റൂയി ഹുവാങ്, ബോ സൂ
അപേക്ഷ R&D കേന്ദ്രം
ആമുഖം
പെപ്റ്റൈഡ് എന്നത് അമിനോ ആസിഡുകൾ അടങ്ങിയ ഒരു സംയുക്തമാണ്, അവയിൽ ഓരോന്നിനും അതിന്റെ ക്രമം ഉൾക്കൊള്ളുന്ന അമിനോ ആസിഡ് അവശിഷ്ടങ്ങളുടെ വ്യത്യസ്ത തരങ്ങളും ക്രമവും കാരണം അതുല്യമായ ഭൗതികവും രാസപരവുമായ ഗുണങ്ങളുണ്ട്.സോളിഡ് ഫേസ് കെമിക്കൽ സിന്തസിസിന്റെ വികാസത്തോടെ, വിവിധ സജീവ പെപ്റ്റൈഡുകളുടെ രാസ സമന്വയം വലിയ പുരോഗതി കൈവരിച്ചു.എന്നിരുന്നാലും, സോളിഡ് ഫേസ് സിന്തസിസ് വഴി ലഭിച്ച പെപ്റ്റൈഡിന്റെ സങ്കീർണ്ണമായ ഘടന കാരണം, അന്തിമ ഉൽപ്പന്നം വിശ്വസനീയമായ വേർതിരിക്കൽ രീതികൾ ഉപയോഗിച്ച് ശുദ്ധീകരിക്കണം.പെപ്റ്റൈഡുകൾക്കായി സാധാരണയായി ഉപയോഗിക്കുന്ന ശുദ്ധീകരണ രീതികളിൽ അയോൺ എക്സ്ചേഞ്ച് ക്രോമാറ്റോഗ്രഫി (IEC), റിവേഴ്സ്ഡ്-ഫേസ് ഹൈ പെർഫോമൻസ് ലിക്വിഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രഫി (RP-HPLC) എന്നിവ ഉൾപ്പെടുന്നു, അവയ്ക്ക് കുറഞ്ഞ സാമ്പിൾ ലോഡിംഗ് കപ്പാസിറ്റി, സെപ്പറേഷൻ മീഡിയയുടെ ഉയർന്ന വില, സങ്കീർണ്ണവും ചെലവേറിയതുമായ വേർതിരിക്കൽ ഉപകരണങ്ങൾ എന്നിവയുടെ പോരായ്മകളുണ്ട്. ചെറിയ തന്മാത്ര പെപ്റ്റൈഡുകളുടെ (MW <1 kDa) ദ്രുതഗതിയിലുള്ള ശുദ്ധീകരണത്തിനായി, സാന്തായ് ടെക്നോളജീസ് മുമ്പ് ഒരു വിജയകരമായ ആപ്ലിക്കേഷൻ കേസ് പ്രസിദ്ധീകരിച്ചിരുന്നു, അതിൽ തൈമോപെന്റിൻ (TP-5) ദ്രുതഗതിയിലുള്ള ശുദ്ധീകരണത്തിനായി ഒരു SepaFlash RP C18 കാട്രിഡ്ജ് ഉപയോഗിച്ചിരുന്നു. ആവശ്യകതകൾ നിറവേറ്റുന്ന ടാർഗെറ്റ് ഉൽപ്പന്നം ലഭിച്ചു.
ചിത്രം 1. 20 സാധാരണ അമിനോ ആസിഡുകൾ (www.bachem.com ൽ നിന്ന് പുനർനിർമ്മിച്ചത്).
പെപ്റ്റൈഡുകളുടെ ഘടനയിൽ സാധാരണമായ 20 തരം അമിനോ ആസിഡുകളുണ്ട്.ഈ അമിനോ ആസിഡുകളെ അവയുടെ ധ്രുവീകരണവും ആസിഡ്-ബേസ് പ്രോപ്പർട്ടിയും അനുസരിച്ച് ഇനിപ്പറയുന്ന ഗ്രൂപ്പുകളായി തിരിക്കാം: നോൺ-പോളാർ (ഹൈഡ്രോഫോബിക്), ധ്രുവീയ (ചാർജ് ചെയ്യാത്തത്), അമ്ലമോ അടിസ്ഥാനമോ (ചിത്രം 1 ൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നത് പോലെ).പെപ്റ്റൈഡ് ശ്രേണിയിൽ, അമിനോ ആസിഡുകൾ കൂടുതലും ധ്രുവങ്ങളാണെങ്കിൽ (ചിത്രം 1-ൽ പിങ്ക് നിറത്തിൽ അടയാളപ്പെടുത്തിയിരിക്കുന്നതുപോലെ), സിസ്റ്റൈൻ, ഗ്ലൂട്ടാമൈൻ, അസ്പരാഗിൻ, സെറിൻ, ത്രിയോണിൻ, ടൈറോസിൻ മുതലായവ. ഈ പെപ്റ്റൈഡിന് ശക്തമായ ഒരു ശക്തി ഉണ്ടായിരിക്കാം. ധ്രുവീയതയും വെള്ളത്തിൽ വളരെ ലയിക്കുന്നതുമാണ്.റിവേഴ്സ്ഡ്-ഫേസ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫി വഴിയുള്ള ഈ ശക്തമായ പോളാർ പെപ്റ്റൈഡ് സാമ്പിളുകളുടെ ശുദ്ധീകരണ പ്രക്രിയയ്ക്കിടെ, ഹൈഡ്രോഫോബിക് ഫേസ് തകർച്ച എന്നൊരു പ്രതിഭാസം സംഭവിക്കും (സാന്തായ് ടെക്നോളജീസ് മുമ്പ് പ്രസിദ്ധീകരിച്ച ആപ്ലിക്കേഷൻ കുറിപ്പ് കാണുക: ഹൈഡ്രോഫോബിക് ഫേസ് കോലാപ്‌സ്, എക്യു റിവേഴ്സ്ഡ് ഫേസ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫി കോളങ്ങളും അവയുടെ ആപ്ലിക്കേഷനുകളും).സാധാരണ C18 നിരകളുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ, മെച്ചപ്പെട്ട C18AQ നിരകൾ ശക്തമായ പോളാർ അല്ലെങ്കിൽ ഹൈഡ്രോഫിലിക് സാമ്പിളുകളുടെ ശുദ്ധീകരണത്തിന് ഏറ്റവും അനുയോജ്യമാണ്.ഈ പോസ്റ്റിൽ, ശക്തമായ ഒരു പോളാർ പെപ്റ്റൈഡ് സാമ്പിളായി ഉപയോഗിക്കുകയും C18AQ കോളം ഉപയോഗിച്ച് ശുദ്ധീകരിക്കുകയും ചെയ്തു.തൽഫലമായി, ആവശ്യകതകൾ നിറവേറ്റുന്ന ടാർഗെറ്റ് ഉൽപ്പന്നം ലഭിക്കുകയും ഇനിപ്പറയുന്ന ഗവേഷണത്തിലും വികസനത്തിലും ഉപയോഗിക്കുകയും ചെയ്യാം.
| ഉപകരണം | സെപാബീൻ™യന്ത്രം 2 | |||
| വെടിയുണ്ടകൾ | 12 ഗ്രാം SepaFlash C18 RP ഫ്ലാഷ് കാട്രിഡ്ജ് (സ്ഫെറിക്കൽ സിലിക്ക, 20 - 45 μm, 100 Å, ഓർഡർ നമ്പർ:SW-5222-012-SP) | 12 ഗ്രാം SepaFlash C18AQ RP ഫ്ലാഷ് കാട്രിഡ്ജ് (സ്ഫെറിക്കൽ സിലിക്ക, 20 - 45 μm, 100 Å, ഓർഡർ നമ്പർ:SW-5222-012-SP(AQ)) | ||
| തരംഗദൈർഘ്യം | 254 എൻഎം, 220 എൻഎം | 214 എൻഎം | ||
| മൊബൈൽ ഘട്ടം | ലായക A: വെള്ളം ലായക ബി: അസെറ്റോണിട്രൈൽ | |||
| ഒഴുക്ക് നിരക്ക് | 15 മില്ലി/മിനിറ്റ് | 20 മില്ലി/മിനിറ്റ് | ||
| സാമ്പിൾ ലോഡ് ചെയ്യുന്നു | 30 മില്ലിഗ്രാം | |||
| ഗ്രേഡിയന്റ് | സമയം (CV) | ലായക ബി (%) | സമയം (മിനിറ്റ്) | ലായക ബി (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
ഫലങ്ങളും ചർച്ചകളും
സാധാരണ C18 നിരയ്ക്കും C18AQ നിരയ്ക്കും ഇടയിലുള്ള പോളാർ പെപ്റ്റൈഡ് സാമ്പിളിന്റെ ശുദ്ധീകരണ പ്രകടനം താരതമ്യം ചെയ്യാൻ, സാമ്പിളിന്റെ ഫ്ലാഷ് പ്യൂരിഫിക്കേഷനായി ഞങ്ങൾ ഒരു സാധാരണ C18 കോളം ഉപയോഗിച്ചു.ചിത്രം 2-ൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നതുപോലെ, ഉയർന്ന ജലീയ അനുപാതം മൂലമുണ്ടാകുന്ന C18 ശൃംഖലകളുടെ ഹൈഡ്രോഫോബിക് ഘട്ട തകർച്ച കാരണം, സാധാരണ C18 കാട്രിഡ്ജിൽ സാമ്പിൾ കഷ്ടിച്ച് നിലനിർത്തുകയും മൊബൈൽ ഘട്ടം നേരിട്ട് ഒഴിവാക്കുകയും ചെയ്തു.തൽഫലമായി, സാമ്പിൾ ഫലപ്രദമായി വേർതിരിച്ച് ശുദ്ധീകരിക്കപ്പെട്ടില്ല.
ചിത്രം 2. സാധാരണ C18 കാട്രിഡ്ജിലെ സാമ്പിളിന്റെ ഫ്ലാഷ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാം.
അടുത്തതായി, സാമ്പിളിന്റെ ഫ്ലാഷ് ശുദ്ധീകരണത്തിനായി ഞങ്ങൾ ഒരു C18AQ കോളം ഉപയോഗിച്ചു.ചിത്രം 3-ൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നതുപോലെ, പെപ്റ്റൈഡ് കോളത്തിൽ ഫലപ്രദമായി നിലനിർത്തുകയും പിന്നീട് പുറത്തെടുക്കുകയും ചെയ്തു.ടാർഗെറ്റ് ഉൽപ്പന്നം അസംസ്കൃത സാമ്പിളിലെ മാലിന്യങ്ങളിൽ നിന്ന് വേർതിരിച്ച് ശേഖരിച്ചു.ലയോഫിലൈസേഷന് ശേഷം HPLC വിശകലനം ചെയ്ത ശേഷം, ശുദ്ധീകരിച്ച ഉൽപ്പന്നത്തിന് 98.2% പരിശുദ്ധി ഉണ്ട്, അടുത്ത ഘട്ട ഗവേഷണത്തിനും വികസനത്തിനും ഇത് കൂടുതൽ ഉപയോഗപ്പെടുത്താം.
ചിത്രം 3. C18AQ കാട്രിഡ്ജിലെ സാമ്പിളിന്റെ ഫ്ലാഷ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാം.
ഉപസംഹാരമായി, SepaFlash C18AQ RP ഫ്ലാഷ് കാട്രിഡ്ജ് ഫ്ലാഷ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫി സിസ്റ്റവുമായി സംയോജിപ്പിച്ച് SepaBean™ശക്തമായ പോളാർ അല്ലെങ്കിൽ ഹൈഡ്രോഫിലിക് സാമ്പിളുകളുടെ ശുദ്ധീകരണത്തിന് യന്ത്രത്തിന് വേഗതയേറിയതും ഫലപ്രദവുമായ പരിഹാരം നൽകാൻ കഴിയും.
സാന്റായ് ടെക്നോളജിയിൽ നിന്നുള്ള വ്യത്യസ്ത സവിശേഷതകളുള്ള SepaFlash C18AQ RP ഫ്ലാഷ് കാട്രിഡ്ജുകളുടെ ഒരു പരമ്പരയുണ്ട് (പട്ടിക 2 ൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നത് പോലെ).
| ഇനം നമ്പർ | നിരയുടെ വലിപ്പം | ഫ്ലോ റേറ്റ് (mL/min) | പരമാവധി സമ്മർദ്ദം (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5.4 ഗ്രാം | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 ഗ്രാം | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 ഗ്രാം | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 ഗ്രാം | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 ഗ്രാം | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 ഗ്രാം | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 ഗ്രാം | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 ഗ്രാം | 40-80 | 250/17.2 |
പട്ടിക 2. SepaFlash C18AQ RP ഫ്ലാഷ് കാട്രിഡ്ജുകൾ.പാക്കിംഗ് സാമഗ്രികൾ: ഉയർന്ന ദക്ഷതയുള്ള സ്ഫെറിക്കൽ C18(AQ)-ബോണ്ടഡ് സിലിക്ക, 20 - 45 μm, 100 Å.
SepaBean™ മെഷീന്റെ വിശദമായ സ്പെസിഫിക്കേഷനുകൾ അല്ലെങ്കിൽ SepaFlash സീരീസ് ഫ്ലാഷ് കാട്രിഡ്ജുകളെ കുറിച്ചുള്ള ഓർഡർ വിവരങ്ങൾ എന്നിവയെ കുറിച്ചുള്ള കൂടുതൽ വിവരങ്ങൾക്ക്, ദയവായി ഞങ്ങളുടെ വെബ്സൈറ്റ് സന്ദർശിക്കുക.
പോസ്റ്റ് സമയം: ഒക്ടോബർ-12-2018