Rui Huang, Bo Xu
Applikazzjoni R&D Ċentru
Introduzzjoni
Il-kromatografija ta' skambju joniku (IEC) hija metodu kromatografiku komunement użat biex jissepara u jippurifika l-komposti li huma ppreżentati f'forma jonika f'soluzzjoni.Skont l-istati ta 'ċarġ differenti ta' joni skambjabbli, IEC jista 'jinqasam f'żewġ tipi, kromatografija ta' skambju ta 'katjoni u kromatografija ta' skambju anjoniku.Fil-kromatografija ta 'skambju ta' katjoni, gruppi aċidużi huma marbuta mal-wiċċ tal-midja ta 'separazzjoni.Pereżempju, l-aċidu sulfoniku (-SO3H) huwa grupp użat b'mod komuni fi skambju qawwi ta 'katjoni (SCX), li jiddissoċja H + u l-grupp iċċarġjat b'mod negattiv -SO3- jista' għalhekk jassorbi katjoni oħra fis-soluzzjoni.Fil-kromatografija ta 'skambju anjoniku, gruppi alkalini huma magħqudin mal-wiċċ tal-midja ta' separazzjoni.Per eżempju, l-amina kwaternarja (-NR3OH, fejn R huwa grupp ta 'idrokarburi) normalment tintuża fi skambju anjoniku qawwi (SAX), li jiddissoċja OH- u l-grupp iċċarġjat b'mod pożittiv -N + R3 jista' jassorbi anjoni oħra fis-soluzzjoni, li jirriżulta f'anjoni effett ta' skambju.
Fost il-prodotti naturali, il-flavonoids ġibdu l-attenzjoni tar-riċerkaturi minħabba r-rwol tagħhom fil-prevenzjoni u t-trattament tal-mard kardjovaskulari.Peress li l-molekuli flavonoid huma aċidużi minħabba l-preżenza ta 'gruppi idroksil fenoliċi, il-kromatografija ta' skambju joniku hija għażla alternattiva minbarra l-fażi normali konvenzjonali jew il-kromatografija tal-fażi inversa għas-separazzjoni u l-purifikazzjoni ta 'dawn il-komposti aċidużi.Fil-kromatografija flash, il-midja ta 'separazzjoni użata b'mod komuni għall-iskambju tal-joni hija matriċi tal-ġel tas-silika fejn il-gruppi tal-iskambju tal-joni huma mwaħħla mal-wiċċ tagħha.Il-modi ta 'skambju joniku l-aktar użati fil-kromatografija flash huma SCX (ġeneralment grupp ta' aċidu sulfoniku) u SAX (ġeneralment grupp ta 'amini kwaternarji).Fin-nota ta 'applikazzjoni ppubblikata qabel bit-titlu "L-Applikazzjoni ta' Kolonni ta 'Kromatografija ta' Skambju ta 'Cation SepaFlash Strong fil-Purifikazzjoni ta' Komposti Alkalini" minn Santai Technologies, kolonni SCX ġew impjegati għall-purifikazzjoni ta 'komposti alkalini.F'din il-kariga, intużat taħlita ta 'standards newtrali u aċidużi bħala l-kampjun biex tesplora l-applikazzjoni ta' kolonni SAX fil-purifikazzjoni ta 'komposti aċidużi.
Taqsima Sperimentali
Figura 1. Id-dijagramma skematika tal-fażi stazzjonarja mwaħħla mal-wiċċ tal-midja ta 'separazzjoni SAX.
F'din il-kariga, intużat kolonna SAX ippakkjata minn qabel b'silika magħquda b'amina kwaternarja (kif muri fil-Figura 1).Taħlita ta' Chromone u aċidu 2,4-dihydroxybenzoic intużat bħala l-kampjun li jrid jiġi ppurifikat (kif muri fil-Figura 2).It-taħlita ġiet maħlula fil-metanol u mgħobbija fuq l-iskartoċċ tal-flash b'injettur.Is-setup sperimentali tal-purifikazzjoni flash hija elenkata fit-Tabella 1.
Figura 2. L-istruttura kimika taż-żewġ komponenti fit-taħlita tal-kampjun.
| Strument | Magna SepaBean™ T | |||||
| Skrataċ | Skartoċċ flash SepaFlash Standard Series 4 g (silika irregolari, 40 - 63 μm, 60 Å, Numru tal-ordni: S-5101-0004) | 4 g SepaFlash Bonded Series SAX flash cartridge (silika irregolari, 40 - 63 μm, 60 Å, Numru tal-ordni: SW-5001-004-IR) | ||||
| Tul tal-mewġ | 254 nm (skoperta), 280 nm (monitoraġġ) | |||||
| Fażi mobbli | Solvent A: N-hexane | |||||
| Solvent B: Aċetat tal-etil | ||||||
| Rata tal-fluss | 30 mL/min | 20 mL/min | ||||
| Tagħbija tal-kampjun | 20 mg (taħlita ta' Komponent A u Komponent B) | |||||
| Gradjent | Ħin (CV) | Solvent B (%) | Ħin (CV) | Solvent B (%) | ||
| 0 | 0 | 0 | 0 | |||
| 1.7 | 12 | 14 | 100 | |||
| 3.7 | 12 | / | / | |||
| 16 | 100 | / | / | |||
| 18 | 100 | / | / | |||
Riżultati u diskussjoni
L-ewwelnett, it-taħlita tal-kampjun ġiet isseparata minn skartoċċ flash ta 'fażi normali ippakkjat minn qabel b'silika regolari.Kif jidher fil-Figura 3, iż-żewġ komponenti fil-kampjun ġew elużi mill-iskartoċċ wieħed wara l-ieħor.Sussegwentement, ġie utilizzat skartoċċ flash SAX għall-purifikazzjoni tal-kampjun.Kif jidher fil-Figura 4, il-Komponent B aċiduż inżamm kompletament fuq l-iskartoċċ SAX.Il-Komponent A newtrali ġie eluwit gradwalment mill-iskartoċċ bl-elużjoni tal-fażi mobbli.
Figura 3. Il-kromatogramma flash tal-kampjun fuq skartoċċ tal-fażi normali regolari.
Figura 4. Il-kromatogramma flash tal-kampjun fuq skartoċċ SAX.
Meta tqabbel il-Figura 3 u l-Figura 4, il-Komponent A għandu forma ta 'quċċata inkonsistenti fuq iż-żewġ skrataċ flash differenti.Biex tikkonferma jekk il-quċċata tal-eluzzjoni hijiex tikkorrispondi mal-komponent, nistgħu nutilizzaw il-karatteristika sħiħa tal-iskannjar tal-wavelength li hija mibnija fis-softwer tal-kontroll tal-magna SepaBean™.Iftaħ id-dejta sperimentali taż-żewġ separazzjonijiet, drag għal-linja indikatur fuq l-assi tal-ħin (CV) fil-kromatogramma sal-ogħla punt u t-tieni l-ogħla punt tal-quċċata tal-eluzzjoni li tikkorrispondi għall-Komponent A, u l-ispettru sħiħ tal-wavelength ta 'dawn iż-żewġ punti se jintwerew awtomatikament taħt il-kromatogramma (kif muri fil-Figura 5 u l-Figura 6).Meta tqabbel id-dejta sħiħa tal-ispettru tal-wavelength ta 'dawn iż-żewġ separazzjonijiet, il-Komponent A għandu spettru ta' assorbiment konsistenti f'żewġ esperimenti.Għar-raġuni tal-Komponent A għandu forma ta 'quċċata inkonsistenti fuq żewġ skrataċ flash differenti, huwa spekulat li hemm impurità speċifika fil-Komponent A li għandu żamma differenti fuq l-iskartoċċ tal-fażi normali u l-iskartoċċ SAX.Għalhekk, is-sekwenza ta 'eluzzjoni hija differenti għall-Komponent A u l-impurità fuq dawn iż-żewġ skrataċ flash, li tirriżulta forma ta' quċċata inkonsistenti fuq il-kromatogrammi.
Figura 5. L-ispettru sħiħ tal-wavelength tal-Komponent A u l-impurità separati minn skartoċċ tal-fażi normali.
Figura 6. L-ispettru sħiħ tal-wavelength tal-Komponent A u l-impurità separati minn skartoċċ SAX.
Jekk il-prodott fil-mira li għandu jinġabar huwa l-Komponent A newtrali, il-kompitu ta 'purifikazzjoni jista' faċilment jitlesta billi tuża direttament l-iskartoċċ SAX għal elużjoni wara t-tagħbija tal-kampjun.Min-naħa l-oħra, jekk il-prodott fil-mira li għandu jinġabar huwa l-Komponent B aċiduż, il-mod ta 'qbid-rilaxx jista' jiġi adottat b'aġġustament żgħir biss fil-passi sperimentali: meta l-kampjun kien mgħobbi fuq l-iskartoċċ SAX u l-Komponent A newtrali ġie kompletament eluwit b'solventi organiċi ta 'fażi normali, jaqilbu l-fażi mobbli għal soluzzjoni ta' metanol li fiha 5% aċidu aċetiku.Il-joni tal-aċetat fil-fażi mobbli se jikkompetu mal-Komponent B għall-irbit mal-gruppi tal-joni tal-amine kwaternarji fuq il-fażi stazzjonarja tal-iskartoċċ SAX, u b'hekk jeħilsu l-Komponent B mill-iskartoċċ biex jikseb il-prodott fil-mira.Il-kromatogramma tal-kampjun separat fil-mod ta 'skambju joniku kienet murija fil-Figura 7.
Figura 7. Il-flash chromatogram tal-Komponent B eluwit fil-mod ta' skambju joniku fuq skartoċċ SAX.
Bħala konklużjoni, kampjun aċiduż jew newtrali jista 'jiġi ppurifikat malajr minn skartoċċ SAX flimkien ma' skartoċċ tal-fażi normali li juża strateġiji ta 'purifikazzjoni differenti.Barra minn hekk, bl-għajnuna tal-karatteristika sħiħa tal-iskannjar tal-wavelength mibnija fis-softwer tal-kontroll tal-magna SepaBean™, l-ispettru karatteristiku tal-assorbiment tal-frazzjonijiet elużi jista 'jiġi kkomparat u kkonfermat faċilment, u jgħin lir-riċerkaturi jiddeterminaw malajr il-kompożizzjoni u l-purità tal-frazzjonijiet elużi u b'hekk itejbu effiċjenza tax-xogħol.
| Numru tal-Oġġett | Daqs tal-Kolonna | Rata tal-Fluss (mL/min) | Max.Pressjoni (psi/bar) |
| SW-5001-004-IR | 5.9 g | 10-20 | 400/27.5 |
| SW-5001-012-IR | 23 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5001-025-IR | 38 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5001-040-IR | 55 g | 20-40 | 400/27.5 |
| SW-5001-080-IR | 122 g | 30-60 | 350/24.0 |
| SW-5001-120-IR | 180 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5001-220-IR | 340 g | 50-100 | 300/20.7 |
| SW-5001-330-IR | 475 g | 50-100 | 250/17.2
|
Tabella 2. Skrataċ flash SAX tas-SepaFlash Bonded Series.Materjali tal-ippakkjar: Silika irregolari ultra-pura magħquda bis-SAX, 40 - 63 μm, 60 Å.
Għal aktar informazzjoni dwar speċifikazzjonijiet dettaljati tas-SepaBean™magna, jew l-informazzjoni li tordna fuq skrataċ flash serje SepaFlash, jekk jogħġbok żur il-websajt tagħna.
Ħin tal-post: Nov-09-2018