रुई हुआंग, बो झू
अनुप्रयोग आर अँड डी सेंटर
परिचय
पेप्टाइड एक अमीनो ids सिडस् बनलेला एक कंपाऊंड आहे, त्यापैकी प्रत्येकामध्ये अमीनो acid सिडच्या अवशेषांच्या वेगवेगळ्या प्रकारांमुळे आणि क्रमांमुळे अनन्य भौतिक आणि रासायनिक गुणधर्म आहेत. सॉलिड फेज रासायनिक संश्लेषणाच्या विकासासह, विविध सक्रिय पेप्टाइड्सच्या रासायनिक संश्लेषणामुळे मोठी प्रगती झाली आहे. तथापि, सॉलिड फेज सिंथेसिसद्वारे प्राप्त केलेल्या पेप्टाइडच्या जटिल रचनामुळे, अंतिम उत्पादन विश्वसनीय विभाजन पद्धतींनी शुद्ध केले पाहिजे. पेप्टाइड्ससाठी सामान्यतः वापरल्या जाणार्‍या शुध्दीकरण पद्धतींमध्ये आयन एक्सचेंज क्रोमॅटोग्राफी (आयईसी) आणि उलट-फेज हाय परफॉरमन्स लिक्विड क्रोमॅटोग्राफी (आरपी-एचपीएलसी) समाविष्ट आहे, ज्यात कमी नमुना लोडिंग क्षमता, विभक्त आणि महागड्या विभक्त उपकरणे इत्यादींचे तोटे आहेत. ज्यामध्ये थायमोपेन्टिन (टीपी -5) च्या वेगवान शुध्दीकरणासाठी सेपफ्लॅश आरपी सी 18 कार्ट्रिजचा वापर केला गेला आणि आवश्यकतेची पूर्तता लक्ष्यित उत्पादन प्राप्त केली.
आकृती 1. 20 सामान्य अमीनो ids सिडस् (www.bachem.com वरून पुनरुत्पादित).
पेप्टाइड्सच्या रचनेत 20 प्रकारचे अमीनो ids सिडस् आहेत. या अमीनो ids सिडस् त्यांच्या ध्रुवपणा आणि acid सिड-बेस प्रॉपर्टीनुसार खालील गटांमध्ये विभागले जाऊ शकतात: नॉन-ध्रुवीय (हायड्रोफोबिक), ध्रुवीय (अखंड), आम्ल किंवा मूलभूत (आकृती 1 मध्ये दर्शविल्याप्रमाणे). पेप्टाइड अनुक्रमात, जर अनुक्रमे तयार करणारे अमीनो ids सिड बहुतेक ध्रुवीय असतात (आकृती 1 मध्ये गुलाबी रंगात चिन्हांकित केल्याप्रमाणे), जसे सिस्टीन, ग्लूटामाइन, शतावरी, सेरीन, थ्रीओन, टायरोसिन इत्यादी. तर या पेप्टाइडमध्ये एक मजबूत ध्रुवपणा असू शकतो आणि पाण्यात अत्यंत विघटनशील असू शकते. उलट-फेज क्रोमॅटोग्राफीद्वारे या मजबूत ध्रुवीय पेप्टाइड नमुन्यांसाठी शुध्दीकरण प्रक्रियेदरम्यान, हायड्रोफोबिक फेज कोसळणे नावाची एक घटना (संताई तंत्रज्ञानाद्वारे पूर्वी प्रकाशित केलेल्या अनुप्रयोग नोटचा संदर्भ घ्या: हायड्रोफोबिक फेज कोसळणे, एक्यू उलट फेज क्रोमॅटोग्राफी स्तंभ आणि त्यांचे अनुप्रयोग). नियमित सी 18 स्तंभांच्या तुलनेत, सुधारित सी 18 एक्यू स्तंभ मजबूत ध्रुवीय किंवा हायड्रोफिलिक नमुन्यांच्या शुद्धीकरणासाठी सर्वात योग्य आहेत. या पोस्टमध्ये, एक मजबूत ध्रुवीय पेप्टाइड नमुना म्हणून वापरला गेला आणि सी 18 एक्यू स्तंभाद्वारे शुद्ध केला गेला. परिणामी, आवश्यकतेची पूर्तता लक्ष्यित उत्पादन प्राप्त केली गेली आणि खालील संशोधन आणि विकासामध्ये वापरली जाऊ शकते.
| साधन | सेपबियन™मशीन 2 | |||
| काडतुसे | 12 ग्रॅम सेपॅफ्लॅश सी 18 आरपी फ्लॅश कार्ट्रिज (गोलाकार सिलिका, 20-45 μ मी, 100 Å, ऑर्डर नुनबर ● एसडब्ल्यू -52222-012-एसपी) | 12 ग्रॅम सेपफ्लॅश सी 18 एक्यू आरपी फ्लॅश कार्ट्रिज (गोलाकार सिलिका, 20-45 μ मी, 100 Å, ऑर्डर क्रमांक ● एसडब्ल्यू -5222-012-एसपी (एक्यू)) | ||
| तरंगलांबी | 254 एनएम, 220 एनएम | 214 एनएम | ||
| मोबाइल टप्पा | दिवाळखोर नसलेला अ: पाणी सॉल्व्हेंट बी: एसीटोनिट्रिल | |||
| प्रवाह दर | 15 मिली/मिनिट | 20 मिली/मिनिट | ||
| नमुना लोडिंग | 30 मिलीग्राम | |||
| ग्रेडियंट | वेळ (सीव्ही) | दिवाळखोर नसलेला बी (%) | वेळ (मि) | दिवाळखोर नसलेला बी (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
परिणाम आणि चर्चा
नियमित सी 18 स्तंभ आणि सी 18 एएक्यू स्तंभ दरम्यान ध्रुवीय पेप्टाइड नमुन्यासाठी शुद्धीकरणाच्या कामगिरीची तुलना करण्यासाठी, आम्ही प्रारंभ म्हणून नमुन्याच्या फ्लॅश शुध्दीकरणासाठी नियमित सी 18 स्तंभ वापरला. आकृती 2 मध्ये दर्शविल्याप्रमाणे, उच्च जलीय प्रमाणामुळे उद्भवलेल्या सी 18 साखळ्यांच्या हायड्रोफोबिक फेज कोसळल्यामुळे, नियमित सी 18 कारतूसवर हा नमुना केवळ कायम ठेवला गेला आणि मोबाइल टप्प्याने थेट बाहेर काढला गेला. परिणामी, नमुना प्रभावीपणे विभक्त आणि शुद्ध केला गेला नाही.
आकृती 2. नियमित सी 18 कार्ट्रिजवरील नमुन्याचा फ्लॅश क्रोमॅटोग्राम.
पुढे, आम्ही नमुन्याच्या फ्लॅश शुध्दीकरणासाठी सी 18 एक्यू स्तंभ वापरला. आकृती 3 मध्ये दर्शविल्याप्रमाणे, पेप्टाइड प्रभावीपणे स्तंभात कायम ठेवला गेला आणि नंतर एलिटेड. लक्ष्य उत्पादन कच्च्या नमुन्यातील अशुद्धतेपासून विभक्त केले गेले आणि गोळा केले. लियोफिलायझेशन नंतर आणि नंतर एचपीएलसीद्वारे विश्लेषण केल्यानंतर, शुद्ध केलेल्या उत्पादनाची शुद्धता 98.2% आहे आणि पुढील चरण संशोधन आणि विकासासाठी पुढील उपयोग केला जाऊ शकतो.
आकृती 3. सी 18 एक्यू कार्ट्रिजवरील नमुन्याचा फ्लॅश क्रोमॅटोग्राम.
शेवटी, फ्लॅश क्रोमॅटोग्राफी सिस्टम सेपाबियनसह एकत्रित सेपॅफ्लॅश सी 18 एक्यू आरपी फ्लॅश कार्ट्रिज™मजबूत ध्रुवीय किंवा हायड्रोफिलिक नमुन्यांच्या शुद्धीकरणासाठी मशीन वेगवान आणि प्रभावी समाधान देऊ शकते.
सेपफ्लॅश सी 18 एक्यू आरपी फ्लॅश काडतुसेची मालिका आहे ज्यात संताई तंत्रज्ञानाच्या भिन्न वैशिष्ट्यांसह (तक्ता 2 मध्ये दर्शविल्याप्रमाणे).
| आयटम क्रमांक | स्तंभ आकार | प्रवाह दर (एमएल/मिनिट) | मॅक्स.प्रेस (पीएसआय/बार) |
| एसडब्ल्यू -5222-004-एसपी (एक्यू) | 5.4 ग्रॅम | 5-15 | 400/27.5 |
| एसडब्ल्यू -5222-012-एसपी (एक्यू) | 20 ग्रॅम | 10-25 | 400/27.5 |
| एसडब्ल्यू -5222-025-एसपी (एक्यू) | 33 ग्रॅम | 10-25 | 400/27.5 |
| एसडब्ल्यू -5222-040-एसपी (एक्यू) | 48 जी | 15-30 | 400/27.5 |
| एसडब्ल्यू -5222-080-एसपी (एक्यू) | 105 ग्रॅम | 25-50 | 350/24.0 |
| एसडब्ल्यू -5222-120-एसपी (एक्यू) | 155 ग्रॅम | 30-60 | 300/20.7 |
| एसडब्ल्यू -52222220-एसपी (एक्यू) | 300 ग्रॅम | 40-80 | 300/20.7 |
| एसडब्ल्यू -5222-330-एसपी (एक्यू) | 420 जी | 40-80 | 250/17.2 |
सारणी 2. सेपफ्लॅश सी 18 एक्यू आरपी फ्लॅश काडतुसे. पॅकिंग मटेरियल: उच्च-कार्यक्षमता गोलाकार सी 18 (एक्यू) -बॉन्डेड सिलिका, 20-45 μ मी, 100 Å.
सेपबियन ™ मशीनच्या तपशीलवार वैशिष्ट्यांविषयी किंवा सेपफ्लॅश मालिका फ्लॅश काडतुसेवरील ऑर्डरिंग माहितीसाठी अधिक माहितीसाठी, कृपया आमच्या वेबसाइटला भेट द्या.
पोस्ट वेळ: ऑक्टोबर -12-2018