်းလမ်းများတွင် ion exchange chromatography (IEC) နှင့် reversed-phase high performance liquid chromatography (RP-HPLC) တို့ ပါဝင်ပြီး နမူနာတင်နိုင်မှု နည်းပါးခြင်း၊ ခွဲထုတ်ခြင်း မီဒီယာ၏ ကုန်ကျစရိတ်မြင့်မားခြင်း၊ ရှုပ်ထွေးပြီး ငွေကုန်ကြေးကျများသော ခွဲထွက်ပစ္စည်းများ၊ စသည်တို့။ သေးငယ်သောမော်လီကျူး peptides (MW < 1 kDa) ကို လျင်မြန်စွာ သန့်စင်ရန်အတွက် Santai Technologies မှ အောင်မြင်သော application case ကို ယခင်က ထုတ်ဝေခဲ့ပြီး၊ SepaFlash RP C18 ကျည်တောင့်ကို thymopentin (TP-5) နှင့် လျင်မြန်စွာသန့်စင်ရန်အတွက် အသုံးပြုခဲ့သည်။ ရည်မှန်းထားသော ထုတ်ကုန် လိုအပ်ချက်များနှင့် ကိုက်ညီမှု ရရှိခဲ့ပါသည်။
ပုံ 1. ဘုံအမိုင်နိုအက်ဆစ် 20 (www.bachem.com မှ ပြန်လည်ထုတ်လုပ်သည်)။
peptides ၏ဖွဲ့စည်းမှုတွင်အဖြစ်များသောအမိုင်နိုအက်ဆစ်အမျိုးအစား 20 ရှိသည်။ဤအမိုင်နိုအက်ဆစ်များကို ၎င်းတို့၏ဝင်ရိုးစွန်းနှင့် အက်ဆစ်အခြေခံဂုဏ်သတ္တိများအလိုက် အောက်ပါအုပ်စုများသို့ ပိုင်းခြားနိုင်သည်- ဝင်ရိုးစွန်းမဟုတ်သော (hydrophobic)၊ ဝင်ရိုးစွန်း (မသွင်းထား)၊ အက်စစ်ဓာတ် သို့မဟုတ် အခြေခံ (ပုံ 1 တွင်ပြထားသည့်အတိုင်း)။peptide အစီအစဥ်တစ်ခုတွင်၊ အစီအစဥ်တွင်ပါဝင်သော အမိုင်နိုအက်ဆစ်များသည် အများအားဖြင့် ဝင်ရိုးစွန်းများ (ပုံ 1 တွင် ပန်းရောင်ဖြင့် မှတ်သားထားသည့်အတိုင်း) ဖြစ်ပါက၊ Cysteine၊ Glutamine၊ Asparagine၊ Serine၊ Threonine၊ Tyrosine စသည်တို့သည် ဤ peptide တွင် အားကောင်းနေပေမည်။ polarity နှင့် ရေတွင် အလွန်ပျော်ဝင်သည်။ပြောင်းပြန်-အဆင့် ခရိုမာတိုပညာဖြင့် ဤပြင်းထန်သော ဝင်ရိုးစွန်းပပ်ဆိုဒ်နမူနာများအတွက် သန့်စင်ရေးလုပ်ငန်းစဉ်အတွင်း၊ hydrophobic အဆင့်ပြိုကျခြင်းဟုခေါ်သော ဖြစ်စဉ်တစ်ခု ဖြစ်ပေါ်လိမ့်မည် (Santai Technologies မှ ယခင်ထုတ်ဝေခဲ့သော လျှောက်လွှာမှတ်စုကို ကိုးကားပါ- Hydrophobic Phase Collapse၊ AQ Reversed Phase Chromatography Columns နှင့် ၎င်းတို့၏ Applications)။ပုံမှန် C18 ကော်လံများနှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါက ပိုမိုကောင်းမွန်သော C18AQ ကော်လံများသည် အားကောင်းသော ဝင်ရိုးစွန်း သို့မဟုတ် hydrophilic နမူနာများကို သန့်စင်ရန်အတွက် အသင့်တော်ဆုံးဖြစ်သည်။ဤပို့စ်တွင်၊ အားကောင်းသောဝင်ရိုးစွန်း Peptide ကို နမူနာအဖြစ် အသုံးပြုပြီး C18AQ ကော်လံဖြင့် သန့်စင်ခဲ့သည်။ရလဒ်အနေဖြင့် လိုအပ်ချက်များ ပြည့်မီသော ပစ်မှတ်ထုတ်ကုန်ကို ရရှိပြီး အောက်ပါ သုတေသနနှင့် ဖွံ့ဖြိုးတိုးတက်မှုတွင် အသုံးပြုနိုင်မည်ဖြစ်သည်။
| တူရိယာ | SepaBean™စက် ၂ | |||
| ပုံးများ | 12 g SepaFlash C18 RP ဖလက်ရှ် ကျည်တောင့် (လုံးပတ် ဆီလီကာ၊ 20 - 45 μm၊ 100 Å၊ မှာယူမှု နံပါတ်：SW-5222-012-SP) | 12 g SepaFlash C18AQ RP ဖလက်ရှ် ကျည်တောင့် (လုံးပတ် ဆီလီကာ၊ 20 - 45 μm၊ 100 Å၊ မှာယူမှု နံပါတ်：SW-5222-012-SP(AQ)) | ||
| လှိုင်းအလျား | 254 nm၊ 220 nm | 214 nm | ||
| မိုဘိုင်းအဆင့် | Solvent A: ရေ Solvent B: Acetonitrile | |||
| စီးဆင်းနှုန်း | 15 mL/မိနစ် | 20 mL/မိနစ် | ||
| နမူနာ တင်ခြင်း။ | 30 မီလီဂရမ် | |||
| အရောင်ခြယ်ခြင်း။ | အချိန် (CV) | Solvent B (%) | အချိန် (မိနစ်) | Solvent B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| ၁.၀ | 0 | ၁.၀ | 4 | |
| ၁၀.၀ | 6 | ၇.၅ | 18 | |
| ၁၂.၅ | 6 | ၁၃.၀ | 18 | |
| ၁၆.၅ | 10 | ၁၄.၀ | 22 | |
| 19.0 | 41 | ၁၅.၅ | 22 | |
| ၂၁.၀ | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| ၂၉.၀ | 87 | |||
ရလဒ်နှင့်ဆွေးနွေးခြင်း
ပုံမှန် C18 ကော်လံနှင့် C18AQ ကော်လံအကြား ဝင်ရိုးစွန်း peptide နမူနာအတွက် သန့်စင်ခြင်းစွမ်းဆောင်ရည်ကို နှိုင်းယှဉ်ရန်၊ ကျွန်ုပ်တို့သည် နမူနာ၏ flash သန့်စင်မှုအတွက် ပုံမှန် C18 ကော်လံကို အသုံးပြုခဲ့သည်။ပုံ 2 တွင်ပြထားသည့်အတိုင်း၊ မြင့်မားသော aqueous ratio ကြောင့်ဖြစ်ရသည့် C18 ကွင်းဆက်များ၏ hydrophobic အဆင့်ပြိုကျမှုကြောင့်၊ နမူနာအား ပုံမှန် C18 ကျည်တောင့်တွင် ထိန်းသိမ်းထားရုံသာရှိပြီး မိုဘိုင်းအဆင့်မှ တိုက်ရိုက်ထုတ်နှုတ်ခြင်းခံရသည်။ရလဒ်အနေဖြင့် နမူနာအား ထိရောက်စွာ ခွဲထုတ်ပြီး သန့်စင်ခြင်း မရှိခဲ့ပါ။
ပုံ 2။ ပုံမှန် C18 ကျည်တောင့်တစ်ခုရှိ နမူနာ၏ flash chromatogram။
ထို့နောက်၊ နမူနာ၏ flash သန့်စင်မှုအတွက် C18AQ ကော်လံကို အသုံးပြုခဲ့သည်။ပုံ 3 တွင်ပြထားသည့်အတိုင်း peptide ကို ကော်လံပေါ်တွင် ထိထိရောက်ရောက် ထိန်းသိမ်းထားပြီး ဖယ်ထုတ်လိုက်သည်။ပစ်မှတ်ထုတ်ကုန်ကို ကုန်ကြမ်းနမူနာရှိ အညစ်အကြေးများနှင့် ခွဲထုတ်ပြီး စုဆောင်းခဲ့သည်။lyophilization နှင့် HPLC မှ ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာပြီးနောက်၊ သန့်စင်ထားသော ထုတ်ကုန်သည် 98.2% သန့်စင်ပြီး နောက်တစ်ဆင့် သုတေသနနှင့် ဖွံ့ဖြိုးတိုးတက်မှုအတွက် ထပ်မံအသုံးပြုနိုင်ပါသည်။
ပုံ 3. C18AQ ကျည်တောင့်ရှိ နမူနာ၏ ဖလက်ရှ် ခရိုမာတိုဂရမ်။
နိဂုံးချုပ်အနေဖြင့်၊ SepaFlash C18AQ RP flash ယမ်းတောင့်ကို flash chromatography စနစ် SepaBean နှင့်ပေါင်းစပ်ထားသည်။™စက်သည် အားကောင်းသော ဝင်ရိုးစွန်း သို့မဟုတ် hydrophilic နမူနာများကို သန့်စင်ရန်အတွက် လျင်မြန်ပြီး ထိရောက်သော အဖြေကို ပေးစွမ်းနိုင်သည်။
Santai Technology မှ မတူညီသော သတ်မှတ်ချက်များဖြင့် SepaFlash C18AQ RP flash cartridges စီးရီးများ ရှိပါသည်။ (ဇယား 2 တွင်ပြထားသည့်အတိုင်း)။
| ပစ္စည်းနံပါတ် | ကော်လံအရွယ်အစား | စီးဆင်းနှုန်း (မီလီဂရမ်/မိနစ်) | Max.Pressure (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5.4 ဂရမ် | ၅-၁၅ | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 ဂရမ် | ၁၀-၂၅ | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 ဂရမ် | ၁၀-၂၅ | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | ၄၈ ဂရမ် | ၁၅-၃၀ | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 ဂရမ် | ၂၅-၅၀ | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 ဂရမ် | ၃၀-၆၀ | ၃၀၀/၂၀.၇ |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 ဂရမ် | ၄၀-၈၀ | ၃၀၀/၂၀.၇ |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 ဂရမ် | ၄၀-၈၀ | 250/17.2 |
ဇယား 2. SepaFlash C18AQ RP flash ကျည်တောင့်များ။ထုပ်ပိုးပစ္စည်းများ- စွမ်းဆောင်ရည်မြင့် လုံးပတ် C18(AQ)-bonded ဆီလီကာ၊ 20 - 45 μm၊ 100 Å။
SepaBean™ စက်၏အသေးစိတ်သတ်မှတ်ချက်များ၊ သို့မဟုတ် SepaFlash စီးရီးဖလက်ရ်ှကျည်တောင့်များဆိုင်ရာ မှာယူမှုအချက်အလက်များအတွက် နောက်ထပ်အချက်အလက်များအတွက် ကျွန်ုပ်တို့၏ဝဘ်ဆိုဒ်သို့ ဝင်ရောက်ကြည့်ရှုပါ။
တင်ချိန်- အောက်တိုဘာ ၁၂-၂၀၁၈