Rui Huang, Bo Xu
Applikazzjoni R&D Ċentru
Introduzzjoni
Peptide huwa kompost magħmul minn aċidi amminiċi, li kull wieħed minnhom għandu proprjetajiet fiżiċi u kimiċi uniċi minħabba t-tipi differenti u l-ordni ta 'residwi ta' aċidi amminiċi li jikkostitwixxu s-sekwenza tiegħu.Bl-iżvilupp tas-sinteżi kimika tal-fażi solida, is-sinteżi kimika ta 'diversi peptidi attivi għamlet progress kbir.Madankollu, minħabba l-kompożizzjoni kkumplikata tal-peptide miksuba permezz ta 'sinteżi ta' fażi solida, il-prodott finali għandu jiġi ppurifikat b'metodi ta 'separazzjoni affidabbli.Il-metodi ta 'purifikazzjoni komunement użati għall-peptidi jinkludu kromatografija ta' skambju joniku (IEC) u kromatografija likwida ta 'prestazzjoni għolja b'fażi inversa (RP-HPLC), li għandhom l-iżvantaġġi ta' kapaċità baxxa ta 'tagħbija ta' kampjuni, spiża għolja tal-midja ta 'separazzjoni, tagħmir ta' separazzjoni kkumplikat u għali, eċċ Għall-purifikazzjoni rapida ta 'peptidi ta' molekula żgħira (MW < 1 kDa), każ ta 'applikazzjoni b'suċċess kien ippubblikat qabel minn Santai Technologies, li fih skartoċċ SepaFlash RP C18 ġie utilizzat għall-purifikazzjoni rapida ta' thymopentin (TP-5) u l- prodott mira li jissodisfa r-rekwiżiti inkiseb.
Figura 1. 20 aċidu amminiku komuni (riprodotti minn www.bachem.com).
Hemm 20 tip ta 'aċidi amminiċi li huma komuni fil-kompożizzjoni tal-peptidi.Dawn l-aċidi amminiċi jistgħu jinqasmu fil-gruppi li ġejjin skond il-polarità tagħhom u l-proprjetà ta 'bażi ta' aċidu: mhux polari (idrofobiku), polari (mhux iċċarġjat), aċiduż jew bażiku (kif muri fil-Figura 1).F'sekwenza ta' peptide, jekk l-aċidi amminiċi li jikkostitwixxu s-sekwenza huma l-aktar polari (kif immarkat b'kulur roża fil-Figura 1), bħal Cysteine, Glutamine, Asparagine, Serine, Threonine, Tyrosine, eċċ. allura dan il-peptide jista' jkollu effett qawwi. polarità u jkun solubbli ħafna fl-ilma.Matul il-proċedura ta 'purifikazzjoni għal dawn il-kampjuni ta' peptidi polari b'saħħithom permezz ta 'kromatografija ta' fażi inversa, se jseħħ fenomenu msejjaħ kollass ta 'fażi idrofobika (irreferi għal nota ta' applikazzjoni ppubblikata qabel minn Santai Technologies: Kollass tal-Fażi idrofobika, Kolonni tal-Kromatografija tal-Fażi Reverse AQ u l-applikazzjonijiet tagħhom).Meta mqabbla mal-kolonni C18 regolari, il-kolonni C18AQ imtejba huma l-aktar adattati għall-purifikazzjoni ta 'kampjuni polari jew idrofiliċi qawwija.F'din il-kariga, peptide polari qawwi ġie utilizzat bħala l-kampjun u ppurifikat minn kolonna C18AQ.Bħala riżultat, inkiseb il-prodott immirat li jissodisfa r-rekwiżiti u jista 'jintuża fir-riċerka u l-iżvilupp li ġejjin.
| Strument | SepaBean™magna 2 | |||
| Skrataċ | Skartoċċ tal-flash SepaFlash C18 RP ta' 12 g (silika sferika, 20 - 45 μm, 100 Å, Numru tal-Ordni：SW-5222-012-SP) | Skartoċċ flash SepaFlash C18AQ RP 12 g (silika sferika, 20 - 45 μm, 100 Å, Numru tal-ordni: SW-5222-012-SP(AQ)) | ||
| Tul tal-mewġ | 254 nm, 220 nm | 214 nm | ||
| Fażi mobbli | Solvent A: Ilma Solvent B: Aċetonitrile | |||
| Rata tal-fluss | 15 mL/min | 20 mL/min | ||
| Tagħbija tal-kampjun | 30 mg | |||
| Gradjent | Ħin (CV) | Solvent B (%) | Ħin (min) | Solvent B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
Riżultati u diskussjoni
Biex tqabbel il-prestazzjoni tal-purifikazzjoni għall-kampjun tal-peptide polari bejn il-kolonna C18 regolari u l-kolonna C18AQ, użajna kolonna C18 regolari għall-purifikazzjoni flash tal-kampjun bħala bidu.Kif muri fil-Figura 2, minħabba l-kollass tal-fażi idrofobika tal-ktajjen C18 ikkawżat minn proporzjon għoli ta 'l-ilma, il-kampjun bilkemm inżamm fuq l-iskartoċċ C18 regolari u ġie eluwit direttament mill-fażi mobbli.Bħala riżultat, il-kampjun ma kienx separat u purifikat b'mod effettiv.
Figura 2. Il-kromatogramma flash tal-kampjun fuq skartoċċ C18 regolari.
Sussegwentement, użajna kolonna C18AQ għall-purifikazzjoni flash tal-kampjun.Kif muri fil-Figura 3, il-peptide inżamm b'mod effettiv fuq il-kolonna u mbagħad ġie eluwit.Il-prodott fil-mira kien separat mill-impuritajiet fil-kampjun mhux maħdum u miġbur.Wara lijofilizzazzjoni u mbagħad analizzati mill-HPLC, il-prodott purifikat għandu purità ta '98.2% u jista' jiġi utilizzat aktar għar-riċerka u l-iżvilupp tal-pass li jmiss.
Figura 3. Il-flash chromatogram tal-kampjun fuq skartoċċ C18AQ.
Bħala konklużjoni, l-iskartoċċ flash SepaFlash C18AQ RP flimkien mas-sistema tal-kromatografija flash SepaBean™magna tista 'toffri soluzzjoni veloċi u effettiva għall-purifikazzjoni ta' kampjuni polari jew idrofiliċi qawwija.
Hemm serje ta 'skrataċ flash SepaFlash C18AQ RP bi speċifikazzjonijiet differenti minn Santai Technology (kif muri fit-Tabella 2).
| Numru tal-Oġġett | Daqs tal-Kolonna | Rata tal-Fluss (mL/min) | Max.Pressjoni (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5.4 g | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
Tabella 2. Skrataċ flash SepaFlash C18AQ RP.Materjali tal-ippakkjar: Silika sferika ta 'effiċjenza għolja C18(AQ)-bonded, 20 - 45 μm, 100 Å.
Għal aktar informazzjoni dwar speċifikazzjonijiet dettaljati tal-magna SepaBean™, jew l-informazzjoni dwar l-ordnijiet dwar l-iskrataċ flash tas-serje SepaFlash, jekk jogħġbok żur il-websajt tagħna.
Ħin tal-post: Ottubru-12-2018