Rui Huang, Bo Xu
Pusat R&D Aplikasi
pengenalan
Peptida ialah sebatian yang terdiri daripada asid amino, setiap satunya mempunyai sifat fizikal dan kimia yang unik disebabkan oleh jenis dan susunan sisa asid amino yang berbeza yang membentuk urutannya.Dengan perkembangan sintesis kimia fasa pepejal, sintesis kimia pelbagai peptida aktif telah mencapai kemajuan yang besar.Walau bagaimanapun, disebabkan oleh komposisi rumit peptida yang diperolehi oleh sintesis fasa pepejal, produk akhir harus disucikan dengan kaedah pemisahan yang boleh dipercayai.Kaedah penulenan yang biasa digunakan untuk peptida termasuk kromatografi pertukaran ion (IEC) dan kromatografi cecair prestasi tinggi fasa terbalik (RP-HPLC), yang mempunyai kelemahan kapasiti pemuatan sampel yang rendah, kos media pengasingan yang tinggi, peralatan pengasingan yang rumit dan mahal, dsb. Untuk penulenan pantas peptida molekul kecil (MW < 1 kDa), satu kes aplikasi yang berjaya telah diterbitkan sebelum ini oleh Santai Technologies, di mana kartrij SepaFlash RP C18 digunakan untuk penulenan cepat thymopentin (TP-5) dan produk sasaran yang memenuhi keperluan telah diperolehi.
Rajah 1. 20 asid amino biasa (dihasilkan semula daripada www.bachem.com).
Terdapat 20 jenis asid amino yang biasa dalam komposisi peptida.Asid amino ini boleh dibahagikan kepada kumpulan berikut mengikut kekutuban dan sifat asid-besnya: bukan kutub (hidrofobik), kutub (tidak bercas), berasid atau bes (seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 1).Dalam urutan peptida, jika asid amino yang membentuk jujukan kebanyakannya bersifat polar (seperti yang ditandakan dalam warna merah jambu dalam Rajah 1), seperti Cysteine, Glutamine, Asparagine, Serine, Threonine, Tyrosine, dll. maka peptida ini mungkin mempunyai kuat kekutuban dan sangat larut dalam air.Semasa prosedur penulenan untuk sampel peptida kutub kuat ini melalui kromatografi fasa terbalik, fenomena yang dipanggil keruntuhan fasa hidrofobik akan berlaku (rujuk nota aplikasi yang diterbitkan sebelum ini oleh Santai Technologies: Keruntuhan Fasa Hidrofobik, Lajur Kromatografi Fasa Terbalik AQ dan Aplikasinya).Berbanding dengan lajur C18 biasa, lajur C18AQ yang dipertingkatkan adalah paling sesuai untuk penulenan sampel kutub atau hidrofilik yang kuat.Dalam jawatan ini, peptida polar yang kuat telah digunakan sebagai sampel dan disucikan oleh lajur C18AQ.Hasilnya, produk sasaran yang memenuhi keperluan telah diperolehi dan boleh digunakan dalam penyelidikan dan pembangunan berikut.
| Alat | SepaBean™mesin 2 | |||
| Kartrij | 12 g kartrij denyar SepaFlash C18 RP (silika sfera, 20 - 45 μm, 100 Å, Pesanan nunber：SW-5222-012-SP) | 12 g SepaFlash C18AQ RP kartrij denyar (silika sfera, 20 - 45 μm, 100 Å, Nombor pesanan：SW-5222-012-SP(AQ)) | ||
| Panjang gelombang | 254 nm, 220 nm | 214 nm | ||
| Fasa mudah alih | Pelarut A: Air Pelarut B: Acetonitrile | |||
| Kadar aliran | 15 mL/min | 20 mL/min | ||
| Pemuatan sampel | 30 mg | |||
| Kecerunan | Masa (CV) | Pelarut B (%) | Masa (min) | Pelarut B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
Keputusan dan perbincangan
Untuk membandingkan prestasi penulenan bagi sampel peptida kutub antara lajur C18 biasa dan lajur C18AQ, kami menggunakan lajur C18 biasa untuk pembersihan kilat sampel sebagai permulaan.Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 2, disebabkan oleh keruntuhan fasa hidrofobik rantai C18 yang disebabkan oleh nisbah akueus yang tinggi, sampel hampir tidak disimpan pada kartrij C18 biasa dan terus dicairkan oleh fasa mudah alih.Akibatnya, sampel tidak diasingkan dan disucikan dengan berkesan.
Rajah 2. Kromatogram kilat bagi sampel pada kartrij C18 biasa.
Seterusnya, kami menggunakan lajur C18AQ untuk pembersihan kilat sampel.Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 3, peptida telah dikekalkan dengan berkesan pada lajur dan kemudian dielusi keluar.Produk sasaran diasingkan daripada kekotoran dalam sampel mentah dan dikumpulkan.Selepas lyophilization dan kemudian dianalisis oleh HPLC, produk yang telah disucikan mempunyai ketulenan 98.2% dan boleh digunakan selanjutnya untuk penyelidikan dan pembangunan langkah seterusnya.
Rajah 3. Kromatogram kilat bagi sampel pada kartrij C18AQ.
Kesimpulannya, kartrij denyar SepaFlash C18AQ RP digabungkan dengan sistem kromatografi denyar SepaBean™mesin boleh menawarkan penyelesaian yang cepat dan berkesan untuk penulenan sampel kutub atau hidrofilik yang kuat.
Terdapat satu siri kartrij denyar SepaFlash C18AQ RP dengan spesifikasi berbeza daripada Teknologi Santai (seperti ditunjukkan dalam Jadual 2).
| Nombor Item | Saiz Lajur | Kadar aliran (mL/min) | Tekanan Maks (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5.4 g | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
Jadual 2. Katrij denyar SepaFlash C18AQ RP.Bahan pembungkusan: Silika terikat sfera C18(AQ) berkecekapan tinggi, 20 - 45 μm, 100 Å.
Untuk maklumat lanjut tentang spesifikasi terperinci mesin SepaBean™, atau maklumat pesanan pada kartrij denyar siri SepaFlash, sila lawati tapak web kami.
Masa siaran: 12-Okt-2018