Mingzu Yang, Bo Xu
Pusat R&D Aplikasi
pengenalan
Antibiotik ialah kelas metabolit sekunder yang dihasilkan oleh mikroorganisma (termasuk bakteria, kulat, actinomycetes) atau sebatian serupa yang disintesis secara kimia atau separa disintesis.Antibiotik boleh menghalang pertumbuhan dan kemandirian mikroorganisma lain.Antibiotik pertama yang ditemui oleh manusia, penisilin, ditemui oleh ahli mikrobiologi British Alexander Fleming pada tahun 1928. Beliau memerhatikan bahawa bakteria di sekitar acuan tidak boleh tumbuh dalam hidangan kultur staphylococcus yang tercemar dengan acuan.Beliau berpendapat bahawa acuan mesti merembeskan bahan antibakteria, yang dinamakannya penisilin pada tahun 1928. Walau bagaimanapun, bahan-bahan aktif tidak disucikan pada masa itu.Pada tahun 1939, Ernst Chain dan Howard Florey dari Universiti Oxford memutuskan untuk membangunkan ubat yang boleh merawat jangkitan bakteria.Selepas menghubungi Fleming untuk mendapatkan strain, mereka berjaya mengekstrak dan menulenkan penisilin daripada strain.Untuk kejayaan pembangunan penisilin sebagai ubat terapeutik, Fleming, Chain dan Florey berkongsi Hadiah Nobel dalam Perubatan 1945.
Antibiotik digunakan sebagai agen antibakteria untuk merawat atau mencegah jangkitan kuman.Terdapat beberapa kategori utama antibiotik yang digunakan sebagai agen antibakteria: antibiotik β-laktam (termasuk penisilin, cephalosporin, dll.), antibiotik aminoglikosida, antibiotik makrolida, antibiotik tetrasiklin, kloramfenikol (jumlah antibiotik sintetik), dan lain-lain. Sumber antibiotik termasuk penapaian biologi, separa sintesis dan sintesis total.Antibiotik yang dihasilkan melalui penapaian biologi perlu diubah suai secara struktur melalui kaedah kimia kerana kestabilan kimia, kesan sampingan toksik, spektrum antibakteria dan isu-isu lain.Selepas diubah suai secara kimia, antibiotik boleh mencapai peningkatan kestabilan, mengurangkan kesan sampingan toksik, mengembangkan spektrum antibakteria, mengurangkan rintangan dadah, meningkatkan bioavailabiliti, dan dengan itu meningkatkan kesan rawatan ubat.Oleh itu, antibiotik separa sintetik kini merupakan arah yang paling popular dalam pembangunan ubat antibiotik.
Dalam pembangunan antibiotik separa sintetik, antibiotik mempunyai sifat ketulenan rendah, banyak produk sampingan dan komponen kompleks kerana ia berasal daripada produk penapaian mikrob.Dalam kes ini, analisis dan kawalan kekotoran dalam antibiotik separa sintetik adalah amat penting.Untuk mengenal pasti dan mencirikan kekotoran dengan berkesan, adalah perlu untuk mendapatkan jumlah kekotoran yang mencukupi daripada produk sintetik antibiotik separa sintetik.Antara teknik penyediaan bendasing yang biasa digunakan, kromatografi denyar ialah kaedah kos efektif dengan kelebihan seperti jumlah pemuatan sampel yang besar, kos rendah, penjimatan masa, dsb. Kromatografi denyar semakin banyak digunakan oleh penyelidik sintetik.
Dalam siaran ini, kekotoran utama antibiotik aminoglikosida separa sintetik telah digunakan sebagai sampel dan disucikan oleh kartrij SepaFlash C18AQ yang digabungkan dengan sistem kromatografi denyar mesin SepaBean™.Produk sasaran yang memenuhi keperluan telah berjaya diperoleh, mencadangkan penyelesaian yang sangat cekap untuk penulenan sebatian ini.
Bahagian Eksperimen
Sampel itu disediakan oleh syarikat farmaseutikal tempatan.Sampel adalah sejenis karbohidrat polisiklik amino dan struktur molekulnya adalah serupa dengan antibiotik aminoglikosida.Kekutuban sampel agak tinggi, menjadikannya sangat larut dalam air.Gambarajah skematik struktur molekul sampel ditunjukkan dalam Rajah 1. Ketulenan sampel mentah adalah kira-kira 88% seperti yang dianalisis oleh HPLC.Untuk penulenan sebatian kekutuban tinggi ini, sampel hampir tidak akan disimpan pada lajur C18 biasa mengikut pengalaman kami sebelum ini.Oleh itu, lajur C18AQ telah digunakan untuk penulenan sampel.
Rajah 1. Gambarajah skematik struktur molekul sampel.
Untuk menyediakan larutan sampel, 50 mg sampel mentah telah dilarutkan dalam 5 mL air tulen dan kemudian ultrasonik untuk menjadikannya larutan jernih sepenuhnya.Larutan sampel kemudian disuntik ke dalam ruangan kilat oleh penyuntik.Persediaan eksperimen penulenan kilat disenaraikan dalam Jadual 1.
| Alat | Mesin SepaBean™ 2 | |
| Kartrij | 12 g SepaFlash C18AQ RP kartrij denyar (silika sfera, 20 - 45μm, 100 Å, Nombor pesanan：SW-5222-012-SP(AQ)) | |
| Panjang gelombang | 204 nm, 220 nm | |
| Fasa mudah alih | Pelarut A: Air Pelarut B: Acetonitrile | |
| Kadar aliran | 15 mL/min | |
| Pemuatan sampel | 50 mg | |
| Kecerunan | Masa (min) | Pelarut B (%) |
| 0 | 0 | |
| 19.0 | 8 | |
| 47.0 | 80 | |
| 52.0 | 80 | |
Keputusan dan perbincangan
Kromatogram denyar sampel pada kartrij C18AQ ditunjukkan dalam Rajah 2. Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 2, sampel sangat kutub dikekalkan dengan berkesan pada kartrij C18AQ.Selepas lyopholization untuk pecahan yang dikumpul, produk sasaran mempunyai ketulenan 96.2% (seperti ditunjukkan dalam Rajah 3) oleh analisis HPLC.Keputusan menunjukkan bahawa produk yang telah dimurnikan boleh digunakan lagi dalam penyelidikan dan pembangunan langkah seterusnya.
Rajah 2. Kromatogram kilat bagi sampel pada kartrij C18AQ.
Rajah 3. Kromatogram HPLC produk sasaran.
Kesimpulannya, kartrij denyar SepaFlash C18AQ RP digabungkan dengan sistem kromatografi denyar Mesin SepaBean™ boleh menawarkan penyelesaian yang pantas dan berkesan untuk penulenan sampel yang sangat kutub.
Mengenai kartrij denyar SepaFlash C18AQ RP
Terdapat satu siri kartrij denyar SepaFlash C18AQ RP dengan spesifikasi berbeza daripada Teknologi Santai (seperti ditunjukkan dalam Jadual 2).
| Nombor Item | Saiz Lajur | Kadar aliran (mL/min) | Tekanan Maks (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5.4 g | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
Jadual 2. Katrij denyar SepaFlash C18AQ RP.Bahan pembungkusan: Silika terikat sfera C18(AQ) berkecekapan tinggi, 20 - 45 μm, 100 Å.
Untuk maklumat lanjut tentang spesifikasi terperinci mesin SepaBean™, atau maklumat pesanan pada kartrij denyar siri SepaFlash, sila lawati tapak web kami.
Masa siaran: 26-Okt-2018