ഹോങ്‌ചെങ് വാങ്, ബോ സൂ
അപേക്ഷ R&D കേന്ദ്രം
ആമുഖം
സ്റ്റേഷണറി ഫേസ്, മൊബൈൽ ഫേസ് എന്നിവയുടെ ആപേക്ഷിക ധ്രുവങ്ങൾ അനുസരിച്ച്, ലിക്വിഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രഫിയെ നോർമൽ ഫേസ് ക്രോമാറ്റോഗ്രഫി (എൻപിസി), റിവേഴ്സ്ഡ് ഫേസ് ക്രോമാറ്റോഗ്രഫി (ആർപിസി) എന്നിങ്ങനെ വിഭജിക്കാം.RPC-യെ സംബന്ധിച്ചിടത്തോളം, മൊബൈൽ ഘട്ടത്തിന്റെ ധ്രുവീകരണം സ്റ്റേഷണറി ഘട്ടത്തേക്കാൾ ശക്തമാണ്.ഉയർന്ന കാര്യക്ഷമതയും നല്ല റെസല്യൂഷനും വ്യക്തമായ നിലനിർത്തൽ സംവിധാനവും കാരണം RPC ലിക്വിഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫി വേർതിരിക്കൽ മോഡുകളിൽ ഏറ്റവും വ്യാപകമായി ഉപയോഗിക്കുന്ന ഒന്നായി മാറി.അതിനാൽ ആൽക്കലോയിഡുകൾ, കാർബോഹൈഡ്രേറ്റുകൾ, ഫാറ്റി ആസിഡുകൾ, സ്റ്റിറോയിഡുകൾ, ന്യൂക്ലിക് ആസിഡുകൾ, അമിനോ ആസിഡുകൾ, പെപ്റ്റൈഡുകൾ, പ്രോട്ടീനുകൾ മുതലായവ ഉൾപ്പെടെയുള്ള വിവിധ ധ്രുവമോ ധ്രുവേതര സംയുക്തങ്ങളെ വേർതിരിക്കുന്നതിനും ശുദ്ധീകരിക്കുന്നതിനും ആർപിസി അനുയോജ്യമാണ്. ആർപിസിയിൽ ഏറ്റവും സാധാരണയായി ഉപയോഗിക്കുന്ന സ്റ്റേഷണറി ഘട്ടം സി 18, സി 8, സി 4, ഫിനൈൽ, സയാനോ, അമിനോ തുടങ്ങി വിവിധ ഫങ്ഷണൽ ഗ്രൂപ്പുകളുമായി ബന്ധിപ്പിച്ചിരിക്കുന്ന സിലിക്ക ജെൽ മാട്രിക്സ്.ആർപിസിയുടെ 80%-ലധികവും ഇപ്പോൾ C18 ബോണ്ടഡ് ഫേസ് ഉപയോഗിക്കുന്നുണ്ടെന്ന് കണക്കാക്കപ്പെടുന്നു.അതിനാൽ C18 ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫി കോളം എല്ലാ ലബോറട്ടറിയിലും നിർബന്ധമായും ഉണ്ടായിരിക്കേണ്ട ഒരു സാർവത്രിക കോളമായി മാറിയിരിക്കുന്നു.
C18 കോളം വളരെ വിപുലമായ ആപ്ലിക്കേഷനുകളിൽ ഉപയോഗിക്കാമെങ്കിലും, വളരെ ധ്രുവമോ ഹൈഡ്രോഫിലിക്കോ ഉള്ള ചില സാമ്പിളുകൾക്ക്, സാധാരണ C18 നിരകൾ അത്തരം സാമ്പിളുകൾ ശുദ്ധീകരിക്കാൻ ഉപയോഗിക്കുമ്പോൾ പ്രശ്നങ്ങൾ ഉണ്ടാകാം.ആർപിസിയിൽ, സാധാരണയായി ഉപയോഗിക്കുന്ന എല്യൂഷൻ ലായകങ്ങൾ അവയുടെ ധ്രുവീയത അനുസരിച്ച് ഓർഡർ ചെയ്യാവുന്നതാണ്: വെള്ളം < മെഥനോൾ < അസെറ്റോണിട്രൈൽ < എത്തനോൾ < ടെട്രാഹൈഡ്രോഫുറാൻ < ഐസോപ്രോപാനോൾ.ഈ സാമ്പിളുകളുടെ നിരയിൽ നല്ല നിലനിൽപ്പ് ഉറപ്പാക്കാൻ (ശക്തമായ ധ്രുവമോ ഉയർന്ന ഹൈഡ്രോഫിലിക്) ജലീയ സംവിധാനത്തിന്റെ ഉയർന്ന അനുപാതം മൊബൈൽ ഘട്ടമായി ഉപയോഗിക്കേണ്ടത് ആവശ്യമാണ്.എന്നിരുന്നാലും, ശുദ്ധജല സംവിധാനം (ശുദ്ധജലം അല്ലെങ്കിൽ ശുദ്ധമായ ഉപ്പ് ലായനി ഉൾപ്പെടെ) മൊബൈൽ ഘട്ടമായി ഉപയോഗിക്കുമ്പോൾ, C18 നിരയുടെ നിശ്ചല ഘട്ടത്തിലെ നീണ്ട കാർബൺ ശൃംഖല വെള്ളം ഒഴിവാക്കുകയും പരസ്പരം കലരുകയും ചെയ്യുന്നു, ഇത് തൽക്ഷണം കുറയുന്നു. നിരയുടെ നിലനിർത്തൽ ശേഷി അല്ലെങ്കിൽ നിലനിർത്തൽ പോലും ഇല്ല.ഈ പ്രതിഭാസത്തെ "ഹൈഡ്രോഫോബിക് ഫേസ് തകർച്ച" എന്ന് വിളിക്കുന്നു (ചിത്രം 1 ന്റെ ഇടത് ഭാഗത്ത് കാണിച്ചിരിക്കുന്നത് പോലെ).മെഥനോൾ അല്ലെങ്കിൽ അസറ്റോണിട്രൈൽ പോലുള്ള ഓർഗാനിക് ലായകങ്ങൾ ഉപയോഗിച്ച് കോളം കഴുകുമ്പോൾ ഈ സാഹചര്യം പഴയപടിയാക്കാമെങ്കിലും, അത് കോളത്തിന് കേടുപാടുകൾ വരുത്തും.അതിനാൽ, ഈ സാഹചര്യം സംഭവിക്കുന്നത് തടയേണ്ടത് ആവശ്യമാണ്.
ചിത്രം 1. സാധാരണ C18 നിരയിലും (ഇടത്) C18AQ കോളത്തിലും (വലത്) സിലിക്ക ജെല്ലിന്റെ ഉപരിതലത്തിൽ ബോണ്ടഡ് ഘട്ടങ്ങളുടെ സ്കീമാറ്റിക് ഡയഗ്രം.
മുകളിൽ സൂചിപ്പിച്ച പ്രശ്നങ്ങൾ പരിഹരിക്കുന്നതിന്, ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിക് പാക്കിംഗ് മെറ്റീരിയലുകളുടെ നിർമ്മാതാക്കൾ സാങ്കേതിക മെച്ചപ്പെടുത്തലുകൾ നടത്തിയിട്ടുണ്ട്.ഈ മെച്ചപ്പെടുത്തലുകളിൽ ഒന്ന്, സിലിക്ക ജെല്ലിന്റെ ഉപരിതലം കൂടുതൽ ഹൈഡ്രോഫിലിക് ആക്കുന്നതിനായി, ഹൈഡ്രോഫിലിക് സയാനോ ഗ്രൂപ്പുകളുടെ (ചിത്രം 1 ന്റെ വലതുഭാഗത്ത് കാണിച്ചിരിക്കുന്നതുപോലെ) ആമുഖം പോലെയുള്ള സിലിക്ക മാട്രിക്സിന്റെ ഉപരിതലത്തിൽ ചില പരിഷ്കാരങ്ങൾ വരുത്തുന്നു.അങ്ങനെ സിലിക്ക പ്രതലത്തിലെ C18 ശൃംഖലകൾ ഉയർന്ന ജലീയ സാഹചര്യങ്ങളിൽ പൂർണ്ണമായി നീട്ടാനും ഹൈഡ്രോഫോബിക് ഘട്ട തകർച്ച ഒഴിവാക്കാനും കഴിയും.ഈ പരിഷ്‌ക്കരിച്ച C18 നിരകളെ ജലീയ C18 നിരകൾ എന്ന് വിളിക്കുന്നു, അതായത് C18AQ നിരകൾ, അവ ഉയർന്ന ജലീയ എല്യൂഷൻ അവസ്ഥകൾക്കായി രൂപകൽപ്പന ചെയ്‌തിരിക്കുന്നതും 100% ജലീയ സംവിധാനത്തെ സഹിക്കാൻ കഴിയുന്നതുമാണ്.ഓർഗാനിക് അമ്ലങ്ങൾ, പെപ്റ്റൈഡുകൾ, ന്യൂക്ലിയോസൈഡുകൾ, വെള്ളത്തിൽ ലയിക്കുന്ന വിറ്റാമിനുകൾ എന്നിവയുൾപ്പെടെയുള്ള ശക്തമായ ധ്രുവ സംയുക്തങ്ങളുടെ വേർതിരിവിലും ശുദ്ധീകരണത്തിലും C18AQ നിരകൾ വ്യാപകമായി പ്രയോഗിച്ചു.
സാമ്പിളുകൾക്കായുള്ള ഫ്ലാഷ് പ്യൂരിഫിക്കേഷനിലെ C18AQ നിരകളുടെ സാധാരണ ആപ്ലിക്കേഷനുകളിൽ ഒന്നാണ് ഡിസാൽറ്റിംഗ്, ഇത് തുടർന്നുള്ള പഠനങ്ങളിൽ സാമ്പിൾ പ്രയോഗിക്കുന്നത് സുഗമമാക്കുന്നതിന് സാമ്പിൾ ലായകത്തിലെ ഉപ്പ് അല്ലെങ്കിൽ ബഫർ ഘടകങ്ങൾ നീക്കം ചെയ്യുന്നു.ഈ പോസ്റ്റിൽ, ശക്തമായ ധ്രുവതയുള്ള ബ്രില്യന്റ് ബ്ലൂ FCF സാമ്പിളായി ഉപയോഗിക്കുകയും C18AQ കോളത്തിൽ ശുദ്ധീകരിക്കുകയും ചെയ്തു.സാമ്പിൾ ലായകത്തിന് പകരം ബഫർ ലായനിയിൽ നിന്നുള്ള ഓർഗാനിക് ലായകങ്ങൾ നൽകി, അങ്ങനെ ഇനിപ്പറയുന്ന റോട്ടറി ബാഷ്പീകരണം സുഗമമാക്കുകയും ലായകങ്ങളും പ്രവർത്തന സമയവും ലാഭിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു.കൂടാതെ, സാമ്പിളിലെ ചില മാലിന്യങ്ങൾ നീക്കം ചെയ്തുകൊണ്ട് സാമ്പിളിന്റെ പരിശുദ്ധി മെച്ചപ്പെടുത്തി.
പരീക്ഷണ വിഭാഗം
ചിത്രം 2. സാമ്പിളിന്റെ രാസഘടന.
ഈ പോസ്റ്റിലെ സാമ്പിളായി ബ്രില്യന്റ് ബ്ലൂ FCF ഉപയോഗിച്ചു.അസംസ്‌കൃത സാമ്പിളിന്റെ പരിശുദ്ധി 86% ആയിരുന്നു, സാമ്പിളിന്റെ രാസഘടന ചിത്രം 2-ൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നു. സാമ്പിൾ ലായനി തയ്യാറാക്കാൻ, ബ്രില്യന്റ് ബ്ലൂ FCF-ന്റെ 300 മില്ലിഗ്രാം പൗഡറി ക്രൂഡ് സോളിഡ് 1 M NaH2PO4 ബഫർ ലായനിയിൽ ലയിപ്പിച്ച് നന്നായി കുലുക്കി. തികച്ചും വ്യക്തമായ ഒരു പരിഹാരം.സാമ്പിൾ ലായനി ഒരു ഇൻജക്ടർ ഉപയോഗിച്ച് ഫ്ലാഷ് കോളത്തിലേക്ക് കുത്തിവച്ചു.ഫ്ലാഷ് ശുദ്ധീകരണത്തിന്റെ പരീക്ഷണാത്മക സജ്ജീകരണം പട്ടിക 1 ൽ പട്ടികപ്പെടുത്തിയിട്ടുണ്ട്.
| ഉപകരണം | SepaBean™ മെഷീൻ2 | |||
| വെടിയുണ്ടകൾ | 12 ഗ്രാം SepaFlash C18 RP ഫ്ലാഷ് കാട്രിഡ്ജ് (സ്ഫെറിക്കൽ സിലിക്ക, 20 - 45 μm, 100 Å, ഓർഡർ നമ്പർ: SW-5222-012-SP) | 12 ഗ്രാം SepaFlash C18AQ RP ഫ്ലാഷ് കാട്രിഡ്ജ് (സ്ഫെറിക്കൽ സിലിക്ക, 20 - 45 μm, 100 Å, ഓർഡർ നമ്പർ:SW-5222-012-SP(AQ)) | ||
| തരംഗദൈർഘ്യം | 254 എൻഎം | |||
| മൊബൈൽ ഘട്ടം | ലായക A: വെള്ളം ലായക ബി: മെഥനോൾ | |||
| ഒഴുക്ക് നിരക്ക് | 30 മില്ലി/മിനിറ്റ് | |||
| സാമ്പിൾ ലോഡ് ചെയ്യുന്നു | 300 മില്ലിഗ്രാം (86% ശുദ്ധിയുള്ള ബ്രില്യന്റ് ബ്ലൂ FCF) | |||
| ഗ്രേഡിയന്റ് | സമയം (CV) | ലായക ബി (%) | സമയം (CV) | ലായക ബി (%) |
| 0 | 10 | 0 | 0 | |
| 10 | 10 | 10 | 0 | |
| 10.1 | 100 | 10.1 | 100 | |
| 17.5 | 100 | 17.5 | 100 | |
| 17.6 | 10 | 17.6 | 0 | |
| 22.6 | 10 | 22.6 | 0 | |
ഫലങ്ങളും ചർച്ചകളും
ഒരു SepaFlash C18AQ RP ഫ്ലാഷ് കാട്രിഡ്ജ് സാമ്പിൾ ഡിസാൽറ്റിംഗിനും ശുദ്ധീകരണത്തിനും ഉപയോഗിച്ചു.സ്റ്റെപ്പ് ഗ്രേഡിയന്റ് ഉപയോഗിച്ചു, അതിൽ എല്യൂഷന്റെ തുടക്കത്തിൽ മൊബൈൽ ഘട്ടമായി ശുദ്ധജലം ഉപയോഗിക്കുകയും 10 കോളം വോള്യങ്ങൾ (സിവി) പ്രവർത്തിപ്പിക്കുകയും ചെയ്തു.ചിത്രം 3-ൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നതുപോലെ, മൊബൈൽ ഘട്ടമായി ശുദ്ധജലം ഉപയോഗിക്കുമ്പോൾ, സാമ്പിൾ പൂർണ്ണമായും ഫ്ലാഷ് കാട്രിഡ്ജിൽ നിലനിർത്തി.അടുത്തതായി, മൊബൈൽ ഘട്ടത്തിലെ മെഥനോൾ നേരിട്ട് 100% ആയി വർദ്ധിപ്പിക്കുകയും ഗ്രേഡിയന്റ് 7.5 CV ആയി നിലനിർത്തുകയും ചെയ്തു.സാമ്പിൾ 11.5 മുതൽ 13.5 CV വരെ ഒഴിവാക്കി.ശേഖരിച്ച ഭിന്നസംഖ്യകളിൽ, സാമ്പിൾ ലായനി NaH2PO4 ബഫർ ലായനിയിൽ നിന്ന് മെഥനോളിലേക്ക് മാറ്റി.ഉയർന്ന ജലീയ ലായനിയുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ, തുടർന്നുള്ള ഘട്ടത്തിൽ റോട്ടറി ബാഷ്പീകരണം വഴി മെഥനോൾ നീക്കംചെയ്യുന്നത് വളരെ എളുപ്പമായിരുന്നു, ഇത് ഇനിപ്പറയുന്ന ഗവേഷണത്തിന് സഹായിക്കുന്നു.
ചിത്രം 3. C18AQ കാട്രിഡ്ജിലെ സാമ്പിളിന്റെ ഫ്ലാഷ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാം.
ശക്തമായ പോളാരിറ്റിയുടെ സാമ്പിളുകൾക്കായി C18AQ കാട്രിഡ്ജിന്റെയും സാധാരണ C18 കാട്രിഡ്ജിന്റെയും നിലനിർത്തൽ സ്വഭാവം താരതമ്യം ചെയ്യാൻ, സമാന്തര താരതമ്യ പരിശോധന നടത്തി.ഒരു SepaFlash C18 RP ഫ്ലാഷ് കാട്രിഡ്ജ് ഉപയോഗിച്ചു, സാമ്പിളിനുള്ള ഫ്ലാഷ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാം ചിത്രം 4-ൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നു. സാധാരണ C18 കാട്രിഡ്ജുകൾക്ക്, ഏറ്റവും കൂടുതൽ സഹിഷ്ണുതയുള്ള ജലീയ ഘട്ട അനുപാതം ഏകദേശം 90% ആണ്.അതിനാൽ ആരംഭ ഗ്രേഡിയന്റ് 90% വെള്ളത്തിൽ 10% മെഥനോൾ ആയി സജ്ജീകരിച്ചു.ചിത്രം 4-ൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നതുപോലെ, ഉയർന്ന ജലീയ അനുപാതം മൂലമുണ്ടാകുന്ന C18 ശൃംഖലകളുടെ ഹൈഡ്രോഫോബിക് ഘട്ടം തകർച്ച കാരണം, സാധാരണ C18 കാട്രിഡ്ജിൽ സാമ്പിൾ കഷ്ടിച്ച് നിലനിർത്തുകയും മൊബൈൽ ഘട്ടം നേരിട്ട് ഒഴിവാക്കുകയും ചെയ്തു.തൽഫലമായി, സാമ്പിൾ ഡീസൽറ്റിംഗ് അല്ലെങ്കിൽ ശുദ്ധീകരണം പൂർത്തിയാക്കാൻ കഴിയില്ല.
ചിത്രം 4. സാധാരണ C18 കാട്രിഡ്ജിലെ സാമ്പിളിന്റെ ഫ്ലാഷ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാം.
ലീനിയർ ഗ്രേഡിയന്റുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ, സ്റ്റെപ്പ് ഗ്രേഡിയന്റിന്റെ ഉപയോഗത്തിന് ഇനിപ്പറയുന്ന ഗുണങ്ങളുണ്ട്:
1. സാമ്പിൾ ശുദ്ധീകരണത്തിനായുള്ള ലായക ഉപയോഗവും പ്രവർത്തന സമയവും കുറയുന്നു.
2. ടാർഗെറ്റ് ഉൽപ്പന്നം മൂർച്ചയുള്ള കൊടുമുടിയിൽ എത്തുന്നു, ഇത് ശേഖരിക്കുന്ന ഭിന്നസംഖ്യകളുടെ അളവ് കുറയ്ക്കുകയും അങ്ങനെ താഴെ പറയുന്ന റോട്ടറി ബാഷ്പീകരണം സുഗമമാക്കുകയും സമയം ലാഭിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു.
3. ശേഖരിച്ച ഉൽപ്പന്നം മെഥനോൾ ആണ്, അത് ബാഷ്പീകരിക്കപ്പെടാൻ എളുപ്പമാണ്, അതിനാൽ ഉണക്കൽ സമയം കുറയുന്നു.
ഉപസംഹാരമായി, ശക്തമായ പോളാർ അല്ലെങ്കിൽ ഉയർന്ന ഹൈഡ്രോഫിലിക് സാമ്പിളിന്റെ ശുദ്ധീകരണത്തിനായി, SepaBean™ മെഷീൻ പ്രിപ്പറേറ്റീവ് ഫ്ലാഷ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫി സിസ്റ്റവുമായി സംയോജിപ്പിക്കുന്ന SepaFlash C18AQ RP ഫ്ലാഷ് കാട്രിഡ്ജുകൾക്ക് വേഗതയേറിയതും കാര്യക്ഷമവുമായ പരിഹാരം വാഗ്ദാനം ചെയ്യാൻ കഴിയും.
SepaFlash ബോണ്ടഡ് സീരീസ് C18 RP ഫ്ലാഷ് കാട്രിഡ്ജുകളെക്കുറിച്ച്
സാന്റായ് ടെക്നോളജിയിൽ നിന്നുള്ള വ്യത്യസ്ത സവിശേഷതകളുള്ള SepaFlash C18AQ RP ഫ്ലാഷ് കാട്രിഡ്ജുകളുടെ ഒരു പരമ്പരയുണ്ട് (പട്ടിക 2 ൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നത് പോലെ).
| ഇനം നമ്പർ | നിരയുടെ വലിപ്പം | ഫ്ലോ റേറ്റ് (mL/min) | പരമാവധി സമ്മർദ്ദം (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5.4 ഗ്രാം | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 ഗ്രാം | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 ഗ്രാം | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 ഗ്രാം | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 ഗ്രാം | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 ഗ്രാം | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 ഗ്രാം | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 ഗ്രാം | 40-80 | 250/17.2 |
പട്ടിക 2. SepaFlash C18AQ RP ഫ്ലാഷ് കാട്രിഡ്ജുകൾ.
പാക്കിംഗ് സാമഗ്രികൾ: ഉയർന്ന ദക്ഷതയുള്ള സ്ഫെറിക്കൽ C18(AQ)-ബോണ്ടഡ് സിലിക്ക, 20 - 45 μm, 100 Å.
ലോജി (പട്ടിക 2 ൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നത് പോലെ).
പോസ്റ്റ് സമയം: ഓഗസ്റ്റ്-27-2018