Руи Хуанг, Бо Ксу
Центар за апликација R&D
Вовед
Пептид е соединение составено од аминокиселини, од кои секоја има уникатни физички и хемиски својства како резултат на различните типови и редот на остатоци од аминокиселини што ја сочинуваат својата секвенца. Со развојот на хемиска синтеза на цврста фаза, хемиската синтеза на разни активни пептиди постигна голем напредок. Сепак, заради комплицираниот состав на пептидот добиен со синтеза на цврста фаза, крајниот производ треба да се прочисти со сигурни методи за раздвојување. The commonly used purification methods for peptides include ion exchange chromatography (IEC) and reversed-phase high performance liquid chromatography (RP-HPLC), which have the disadvantages of low sample loading capacity, high cost of separation media, complicated and costly separation equipment, etc. For the rapid purification of small molecule peptides (MW < 1 kDa), a successful application case was previously published by Santai Технологии, во кои се користеше кертриџ Sepaflash RP C18 за брзо прочистување на тимопентин (TP-5) и добиени се целниот производ што ги исполнува барањата.
Слика 1. 20 вообичаени аминокиселини (репродуцирани од www.bachem.com).
Постојат 20 видови на аминокиселини кои се вообичаени во составот на пептиди. Овие аминокиселини можат да се поделат во следниве групи според нивната поларитет и киселина-база на својство: не-поларно (хидрофобни), поларни (неисполнети), кисели или основни (како што е прикажано на слика 1). Во секвенца на пептид, ако аминокиселините што ја сочинуваат секвенцата се претежно поларни (како што е означено со розова боја на Слика 1), како што се цистеин, глутамин, аспарагин, серин, треонин, тирозин, итн. Тогаш овој пептид може да има силна поларитет и да биде растворлив во вода. За време на постапката за прочистување за овие силни примероци на поларен пептид со хроматографија со обратна фаза, ќе се појави феномен наречен колапс на хидрофобна фаза (упатете се на претходно објавената белешка за апликација од страна на Santai Technologies: хидрофобна фаза колапс, AQ обратна фаза на хроматографија и колони за хроматографија и нивни апликации). Во споредба со редовните колони C18, подобрените колони C18AQ се најпогодни за прочистување на силни поларни или хидрофилни примероци. Во овој пост, како примерок се користеше силен поларен пептид и прочистен со колона C18AQ. Како резултат, целниот производ ги исполнува барањата и може да се користи во следното истражување и развој.
| Инструмент | Сепабија™машина 2 | |||
| Касети | 12 g Sepaflash C18 RP Flash Certridge (сферична силика, 20-45 μm, 100 Å, нарачајте молунец ： SW-5222-012-SP) | 12 g Sepaflash C18AQ RP Flash Certridge (сферична силика, 20-45 μm, 100 Å, број на нарачка ： SW-5222-012-SP (AQ)) | ||
| Бранова должина | 254 nm, 220 nm | 214 nm | ||
| Мобилна фаза | Растворувач А: Вода Растворувач Б: ацетонитрил | |||
| Стапка на проток | 15 мл/мин | 20 мл/мин | ||
| Вчитување на примерокот | 30 мг | |||
| Градиент | Време (CV) | Растворувач Б (%) | Време (мин) | Растворувач Б (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
Резултати и дискусија
За да ги споредиме перформансите на прочистување за примерокот на поларен пептид помеѓу редовната колона C18 и колоната C18AQ, искористивме редовна колона C18 за прочистување на блицот на примерокот како почеток. Како што е прикажано на Слика 2, како резултат на хидрофобната фаза на пропаѓање на синџирите C18 предизвикани од висок воден сооднос, примерокот едвај се задржа на редовниот кертриџ C18 и беше директно елуиран од мобилната фаза. Како резултат, примерокот не беше ефикасно одделен и прочистен.
Слика 2. Флеш хроматограм на примерокот на редовна кертриџ C18.
Следно, користевме колона C18AQ за прочистување на блицот на примерокот. Како што е прикажано на Слика 3, пептидот беше ефикасно задржан на колоната и потоа беше избришан. Целниот производ беше одвоен од нечистотиите во суровиот примерок и се собра. По лиофилизацијата и потоа анализирана од HPLC, прочистениот производ има чистота од 98,2% и може да се искористи дополнително за истражување и развој на следниот чекор.
Слика 3. Флеш хроматограм на примерокот на кертриџ C18AQ.
Како заклучок, сепафлаш C18AQ RP Flash кертриџ во комбинација со системот за флеш хроматографија Сепабија™Машината може да понуди брзо и ефикасно решение за прочистување на силни поларни или хидрофилни примероци.
Постојат серија на касети за блиц Flash C18AQ RP со различни спецификации од технологијата Santai (како што е прикажано во Табела 2).
| Број на артикал | Големина на колоната | Стапка на проток (ml/min) | Макс.Прс (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP (AQ) | 5,4 g | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP (AQ) | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP (AQ) | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP (AQ) | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP (AQ) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP (AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP (AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP (AQ) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
Табела 2. Сепафлаш C18AQ RP Clash Castridges. Материјали за пакување: високо-ефикасно сферичен C18 (AQ) -БОНДИЛЕН СИЛИЦА, 20-45 μM, 100.
За дополнителни информации за деталните спецификации на машината Sepabean ™ или информациите за нарачки за касети за блиц серија Sepaflash, посетете ја нашата веб -страница.
Време на пост: Октомври-12-2018 година