Hongcheng Wang၊ Bo Xu
လျှောက်လွှာ R&D စင်တာ
နိဒါန်း
stationary phase နှင့် mobile phase ၏ ဆက်စပ် polarities အရ liquid chromatography ကို normal phase chromatography (NPC) နှင့် reversed phase chromatography (RPC) ဟူ၍ ခွဲခြားနိုင်ပါသည်။RPC အတွက်၊ မိုဘိုင်းအဆင့်၏ polarity သည် stationary အဆင့်ထက် ပိုအားကောင်းသည်။RPC သည် ၎င်း၏ မြင့်မားသော စွမ်းဆောင်ရည်၊ ကောင်းမွန်သော ရုပ်ထွက်နှင့် ရှင်းလင်းသော ထိန်းသိမ်းမှု ယန္တရားတို့ကြောင့် အရည် chromatography ပိုင်းခြားခြင်းမုဒ်များတွင် အသုံးအများဆုံးတစ်ခု ဖြစ်လာခဲ့သည်။ထို့ကြောင့် RPC သည် alkaloids, carbohydrates, fatty acids, steroids, nucleic acids, amino acids, peptides, proteins စသည်တို့ အပါအဝင် ဝင်ရိုးစွန်း သို့မဟုတ် ဝင်ရိုးစွန်းမဟုတ်သော ဒြပ်ပေါင်းများကို ခွဲထုတ်ခြင်းနှင့် သန့်စင်ခြင်းအတွက် သင့်လျော်သည်။ RPC တွင်၊ အသုံးအများဆုံးသော စာရေးကိရိယာအဆင့်မှာ C18၊ C8၊ C4၊ phenyl၊ cyano၊ amino စသည်တို့ အပါအဝင် အမျိုးမျိုးသော လုပ်ငန်းဆောင်တာအုပ်စုများနှင့် ချိတ်ဆက်ထားသည့် ဆီလီကာဂျယ်မက်ထရစ်ကို ပေါင်းစပ်ထားသည်။ ဤအချိတ်အဆက်ရှိသော လုပ်ဆောင်မှုအုပ်စုများထဲတွင် အသုံးအများဆုံးမှာ C18 ဖြစ်သည်။RPC ၏ 80% ကျော်သည် C18 ချည်နှောင်ထားသောအဆင့်ကို အသုံးပြုနေပြီဟု ခန့်မှန်းရသည်။ထို့ကြောင့် C18 chromatography ကော်လံသည် ဓာတ်ခွဲခန်းတိုင်းအတွက် မရှိမဖြစ် universal ကော်လံတစ်ခု ဖြစ်လာသည်။
C18 ကော်လံများသည် အလွန်ကျယ်ပြန့်သော application များတွင်အသုံးပြုနိုင်သော်လည်း၊ အလွန်ဝင်ရိုးစွန်း သို့မဟုတ် ရေအားအလွန်ကောင်းသော အချို့နမူနာများအတွက်၊ ပုံမှန် C18 ကော်လံများသည် ယင်းနမူနာများကို သန့်စင်ရန်အတွက် အသုံးပြုသည့်အခါ ပြဿနာများရှိနိုင်သည်။RPC တွင် အသုံးများသော elution solvents များကို ၎င်းတို့၏ polarity အရ အမိန့်ပေးနိုင်သည်- water < methanol < acetonitrile < ethanol < tetrahydrofuran < isopropanol ။ဤနမူနာများအတွက် ကော်လံပေါ်တွင် ကောင်းမွန်စွာ ထိန်းထားနိုင်စေရန် (ခိုင်ခံ့သော ဝင်ရိုးစွန်း သို့မဟုတ် ရေအားလျှပ်စစ်ဓာတ်လွန်ကဲသော) မြင့်မားသော ရေစနစ်ကို မိုဘိုင်းအဆင့်အဖြစ် အသုံးပြုရန် လိုအပ်ပါသည်။သို့သော်၊ သန့်စင်သောရေစနစ် (ရေသန့် သို့မဟုတ် ဆားသန့်ဖျော်ရည် အပါအဝင်) ကို မိုဘိုင်းအဆင့်အဖြစ် အသုံးပြုသောအခါ၊ C18 ကော်လံ၏ ငြိမ်ဝပ်မှုအဆင့်ရှိ ကာဗွန်ကွင်းဆက်ရှည်သည် ရေကို ရှောင်ရှားပြီး တစ်ခုနှင့်တစ်ခု ရောနှောကာ ချက်ခြင်းလျော့ကျသွားစေသည်။ ကော်လံ၏ ထိန်းထားနိုင်မှု သို့မဟုတ် ထိန်းထားနိုင်ခြင်း မရှိပါ။ဤဖြစ်စဉ်ကို "hydrophobic အဆင့်ပြိုကျခြင်း" ဟုခေါ်သည် (ပုံ 1 ၏ဘယ်ဘက်တွင်ပြထားသည့်အတိုင်း) ။ကော်လံကို မီသနော သို့မဟုတ် acetonitrile ကဲ့သို့သော အော်ဂဲနစ်အပျော်ရည်များဖြင့် ဆေးကြောသည့်အခါ ဤအခြေအနေသည် ပြောင်းပြန်ဖြစ်နိုင်သော်လည်း၊ ၎င်းသည် ကော်လံကို ပျက်စီးစေနိုင်သည်။ဒါကြောင့် ဒီလိုအခြေအနေမျိုး မဖြစ်အောင် ကာကွယ်ဖို့ လိုပါတယ်။
ပုံ 1။ ပုံမှန် C18 ကော်လံ (ဘယ်) နှင့် C18AQ ကော်လံ (ညာဘက်) ရှိ ဆီလီကာဂျယ်၏ မျက်နှာပြင်ပေါ်ရှိ အချိတ်အဆက်ရှိသော အဆင့်များ၏ ဇယားကွက်များ။
အထက်ဖော်ပြပါ ပြဿနာများကို ကိုင်တွယ်ဖြေရှင်းရန်၊ chromatographic ထုပ်ပိုးပစ္စည်းများ ထုတ်လုပ်သူများသည် နည်းပညာပိုင်းဆိုင်ရာ တိုးတက်မှုများကို ပြုလုပ်ခဲ့ကြသည်။ဤတိုးတက်မှုများထဲမှတစ်ခုသည် ဆီလီကာမက်ထရစ်၏မျက်နှာပြင်ပေါ်တွင် ဟိုက်ဒရိုဖီလစ်ဆီယာနိုအုပ်စုများ (ပုံ 1 ၏ညာဘက်တွင်ပြထားသည့်အတိုင်း) ကိုအသုံးပြုခြင်းကဲ့သို့သော ဆီလီကာမက်ထရစ်မျက်နှာပြင်ပေါ်တွင် ပြုပြင်မွမ်းမံမှုအချို့ပြုလုပ်ခြင်းဖြစ်သည်။ထို့ကြောင့် စီလီကာမျက်နှာပြင်ရှိ C18 ကွင်းဆက်များကို အလွန်ရေ၀င်သောအခြေအနေအောက်တွင် အပြည့်ချဲ့နိုင်ပြီး hydrophobic အဆင့်ပြိုကျမှုကို ရှောင်ရှားနိုင်သည်။ဤမွမ်းမံထားသော C18 ကော်လံများကို Aqueous C18 ကော်လံများဟု ခေါ်တွင်သည်၊ အမည်ရ C18AQ ကော်လံများသည် အလွန်ရေဝင်နေသော elution အခြေအနေများအတွက် ဒီဇိုင်းထုတ်ထားပြီး 100% aqueous system ကို သည်းခံနိုင်သည်။C18AQ ကော်လံများကို အော်ဂဲနစ်အက်ဆစ်၊ peptides၊ nucleosides နှင့် ရေတွင်ပျော်ဝင်သော ဗီတာမင်များ အပါအဝင် အားကောင်းသော ဝင်ရိုးစွန်းဒြပ်ပေါင်းများကို ခွဲထုတ်ခြင်းနှင့် သန့်စင်ခြင်းတွင် ကျယ်ကျယ်ပြန့်ပြန့် အသုံးချခဲ့သည်။
Desalting သည် နမူနာများအတွက် ဖလက်ရှ်သန့်စင်ခြင်းရှိ C18AQ ကော်လံများ၏ ပုံမှန်အပလီကေးရှင်းများထဲမှ တစ်ခုဖြစ်ပြီး၊ ၎င်းသည် နမူနာအရောတွင်းရှိ ဆား သို့မဟုတ် ကြားခံအစိတ်အပိုင်းများကို ဖယ်ရှားပေးကာ နောက်ဆက်တွဲလေ့လာမှုများတွင် နမူနာအသုံးပြုမှုကို လွယ်ကူချောမွေ့စေပါသည်။ဤပို့စ်တွင်၊ အားကောင်းသော polarity ရှိသော Brilliant Blue FCF ကို နမူနာအဖြစ် အသုံးပြုပြီး C18AQ ကော်လံတွင် သန့်စင်ထားသည်။နမူနာပျော်ရည်ကို ကြားခံဖြေရှင်းချက်မှ သြဂဲနစ်အပျော်ရည်ဖြင့် အစားထိုးခဲ့ခြင်းကြောင့် အောက်ပါ rotary ရေငွေ့ပျံခြင်းအပြင် ပျော်ရည်များနှင့် လည်ပတ်ချိန်ကို သက်သာစေသည်။ထို့အပြင် နမူနာအတွင်းရှိ အညစ်အကြေးအချို့ကို ဖယ်ရှားခြင်းဖြင့် နမူနာ၏ သန့်ရှင်းမှုကို မြှင့်တင်ပေးပါသည်။
သမ္ပဒါကဏ္ဍ
ပုံ ၂။ နမူနာ၏ ဓာတုဖွဲ့စည်းပုံ။
Brilliant Blue FCF ကို ဤပို့စ်တွင် နမူနာအဖြစ် အသုံးပြုခဲ့သည်။ကုန်ကြမ်းနမူနာ၏ သန့်ရှင်းစင်ကြယ်မှုသည် 86% ဖြစ်ပြီး နမူနာ၏ ဓာတုဖွဲ့စည်းပုံအား ပုံ 2 တွင် ပြထားသည်။ နမူနာအဖြေကို ပြင်ဆင်ရန်အတွက် Brilliant Blue FCF ၏ 300 mg အမှုန့်ကြမ်းစိုင်ခဲကို 1 M NaH2PO4 ကြားခံဖြေရှင်းချက်တွင် ပျော်ဝင်ပြီး ကောင်းမွန်စွာလှုပ်သွားပါသည်။ လုံးဝရှင်းရှင်းလင်းလင်းဖြေရှင်းချက်။ထို့နောက်နမူနာအဖြေကို injector မှ flash ကော်လံထဲသို့ ထိုးသွင်းခဲ့သည်။ဖလက်ရှ်သန့်စင်ခြင်း၏ စမ်းသပ်တပ်ဆင်မှုကို ဇယား 1 တွင် ဖော်ပြထားပါသည်။
| တူရိယာ | SepaBean™ စက်2 | |||
| ပုံးများ | 12 g SepaFlash C18 RP ဖလက်ရှ် ကျည်တောင့် (လုံးပတ် ဆီလီကာ၊ 20 - 45 μm၊ 100 Å၊ မှာယူမှု နံပါတ်- SW-5222-012-SP) | 12 g SepaFlash C18AQ RP ဖလက်ရှ် ကျည်တောင့် (ဆန်းကြယ်ဆီလီကာ၊ 20 - 45 μm၊ 100 Å၊ မှာယူမှုနံပါတ်：SW-5222-012-SP(AQ)) | ||
| လှိုင်းအလျား | 254 nm | |||
| မိုဘိုင်းအဆင့် | Solvent A: ရေ Solvent B: မီသနော | |||
| စီးဆင်းနှုန်း | 30 mL/မိနစ် | |||
| နမူနာ တင်ခြင်း။ | 300 မီလီဂရမ် (Brilliant Blue FCF 86%)၊ | |||
| အရောင်ခြယ်ခြင်း။ | အချိန် (CV) | Solvent B (%) | အချိန် (CV) | Solvent B (%) |
| 0 | 10 | 0 | 0 | |
| 10 | 10 | 10 | 0 | |
| ၁၀.၁ | ၁၀၀ | ၁၀.၁ | ၁၀၀ | |
| ၁၇.၅ | ၁၀၀ | ၁၇.၅ | ၁၀၀ | |
| ၁၇.၆ | 10 | ၁၇.၆ | 0 | |
| ၂၂.၆ | 10 | ၂၂.၆ | 0 | |
ရလဒ်နှင့်ဆွေးနွေးခြင်း
နမူနာဖယ်ရှားခြင်းနှင့် သန့်စင်ခြင်းအတွက် SepaFlash C18AQ RP flash ယမ်းတောင့်ကို အသုံးပြုခဲ့သည်။elution စတင်ချိန်တွင် ရေသန့်ကို မိုဘိုင်းအဆင့်အဖြစ် အသုံးပြုပြီး ကော်လံ 10 ခု (CV) အတွက် လုပ်ဆောင်သည့် အဆင့် gradient ကို အသုံးပြုခဲ့သည်။ပုံ 3 တွင်ပြထားသည့်အတိုင်း သန့်စင်သောရေကို မိုဘိုင်းအဆင့်အဖြစ်အသုံးပြုသောအခါ၊ နမူနာအား flash cartridge တွင် လုံးဝသိမ်းဆည်းထားသည်။ထို့နောက်၊ မိုဘိုင်းအဆင့်ရှိ မီသနောသည် 100% သို့ တိုက်ရိုက်တိုးလာပြီး gradient ကို 7.5 CV အတွက် ထိန်းသိမ်းထားသည်။နမူနာအား 11.5 မှ 13.5 CV မှ ထုတ်နှုတ်ခဲ့သည်။စုဆောင်းထားသောအပိုင်းများတွင်၊ နမူနာအဖြေကို NaH2PO4 ကြားခံဖြေရှင်းချက်မှ မီသနောသို့ အစားထိုးခဲ့သည်။မြင့်မားသောရေပျော်ရည်နှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါက၊ မီသနောကို နောက်အဆင့်တွင် rotary evaporation ဖြင့် ဖယ်ရှားရန် ပိုမိုလွယ်ကူသည်၊ အောက်ပါ သုတေသနပြုချက်အား လွယ်ကူချောမွေ့စေပါသည်။
ပုံ 3. C18AQ ကျည်တောင့်ရှိ နမူနာ၏ ဖလက်ရှ် ခရိုမာတိုဂရမ်။
ပြင်းထန်သောဝင်ရိုးစွန်းနမူနာများအတွက် C18AQ ကျည်တောင့်နှင့် ပုံမှန် C18 ကျည်တောင့်များ၏ ထိန်းသိမ်းမှုအပြုအမူကို နှိုင်းယှဉ်ရန်၊ အပြိုင်နှိုင်းယှဉ်စမ်းသပ်မှုကို ပြုလုပ်ခဲ့သည်။SepaFlash C18 RP flash ယမ်းတောင့်ကို အသုံးပြုထားပြီး နမူနာအတွက် flash chromatogram ကို ပုံ 4 တွင်ပြသထားသည်။ ပုံမှန် C18 ကျည်တောင့်များအတွက်၊ အမြင့်ဆုံးခံနိုင်ရည်ရှိသော aqueous အဆင့်အချိုးသည် 90% ခန့်ဖြစ်သည်။ထို့ကြောင့် start gradient ကို ရေ 90% တွင် 10% methanol တွင်သတ်မှတ်ထားသည်။ပုံ 4 တွင်ပြထားသည့်အတိုင်း၊ မြင့်မားသော aqueous ratio ကြောင့်ဖြစ်ရသည့် C18 ကွင်းဆက်များ၏ hydrophobic အဆင့်ပြိုကျမှုကြောင့်၊ နမူနာအား ပုံမှန် C18 ကျည်တောင့်တွင် ထိန်းသိမ်းထားရုံသာရှိပြီး မိုဘိုင်းအဆင့်မှ တိုက်ရိုက်ထုတ်နှုတ်ခြင်းခံရသည်။ရလဒ်အနေဖြင့်၊ နမူနာဖယ်ရှားခြင်း သို့မဟုတ် သန့်စင်ခြင်းလုပ်ငန်းကို မပြီးမြောက်နိုင်ပါ။
ပုံ 4။ ပုံမှန် C18 ကျည်တောင့်တစ်ခုရှိ နမူနာ၏ flash chromatogram။
linear gradient နှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါက step gradient ကိုအသုံးပြုခြင်းသည် အောက်ပါအားသာချက်များရှိပါသည်။
1. နမူနာသန့်စင်မှုအတွက် Solvent အသုံးပြုမှုနှင့် လည်ပတ်ချိန်ကို လျှော့ချထားသည်။
2. ပစ်မှတ်ထုတ်ကုန်သည် စုဆောင်းထားသောအပိုင်းအစများ၏ ထုထည်ပမာဏကို လျှော့ချပေးသည့် ချွန်ထက်သောတောင်ထွတ်တွင် ပေါ်လွင်နေပြီး အောက်ပါ rotary evaporation နှင့် အချိန်ကုန်သက်သာစေသည်။
3. စုဆောင်းထားသော ထုတ်ကုန်သည် အငွေ့ပျံရန် လွယ်ကူသော မီသနောတွင် ပါဝင်သောကြောင့် အခြောက်ခံချိန်ကို လျှော့ချသည်။
နိဂုံးချုပ်အနေဖြင့်၊ ပြင်းထန်စွာဝင်ရိုးစွန်း သို့မဟုတ် အလွန်ရေအားများသောနမူနာကို သန့်စင်ရန်အတွက် SepaFlash C18AQ RP flash ကျည်တောင့်များသည် ကြိုတင်ပြင်ဆင်ထားသော flash chromatography စနစ် SepaBean™ Machine နှင့် ပေါင်းစပ်ထားသော မြန်ဆန်ပြီး ထိရောက်သောအဖြေကို ပေးစွမ်းနိုင်ပါသည်။
SepaFlash Bonded Series C18 RP flash cartridges အကြောင်း
Santai Technology မှ မတူညီသော သတ်မှတ်ချက်များဖြင့် SepaFlash C18AQ RP flash cartridges စီးရီးများ ရှိပါသည်။ (ဇယား 2 တွင်ပြထားသည့်အတိုင်း)။
| ပစ္စည်းနံပါတ် | ကော်လံအရွယ်အစား | စီးဆင်းနှုန်း (မီလီဂရမ်/မိနစ်) | Max.Pressure (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5.4 ဂရမ် | ၅-၁၅ | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 ဂရမ် | ၁၀-၂၅ | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 ဂရမ် | ၁၀-၂၅ | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | ၄၈ ဂရမ် | ၁၅-၃၀ | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 ဂရမ် | ၂၅-၅၀ | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 ဂရမ် | ၃၀-၆၀ | ၃၀၀/၂၀.၇ |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 ဂရမ် | ၄၀-၈၀ | ၃၀၀/၂၀.၇ |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 ဂရမ် | ၄၀-၈၀ | 250/17.2 |
ဇယား 2. SepaFlash C18AQ RP flash ကျည်တောင့်များ။
ထုပ်ပိုးပစ္စည်းများ- စွမ်းဆောင်ရည်မြင့် လုံးပတ် C18(AQ)-bonded ဆီလီကာ၊ 20 - 45 μm၊ 100 Å။
logy (ဇယား 2 တွင်ပြထားသည့်အတိုင်း)။
စာတိုက်အချိန်- သြဂုတ်-၂၇-၂၀၁၈