Rui Huang, Bo Xu
Permohonan R & D Pusat
Pengenalan
Peptida adalah sebatian yang terdiri daripada asid amino, masing -masing mempunyai sifat fizikal dan kimia yang unik kerana pelbagai jenis dan susunan residu asid amino yang membentuk urutannya. Dengan perkembangan sintesis kimia fasa pepejal, sintesis kimia pelbagai peptida aktif telah membuat kemajuan yang besar. Walau bagaimanapun, disebabkan oleh komposisi rumit peptida yang diperolehi oleh sintesis fasa pepejal, produk akhir harus disucikan oleh kaedah pemisahan yang boleh dipercayai. Kaedah pemurnian yang biasa digunakan untuk peptida termasuk kromatografi pertukaran ion (IEC) dan kromatografi cecair prestasi tinggi fasa yang diterbalik di mana kartrij RP C18 Sepaflash digunakan untuk pemurnian pesat thymopentin (TP-5) dan produk sasaran memenuhi keperluan diperolehi.
Rajah 1. 20 asid amino biasa (diterbitkan semula dari www.bachem.com).
Terdapat 20 jenis asid amino yang biasa dalam komposisi peptida. Asid amino ini boleh dibahagikan kepada kumpulan berikut mengikut sifat polaritas dan asid-asas mereka: bukan polar (hidrofobik), kutub (tidak dikenakan), berasid atau asas (seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 1). Dalam urutan peptida, jika asid amino yang membentuk urutan kebanyakannya polar (seperti yang ditandai dengan warna merah jambu dalam Rajah 1), seperti sistein, glutamin, asparagine, serine, threonine, tirosin, dan lain -lain. Semasa prosedur pemurnian untuk sampel peptida kutub yang kuat oleh kromatografi fasa terbalik, fenomena yang dipanggil keruntuhan fasa hidrofobik akan berlaku (merujuk kepada nota aplikasi yang diterbitkan oleh SaNai Technologies: runtuh fasa hidrofobik, lajur kromatografi fasa terbalik AQ dan aplikasi mereka). Berbanding dengan lajur C18 biasa, lajur C18AQ yang lebih baik paling sesuai untuk pemurnian sampel kutub atau hidrofilik yang kuat. Dalam jawatan ini, peptida kutub yang kuat digunakan sebagai sampel dan disucikan oleh lajur C18AQ. Akibatnya, produk sasaran memenuhi keperluan diperoleh dan boleh digunakan dalam penyelidikan dan pembangunan berikut.
| Instrumen | Sepabean™mesin 2 | |||
| Kartrij | 12 G Sepaflash C18 RP Flash Cartridge (Silica Spherical, 20-45 μm, 100 Å, Order Nunber: SW-5222-012-SP) | 12 G Sepaflash C18AQ RP Kartrij Flash (Silika Sfera, 20-45 μm, 100 Å, Nombor Pesanan: SW-5222-012-SP (AQ)) | ||
| Panjang gelombang | 254 nm, 220 nm | 214 nm | ||
| Fasa mudah alih | Pelarut A: air Pelarut B: Acetonitrile | |||
| Kadar aliran | 15 ml/min | 20 ml/min | ||
| Memuatkan sampel | 30 mg | |||
| Kecerunan | Masa (CV) | Pelarut b (%) | Masa (min) | Pelarut b (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
Keputusan dan perbincangan
Untuk membandingkan prestasi pemurnian untuk sampel peptida kutub antara lajur C18 biasa dan lajur C18AQ, kami menggunakan lajur C18 biasa untuk pemurnian kilat sampel sebagai permulaan. Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 2, disebabkan oleh keruntuhan fasa hidrofobik rantai C18 yang disebabkan oleh nisbah berair yang tinggi, sampel itu hampir tidak disimpan pada kartrij C18 biasa dan secara langsung dielakkan oleh fasa mudah alih. Akibatnya, sampel tidak dipisahkan dan disucikan dengan berkesan.
Rajah 2. Kromatogram flash sampel pada kartrij C18 biasa.
Seterusnya, kami menggunakan lajur C18AQ untuk penyucian kilat sampel. Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 3, peptida telah dikekalkan dengan berkesan pada lajur dan kemudian keluar. Produk sasaran dipisahkan dari kekotoran dalam sampel mentah dan dikumpulkan. Selepas lyophilization dan kemudian dianalisis oleh HPLC, produk yang disucikan mempunyai kesucian 98.2% dan boleh digunakan lagi untuk penyelidikan dan pembangunan langkah seterusnya.
Rajah 3. Kromatogram flash sampel pada kartrij C18AQ.
Kesimpulan™Mesin boleh menawarkan penyelesaian yang cepat dan berkesan untuk pemurnian sampel kutub atau hidrofilik yang kuat.
Terdapat satu siri kartrij flash Sepaflash C18AQ dengan spesifikasi yang berbeza dari teknologi SAITAI (seperti yang ditunjukkan dalam Jadual 2).
| Nombor item | Saiz lajur | Kadar aliran (ml/min) | Max.pressure (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP (aq) | 5.4 g | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP (aq) | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP (aq) | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP (aq) | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP (aq) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-52222-120-SP (AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP (aq) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP (aq) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
Jadual 2. Sepaflash C18AQ RP Kartrij Flash. Bahan Pembungkusan: Silika Silika Sfera C18 (AQ), 20-45 μm, 100 Å.
Untuk maklumat lanjut mengenai spesifikasi terperinci mesin Sepabean ™, atau maklumat pesanan mengenai kartrij flash siri Sepaflash, sila lawati laman web kami.
Masa Post: Okt-12-2018