Руй Хуан, Бо Шү
Хэрэглээний R&D төв
Оршил
Пептид нь амин хүчлүүдээс тогтсон нэгдэл бөгөөд тэдгээрийн дарааллыг бүрдүүлдэг амин хүчлийн үлдэгдлүүдийн төрөл, дарааллаас шалтгаалан тус бүр нь өвөрмөц физик, химийн шинж чанартай байдаг.Хатуу фазын химийн синтезийг хөгжүүлснээр янз бүрийн идэвхтэй пептидийн химийн нийлэгжилт ихээхэн ахиц дэвшил гаргасан.Гэсэн хэдий ч хатуу фазын синтезээр олж авсан пептидийн нарийн төвөгтэй найрлагатай тул эцсийн бүтээгдэхүүнийг найдвартай тусгаарлах аргаар цэвэршүүлэх шаардлагатай.Пептидийг цэвэршүүлэх түгээмэл хэрэглэгддэг аргууд нь ион солилцооны хроматографи (IEC) ба урвуу фазын өндөр үзүүлэлттэй шингэн хроматографи (RP-HPLC) зэрэг нь дээжийг ачаалах хүчин чадал бага, салгах материалын өндөр өртөг, нарийн төвөгтэй, өндөр өртөгтэй салгах төхөөрөмж зэрэг сул талуудтай. гэх мэт. Жижиг молекул пептидүүдийг (МВт < 1 кДа) хурдан цэвэршүүлэхийн тулд өмнө нь Santai Technologies компани амжилттай хэрэглэгдэж байсан бөгөөд үүнд SepaFlash RP C18 хайрцаг thymopentin (TP-5) болон шаардлагад нийцсэн зорилтот бүтээгдэхүүнийг олж авсан.
Зураг 1. 20 нийтлэг амин хүчил (www.bachem.com сайтаас хуулбарласан).
Пептидийн найрлагад нийтлэг байдаг 20 төрлийн амин хүчил байдаг.Эдгээр амин хүчлүүдийг туйлшрал ба хүчил-суурь шинж чанараар нь дараах бүлгүүдэд хувааж болно: туйлшралгүй (гидрофобик), туйлт (цэнэггүй), хүчиллэг эсвэл үндсэн (Зураг 1-т үзүүлсэн шиг).Хэрэв пептидийн дараалалд цистеин, глутамин, аспарагин, серин, треонин, тирозин гэх мэт дарааллыг бүрдүүлдэг амин хүчлүүд нь ихэвчлэн туйлтай (1-р зурагт ягаан өнгөөр тэмдэглэгдсэн) байвал энэ пептид нь хүчтэй байж болно. туйлшралтай, усанд сайн уусдаг.Эдгээр хүчтэй туйлын пептидийн дээжийг урвуу фазын хроматографийн аргаар цэвэршүүлэх процедурын явцад гидрофобик фазын уналт гэж нэрлэгддэг үзэгдэл тохиолдох болно (Santi Technologies-ээс өмнө нь нийтэлсэн хэрэглээний тэмдэглэлийг үзнэ үү: Гидрофобик фазын уналт, AQ урвуу фазын хроматографийн багана ба тэдгээрийн хэрэглээ).Ердийн C18 баганатай харьцуулахад сайжруулсан C18AQ баганууд нь хүчтэй туйлширсан эсвэл гидрофилик дээжийг цэвэрлэхэд хамгийн тохиромжтой.Энэ нийтлэлд хүчтэй туйлын пептидийг дээж болгон ашиглаж, C18AQ баганаар цэвэршүүлсэн.Үүний үр дүнд шаардлагад нийцсэн зорилтот бүтээгдэхүүнийг авч, дараах судалгаа, боловсруулалтад ашиглах боломжтой болсон.
| Багаж хэрэгсэл | SepaBean™машин 2 | |||
| Хайрцагнууд | 12 гр SepaFlash C18 RP флаш хайрцаг (бөмбөрцөг хэлбэрийн цахиур, 20 - 45 мкм, 100 Å, захиалгын дугаар: SW-5222-012-SP) | 12 г SepaFlash C18AQ RP флаш хайрцаг (бөмбөрцөг хэлбэрийн цахиур, 20 - 45 мкм, 100 Å, захиалгын дугаар: SW-5222-012-SP(AQ)) | ||
| Долгионы урт | 254 нм, 220 нм | 214 нм | ||
| Хөдөлгөөнт үе шат | А уусгагч: Ус Б уусгагч: Ацетонитрил | |||
| Урсгалын хурд | 15 мл/мин | 20 мл/мин | ||
| Дээж ачаалах | 30 мг | |||
| Градиент | Цаг (CV) | Б уусгагч (%) | Цаг (мин) | Б уусгагч (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
Үр дүн ба хэлэлцүүлэг
Энгийн C18 багана болон C18AQ баганын хооронд туйлын пептидийн дээжийн цэвэршүүлэх гүйцэтгэлийг харьцуулахын тулд бид дээжийг флаш цэвэршүүлэхийн тулд ердийн C18 баганыг ашигласан.Зураг 2-т үзүүлсэнчлэн, өндөр усны харьцаанаас үүдэлтэй C18 гинжний гидрофобик фазын задралын улмаас дээж нь ердийн C18 хайрцагт бараг үлдэж, хөдөлгөөнт фазаар шууд ялгарсан.Үүний үр дүнд дээжийг үр дүнтэй салгаж, цэвэршүүлээгүй.
Зураг 2. Энгийн C18 хайрцаг дээрх дээжийн флэш хроматограмм.
Дараа нь бид дээжийг флаш цэвэршүүлэхийн тулд C18AQ баганыг ашигласан.3-р зурагт үзүүлснээр пептидийг багананд үр дүнтэй байлгаж, дараа нь гадагшлуулсан.Зорилтот бүтээгдэхүүнийг түүхий дээжин дэх хольцоос салгаж, цуглуулсан.Лиофилизаци хийсний дараа HPLC-д шинжилсний дараа цэвэршүүлсэн бүтээгдэхүүн нь 98.2% цэвэршилттэй бөгөөд дараагийн шатны судалгаа, боловсруулалтад ашиглах боломжтой.
Зураг 3. C18AQ хайрцаг дээрх дээжийн флэш хроматограмм.
Эцэст нь хэлэхэд SepaFlash C18AQ RP флаш хайрцаг нь SepaBean флаш хроматографийн системтэй хослуулсан.™Энэхүү машин нь хүчтэй туйл буюу гидрофил дээжийг цэвэрлэх хурдан бөгөөд үр дүнтэй шийдлийг санал болгож чадна.
Santai Technology-ээс ялгаатай техникийн үзүүлэлт бүхий SepaFlash C18AQ RP флаш хайрцагнууд байдаг (Хүснэгт 2-т үзүүлэв).
| Зүйлийн дугаар | Баганын хэмжээ | Урсгалын хурд (мл/мин) | Хамгийн их даралт (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5.4 гр | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 гр | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 гр | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 гр | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 гр | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 гр | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 гр | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 гр | 40-80 | 250/17.2 |
Хүснэгт 2. SepaFlash C18AQ RP флаш хайрцагнууд.Сав баглаа боодлын материал: Өндөр үр ашигтай бөмбөрцөг хэлбэртэй C18(AQ)-холбогдсон цахиур, 20 - 45 мкм, 100 Å.
SepaBean™ машины нарийвчилсан техникийн үзүүлэлтүүд болон SepaFlash цувралын флаш хайрцагны захиалгын талаарх дэлгэрэнгүй мэдээллийг манай вэбсайтаас авна уу.
Шуудангийн цаг: 2018 оны 10-р сарын 12