मजबूत ध्रुवीय पेप्टाइड्सच्या शुद्धीकरणामध्ये C18AQ स्तंभांचा वापर

रुई हुआंग, बो झू
अर्ज R&D केंद्र

परिचय
पेप्टाइड हे अमीनो ऍसिडचे बनलेले एक संयुग आहे, ज्यातील प्रत्येकामध्ये अद्वितीय भौतिक आणि रासायनिक गुणधर्म आहेत कारण अमीनो ऍसिडच्या अवशेषांच्या विविध प्रकारांमुळे आणि क्रमाने त्याचे अनुक्रम तयार केले जाते.घन टप्प्याच्या रासायनिक संश्लेषणाच्या विकासासह, विविध सक्रिय पेप्टाइड्सच्या रासायनिक संश्लेषणाने मोठी प्रगती केली आहे.तथापि, घन टप्प्याच्या संश्लेषणाद्वारे प्राप्त झालेल्या पेप्टाइडच्या जटिल रचनेमुळे, अंतिम उत्पादन विश्वसनीय पृथक्करण पद्धतींनी शुद्ध केले पाहिजे.पेप्टाइड्ससाठी सामान्यतः वापरल्या जाणाऱ्या शुद्धीकरण पद्धतींमध्ये आयन एक्सचेंज क्रोमॅटोग्राफी (आयईसी) आणि रिव्हर्स्ड-फेज हाय परफॉर्मन्स लिक्विड क्रोमॅटोग्राफी (आरपी-एचपीएलसी) यांचा समावेश होतो, ज्यामध्ये कमी नमुना लोडिंग क्षमता, पृथक्करण माध्यमाची उच्च किंमत, क्लिष्ट आणि महाग विभक्त उपकरणे यांचे तोटे आहेत. इ. लहान रेणू पेप्टाइड्सच्या जलद शुध्दीकरणासाठी (MW < 1 kDa), संताई टेक्नॉलॉजीजने यापूर्वी एक यशस्वी ऍप्लिकेशन केस प्रकाशित केले होते, ज्यामध्ये एक SepaFlash RP C18 काडतूस thymopentin (TP-5) च्या जलद शुद्धीकरणासाठी वापरण्यात आले होते आणि आवश्यकता पूर्ण करणारे लक्ष्य उत्पादन प्राप्त झाले.

आकृती 1. 20 सामान्य अमीनो ऍसिड (www.bachem.com वरून पुनरुत्पादित).

पेप्टाइड्सच्या रचनेत 20 प्रकारचे अमीनो ऍसिड असतात.ही अमिनो आम्ल त्यांच्या ध्रुवीयता आणि आम्ल-बेस गुणधर्मानुसार खालील गटांमध्ये विभागली जाऊ शकते: नॉन-ध्रुवीय (हायड्रोफोबिक), ध्रुवीय (न चार्ज केलेले), आम्लयुक्त किंवा मूलभूत (आकृती 1 मध्ये दर्शविल्याप्रमाणे).पेप्टाइड क्रमामध्ये, जर अमीनो ऍसिडचे अनुक्रम बनवणारे बहुतेक ध्रुवीय असतात (आकृती 1 मध्ये गुलाबी रंगात चिन्हांकित केल्याप्रमाणे), जसे की सिस्टीन, ग्लूटामाइन, एस्पॅरॅजिन, सेरीन, थ्रोनिन, टायरोसिन इ. तर या पेप्टाइडमध्ये मजबूत असू शकते. ध्रुवीयता आणि पाण्यात अत्यंत विरघळणारे असावे.रिव्हर्स्ड-फेज क्रोमॅटोग्राफीद्वारे या मजबूत ध्रुवीय पेप्टाइड नमुन्यांसाठी शुद्धीकरण प्रक्रियेदरम्यान, हायड्रोफोबिक फेज कोलॅप्स नावाची घटना घडेल (संताई टेक्नॉलॉजीजने यापूर्वी प्रकाशित केलेल्या ऍप्लिकेशन नोटचा संदर्भ घ्या: हायड्रोफोबिक फेज कोलॅप्स, AQ रिव्हर्स्ड फेज क्रोमॅटोग्राफी कॉलम्स आणि द).नियमित C18 स्तंभांच्या तुलनेत, सुधारित C18AQ स्तंभ मजबूत ध्रुवीय किंवा हायड्रोफिलिक नमुन्यांच्या शुद्धीकरणासाठी सर्वात योग्य आहेत.या पोस्टमध्ये, एक मजबूत ध्रुवीय पेप्टाइड नमुना म्हणून वापरला गेला आणि C18AQ स्तंभाद्वारे शुद्ध केला गेला.परिणामी, आवश्यकता पूर्ण करणारे लक्ष्य उत्पादन प्राप्त झाले आणि पुढील संशोधन आणि विकासासाठी वापरले जाऊ शकते.