Hongcheng Wang, Bo Xu
လျှောက်လွှာ R & D စင်တာ
နိဒါန်း
Polarity Polarity ၏နှိုင်းယှဉ် polarity များအရအရည်ကြည်လင်သော phasomography အရည် chromatchography ကိုပုံမှန်အဆင့် Chromathography (NPC) သို့ခွဲခြားနိုင်သည်။ RPC အတွက်မိုဘိုင်းအဆင့်၏ polarity သည်စာရေးကိရိယာအဆင့်ထက်ပိုမိုအားကောင်းသည်။ RPC သည်စွမ်းဆောင်ရည်မြင့်မားခြင်း, ကောင်းမွန်သော resolution နှင့်ရှင်းလင်းသော retention ယန္တရားကြောင့်အရည် chromatoget နာများခွဲခြာခြင်းဆိုင်ရာ mode များတွင်အများဆုံးအသုံးပြုသောတစ်ခုဖြစ်လာသည်။ ထို့ကြောင့် RPC သည်အယ်လ်လိုင်လွိုက်, ဘိုနိုဗိုတို, steroids, steroids, peptides, peptides, peptides, peptides, peptides, peptides, peptides များ, Phenyl, Cyano, အင်းနိုစသည်တို့ပါ 0 င်သည်။ ခန့်မှန်းခြေအားဖြင့် RPC ၏ 80% ကျော်သည် C18 Bonded Phase ကိုအသုံးပြုနေသည်ဟုခန့်မှန်းရသည်။ ထို့ကြောင့် C18 Chromatography ကော်လံသည်ဓာတ်ခွဲခန်းတိုင်းအတွက်မဖြစ်မနေလိုအပ်သောကမ္ဘာလုံးဆိုင်ရာကော်လံဖြစ်လာသည်။
C18 ကော်လံကိုကျယ်ပြန့်သော application များအနေဖြင့်အသုံးချပရိုဂရမ်များ၌အသုံးပြုနိုင်သော်လည်းအချို့သောနမူနာများမှာပုံမှန် c18 ကော်လံများတွင်ပုံမှန် C18 ကော်လံများတွင်ပုံမှန် c18 ကော်လံများတွင်ပြ problems နာများရှိနိုင်သည်။ RPC တွင်များသောအားဖြင့်အသုံးပြုသော attents solvents များကိုသူတို့၏ Polarity နှင့်အညီအမိန့်ပေးနိုင်သည်။ ဤနမူနာများအတွက်ကော်လံ (အားကြီးသော Polar သို့မဟုတ်အလွန်အမင်း hydrophilic) အတွက်ကောင်းမွန်သောထိန်းသိမ်းမှုကိုအာမခံရန် Mobile Phase အဖြစ်အသုံးပြုရန်အတွက်ရေအကြောင်းအကောင်းအချိုးအစားမြင့်မားသည်။ သို့သော်, စင်ကြယ်သောရေသို့မဟုတ်စင်ကြယ်သောဆားငန်သောဆားင်များအပါအ 0 င်ရေသန့်စင်ခြင်း (စင်ကြယ်သောဆားငန်ခြင်းတို့ပါ 0 င်သည့်ဆားစနစ်) ကိုလက်ကိုင်ဖုန်းဖြင့်အသုံးပြုသည့်အခါ C18 ကော်လံ၏ရှည်လျားသောကာဗွန်ကွင်းဆက်သည်ရေကိုရှောင်ရှားကာကော်လံ၏ထိန်းသိမ်းရေးစွမ်းရည်သို့မဟုတ်လုံးဝမဖယ်ရှားနိုင်သည့်နည်းစနစ်ကိုလျော့နည်းစေသည်။ ဤဖြစ်စဉ်ကို "hydrophobic အဆင့်ပြိုကျမှု" ဟုခေါ်သည် (ပုံ 1 ၏ဘယ်ဘက်တွင်ပြထားတဲ့အတိုင်း) ။ Methanol (သို့) acontonitrile စသည့်အော်ဂဲနစ်အရည်များနှင့်အတူကော်လံကိုကော်လံကိုဆေးကြောပါသည့်အခါဤအခြေအနေသည်ပြောင်းပြန်ဖြစ်သော်လည်း၎င်းသည်ကော်လံကိုပျက်စီးစေနိုင်သည်။ ထို့ကြောင့်ဤအခြေအနေကိုမဖြစ်ပျက်နိုင်အောင်တားဆီးရန်လိုအပ်သည်။
ပုံ 1 ။ Silica Gel ၏မျက်နှာပြင်ပေါ်ရှိ silica gel ၏မျက်နှာပြင်ရှိ Silica Gel ၏မျက်နှာပြင်ပေါ်ရှိ Silica Gel မျက်နှာပြင်ရှိ Silica Gel မျက်နှာပြင်ရှိ Silica Gel ၏မျက်နှာပြင်ရှိ Silica Gel ၏မျက်နှာပြင်ပေါ်ရှိ sceaped thledram (ညာ) ။
အထက်ဖော်ပြပါပြ problems နာများကိုဖြေရှင်းရန် Chromatographic Packing ပစ္စည်းများထုတ်လုပ်သူများထုတ်လုပ်သူများကနည်းပညာတိုးတက်မှုများပြုလုပ်ခဲ့သည်။ ဤတိုးတက်မှုများထဲမှတစ်ခုမှာ silicopic cyano အုပ်စုများ (ပုံ 1 ၏ညာဘက်ခြမ်းတွင်ပြထားတဲ့အတိုင်း) sydrophilic ၏မျက်နှာပြင်ကိုမိတ်ဆက်ခြင်းကဲ့သို့သောဆီလီကနာ Matrix ၏မျက်နှာပြင်ပေါ်တွင်အချို့သောပြုပြင်ပြောင်းလဲမှုများပြုလုပ်နေသည်။ ထို့ကြောင့် silica မျက်နှာပြင်ပေါ်ရှိ C18 ကွင်းဆက်များသည်အလွန်အမင်းကြော်ငြာထားသောအခြေအနေများအောက်တွင်အပြည့်အ 0 တိုးချဲ့နိုင်ပြီး hydrophobic အဆင့်ပြိုကျမှုကိုရှောင်ရှားနိုင်သည်။ ဤပြုပြင်ထားသော C18 ကော်လံများဟုခေါ်သော C18aq ကော်လံများကို aqueous c18 ကော်လံများဖြစ်သော C18Aq ကော်လံများဟုခေါ်သည်။ C18aq ကော်လံများကိုအော်ဂဲနစ်အက်စစ်, peptides, nucleosides နှင့်ရေပျော်ဝင်နိုင်သောဗီတာမင်များအပါအ 0 င်အားကြီးသောဝင်ရိုးစွန်းများခွဲခြင်းနှင့်သန့်ရှင်းရေးတွင်ကျယ်ကျယ်ပြန့်ပြန့်အသုံးပြုခဲ့သည်။
Desalting သည်နမူနာများအတွက် flash purification ရှိ C18aq ကော်လံများ၌ C18aq ကော်လံ၏ပုံမှန် application များထဲမှတစ်ခုဖြစ်သည်။ ဤ post တွင်အားကြီးသော polarity နှင့်အတူတောက်ပသောအပြာရောင် FCF ကိုနမူနာအဖြစ် အသုံးပြု. C18aq ကော်လံတွင်သန့်စင်သည်။ နမူနာအရည်ပျော်ပစ္စည်းကို buffer solution မှအော်ဂဲနစ်အရည်ပျော်ပစ္စည်းဖြင့်အစားထိုးခဲ့သည်။ ထို့အပြင်နမူနာ၏သန့်ရှင်းစင်ကြယ်မှုသည်နမူနာတွင်အညစ်အကြေးများကိုဖယ်ရှားခြင်းဖြင့်တိုးတက်ခဲ့သည်။
စမ်းသပ်အပိုင်း
ပုံ 2 ။ နမူနာ၏ဓာတုဖွဲ့စည်းပုံ။
အဆိုပါတောက်ပအပြာရောင် FCF ဒီ post မှာနမူနာအဖြစ်အသုံးပြုခဲ့သည်။ ကုန်ကြမ်းနမူနာ၏သန့်ရှင်းစင်ကြယ်မှုသည် 86% နှင့်နမူနာ၏ဓာတုဖွဲ့စည်းပုံကိုပုံ 2 တွင်ပြသသည်။ နမူနာဖြေရှင်းချက်ကိုပြင်ဆင်ရန် 300 မီလီဂရမ်အမှုန့်များတောက်ပသောအပြာရင့်ကျက်သောဖြေရှင်းချက် 300 တွင်ဖျက်သိမ်းလိုက်သည်။ နမူနာဖြေရှင်းချက်ထို့နောက် injector မှ flash ကော်လံသို့ထိုးသွင်းခဲ့သည်။ Flash purification ၏စမ်းသပ် setup ကိုဇယား 1 တွင်ဖော်ပြထားသည်။
| ကရိယာတန်းဆာ | Sepabean ™စက်2 | |||
| Cartridges | 12 ဂရမ် Sepaflash C18 RP RP Flash Cartridge (အ 0 င် silica, 20 - 45 μm, 100 - 4), အမိန့်နံပါတ်: SW-5222-012-SP) | 12 ဂရမ် Sepaflash C18aq Rp Flash C18AQ RP Cartridge (soh ဓနသမာခြင်း, 20 - 45), အမိန့်နံပါတ် - SW-5222-012-SP (AQ)) | ||
| လှိုင်းအလျား | 254 NM | |||
| မိုဘိုင်းအဆင့် | solvent a: ရေ Solvent B: Methanol | |||
| စီးဆင်းမှုနှုန်း | 30 ml / min | |||
| နမူနာတင်ခြင်း | 300 မီလီဂရမ် (86% ၏သန့်ရှင်းမှုနှင့်အတူတောက်ပသောအပြာရောင် FCF) | |||
| grad | အချိန် (CV) | solvent b (%) | အချိန် (CV) | solvent b (%) |
| 0 | 10 | 0 | 0 | |
| 10 | 10 | 10 | 0 | |
| 10.1 | 100 | 10.1 | 100 | |
| 17.5 | 100 | 17.5 | 100 | |
| 17.6 | 10 | 17.6 | 0 | |
| 22.6 | 10 | 22.6 | 0 | |
ရလဒ်နှင့်ဆွေးနွေးခြင်း
Sepaflash C18aq RP flash cartridge ကိုနမူနာ desalting နှင့် purification အတွက်အသုံးပြုခဲ့သည်။ ခြေလှမ်းအဆင့်ကိုစင်ကြယ်သောရေကိုလက်ဝါးကပ်တိုင်သည်မိုဘိုင်းအဆင့်အဖြစ် အသုံးပြု. ရေခဲသေတ္တာအစတွင် အသုံးပြု. ကော်လံပမာဏ (10) ခုအတွက်အသုံးပြုသည်။ ပုံ 3 မှာပြထားတဲ့အတိုင်း, မိုဘိုင်းအဆင့်အနေနဲ့ရေစင်ကြယ်တဲ့ရေကိုသုံးပြီးနမူနာကို Flash Cartridge မှာလုံးဝထိန်းသိမ်းထားတယ်။ ထို့နောက်မိုဘိုင်းအဆင့်ရှိ Methanol ကို 100% အထိတိုက်ရိုက်တိုးမြှင့်ခဲ့ပြီး Gradient ကို 7.5 CV အတွက်ထိန်းသိမ်းထားသည်။ နမူနာကို 11.5 မှ 13.5 CV မှထွက်ပြေးခဲ့သည်။ စုဆောင်းထားသောအပိုင်းအစများတွင်နမူနာဖြေရှင်းနည်းကို Methanol သို့ NAH2PO4 Buffer Solution မှအစားထိုးခဲ့သည်။ အလွန်အမင်းအရောင်းအ 0 ယ်အဖြေများနှင့်နှိုင်းယှဉ်ခြင်း Methanol သည်နောက်ဆက်တွဲအဆင့်တွင် Rotary expary dipapation မှဖယ်ရှားရန်ပိုမိုလွယ်ကူသည်။
ပုံ 3 ။ C18aq အရာတစ်ခုမှနမူနာ၏ Flash ChromatoGram ။
C18AQ အကျင်းနှင့်ပုံမှန် C18 C18 Cartridge ၏နမူနာများ၏နမူနာများ၏ retention and c18 အရာတစ်ခုကိုနှိုင်းယှဉ်ရန်အပြိုင်နှိုင်းယှဉ်မှုစမ်းသပ်မှုပြုလုပ်ခဲ့သည်။ Sepaflash C18 RP Flash Cartridge ကိုအသုံးပြုခဲ့ပြီးနမူနာအတွက် Flash ChromatoGram ကိုပုံ 4 တွင်ပြသသည်။ ပုံမှန် C18 Cartridges သည် 90% သောအမြင့်ဆုံးသော Aqueed phase အချိုးသည် 90% ခန့်ရှိသည်။ ထို့ကြောင့် start gradient ကို 90% သောရေတွင် 10% methanol တွင်သတ်မှတ်ထားသည်။ ပုံ 4 မှာပြထားတဲ့အတိုင်း Hydrophobic Phase ပြိုကျမှုကြောင့်မြင့်မားသောအရုဏ်အချိုးအစားကြောင့်ဖြစ်သော C18 ကွင်းဆက်များပြိုကျခြင်းကြောင့်နမူနာကိုပုံမှန် C18 Cartroge တွင်ဆက်လက်ထားရှိပြီးလက်ကိုင်ဖုန်းဖြင့်တိုက်ရိုက်ထုတ်လွှင့်ခဲ့သည်။ ရလဒ်အနေဖြင့်နမူနာ desalting သို့မဟုတ် purification ၏လည်ပတ်မှုကိုမပြီးစီးနိုင်ပါ။
ပုံ 4 ။ ပုံမှန် C18 အရာတစ်ခုပေါ်ရှိနမူနာ၏ Flash ChromatoGram ။
linear gradient ကိုနှိုင်းယှဉ်ခြင်း, အဆင့်ဆင့်အသုံးပြုမှုသည်အောက်ပါအားသာချက်များရှိသည်။
1 ။ အရည်ပျော်ပစ္စည်းအသုံးပြုမှုနှင့်နမူနာသန့်ရှင်းရေးအတွက်အချိန်ကို run သည်။
2 ။ ပစ်မှတ်ထားသောထုတ်ကုန်များကစုဆောင်းထားသောအပိုင်းအစများပမာဏကိုလျော့နည်းစေပြီး,
3 ။ ကောက်ခံသောထုတ်ကုန်သည်အငွေ့ပျံရန်လွယ်ကူသည့် Methanol တွင်ရှိသည်, ထို့ကြောင့်ခြောက်သွေ့သောအချိန်ကိုလျှော့ချသည်။
နိဂုံးချုပ်အနေဖြင့် Polar သို့မဟုတ်အလွန်အမင်း hydrophilic သို့မဟုတ်အလွန်အမင်း hydrophilic, Sepaphlash C18aq Rp Cartridges, Sepaflash C18AQ RP Cartridges သည် Propaflash C18AQ RP Cartridges သည် flash chromatchography sepperk ™စက်သည်မြန်ဆန်ထိရောက်သောဖြေရှင်းနည်းများကိုပေးနိုင်သည်။
Sepaflash Bonded စီးရီး C18 RP Cartridges အကြောင်း
Sepaflash C18AQ RP Cartridges သည် Santai Technology မှကွဲပြားခြားနားသောအသေးစိတ်အချက်အလက်များနှင့်ကွဲပြားသောအသေးစိတ်အချက်အလက်များနှင့်အတူ (ဇယား 2 တွင်ပြထားတဲ့အတိုင်း) ။
| ပစ္စည်းနံပါတ် | ကော်လံအရွယ်အစား | စီးဆင်းမှုနှုန်း (ml / min) | Max.Pressure (PSI / BAR) |
| SW-5222-004-SP (AQ) | 5.4 ဆ | 5-15 | 400 / 27.5 |
| SW-52222-012-SP (AQ) | 20 ဂရမ် | 10-25 | 400 / 27.5 |
| SW-5222-025-SP (AQ) | 33 ဂရမ် | 10-25 | 400 / 27.5 |
| SW-52222-040-SP (AQ) | 48 ဂရမ် | 15-30 | 400 / 27.5 |
| SW-52222-080-SP (AQ) | 105 ဂရမ် | 25-50 | 350 / 24.0 |
| SW-5222-120-SP (AQ) | 155 ဂရမ် | 30-60 | 300 / 20.7 |
| SW-52222-220-SP (AQ) | 300 ဂရမ် | 40-80 | 300 / 20.7 |
| SW-52222-330-SP (AQ) | 420 ဂရမ် | 40-80 | 250 / 17.2 |
ဇယား 2 ။ Sepaflash C18aq RP Cartridges ။
ထုပ်ပိုးပစ္စည်းများ - စွမ်းဆောင်ရည်မြင့် c18 (AQ) -bonded silica, 20 - 45 μm, 100 - 4 μm, 100 ။
logy (ဇယား 2 တွင်ပြထားတဲ့အတိုင်း) ။
Post Time: Aug-27-2018