Rui Huang, Bo Xu
Application R&D Center
Sava lalana
Ny peptide dia fitambarana misy asidra amino, izay samy manana toetra ara-batana sy simika miavaka noho ny karazany sy ny filaharan'ny sisa tavela amin'ny asidra amine mandrafitra ny filaharany.Miaraka amin'ny fivoaran'ny synthesis simika dingana mafy, ny synthesis simika ny peptides mavitrika isan-karazany dia nanao fandrosoana lehibe.Na izany aza, noho ny firafitry ny peptide sarotra azo amin'ny alalan'ny dingana mafy synthesis, ny vokatra farany dia tokony ho voadio amin'ny fomba azo antoka fisarahana.Ny fomba fanadiovana fampiasa matetika ho an'ny peptides dia ny chromatography fifanakalozana ion (IEC) sy ny chromatography ranon-javatra avo lenta (RP-HPLC), izay manana ny fatiantoka amin'ny santionany ambany, ny vidin'ny fampisarahana, ny fitaovana fisarahana sarotra sy lafo, sns. Ho fanadiovana haingana ny peptides molekiola kely (MW <1 kDa), dia nisy tranga fampiharana nahomby navoakan'ny Santai Technologies teo aloha, izay nampiasana cartridge SepaFlash RP C18 ho fanadiovana haingana ny thymopentin (TP-5) sy ny vokatra kendrena mahafeno ny fepetra takiana dia azo.
Sary 1. 20 asidra amino mahazatra (nalaina avy amin'ny www.bachem.com).
Misy karazany 20 ny asidra amine izay mahazatra amin'ny firafitry ny peptides.Ireo asidra amine ireo dia azo zaraina amin'ireto vondrona manaraka ireto, araka ny fahasamihafan'izy ireo sy ny fananana asidra-base: tsy polar (hydrophobic), polar (tsy misy fiampangana), asidra na fototra (araka ny aseho amin'ny sary 1).Ao amin'ny filaharan'ny peptide, raha polar ny ankamaroan'ny asidra amine mandrafitra ny filaharana (araka ny marika amin'ny loko mavokely amin'ny sary 1), toy ny Cysteine, Glutamine, Asparagine, Serine, Threonine, Tyrosine, sns. polarity ary tena mety levona anaty rano.Mandritra ny fomba fanadiovana ireo santionany peptide polar matanjaka ireo amin'ny alàlan'ny chromatography mivadika, dia hisy tranga iray antsoina hoe firodanan'ny hydrophobic (jereo ny naoty fampiharana efa navoakan'ny Santai Technologies: Hydrophobic Phase Collapse, AQ Reversed Phase Chromatography Columns sy ny fampiharana azy ireo).Raha ampitahaina amin'ny tsanganana C18 mahazatra, ny tsanganana C18AQ nohatsaraina dia mety indrindra amin'ny fanadiovana ireo santionany polar na hydrophilic matanjaka.Amin'ity lahatsoratra ity, ny peptide polar matanjaka dia nampiasaina ho santionany ary nodiovin'ny tsanganana C18AQ.Vokatr'izany, ny vokatra kendrena mahafeno ny fepetra takiana dia azo ary azo ampiasaina amin'ny fikarohana sy fampandrosoana manaraka.
| fitaovana | SepaBean™milina 2 | |||
| Cartridges | 12 g SepaFlash C18 RP tselatra cartridge (silika boribory, 20 - 45 μm, 100 Å, Order nunber:SW-5222-012-SP) | 12 g SepaFlash C18AQ RP tselatra cartridge (silika boribory, 20 - 45 μm, 100 Å, laharana baiko:SW-5222-012-SP(AQ)) | ||
| halavan'ny onjam | 254 nm, 220 nm | 214 nm | ||
| Dingana finday | Solvent A: Rano Solvent B: Acetonitrile | |||
| tahan'ny fikoriana | 15 mL/min | 20 mL/min | ||
| Sample loading | 30 mg | |||
| gradient | Ora (CV) | Solvent B (%) | Ora (min) | Solvent B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
Valiny sy dinika
Mba hampitahana ny fahombiazan'ny fanadiovana ho an'ny santionany peptide polar eo anelanelan'ny tsanganana C18 mahazatra sy ny tsanganana C18AQ, dia nampiasa tsanganana C18 mahazatra izahay ho an'ny fanadiovana tselatra ny santionany ho fanombohana.Araka ny aseho ao amin'ny sary 2, noho ny firodanan'ny hydrophobic ny rojo C18 vokatry ny tahan'ny rano avo, ny santionany dia zara raha voatazona ao amin'ny cartridge C18 mahazatra ary nesorina mivantana tamin'ny alàlan'ny dingana finday.Vokatr'izany, ny santionany dia tsy voasaraka tsara sy voadio.
Sary 2. Ny chromatogram flash amin'ny santionany amin'ny cartridge C18 mahazatra.
Avy eo, nampiasa tsanganana C18AQ izahay ho an'ny fanadiovana tselatra ny santionany.Araka ny asehon'ny sary 3, ny peptide dia voatazona tsara amin'ny tsanganana ary avy eo dia nesorina.Ny vokatra kendrena dia nosarahina tamin'ny loto tao amin'ny santionany manta ary nangonina.Taorian'ny lyophilization ary avy eo nodinihina tamin'ny HPLC, ny vokatra voadio dia manana fahadiovana 98,2% ary azo ampiasaina bebe kokoa amin'ny fikarohana sy ny fampandrosoana dingana manaraka.
Figure 3. Ny chromatogram flash amin'ny santionany amin'ny carte C18AQ.
Ho fehin-kevitra, SepaFlash C18AQ RP flash cartridge miaraka amin'ny rafitra chromatography flash SepaBean™Ny milina dia afaka manolotra vahaolana haingana sy mahomby amin'ny fanadiovana santionany polar na hydrophilic matanjaka.
Misy andian-tsarimihetsika tselatra SepaFlash C18AQ RP miaraka amin'ny mari-pamantarana samihafa avy amin'ny Santai Technology (araka ny aseho amin'ny tabilao 2).
| Laharan'ny entana | Haben'ny tsanganana | Taham-pidirana (mL/min) | Max.Pressure (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5,4 g | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
Tabilao 2. SepaFlash C18AQ RP flash cartridges.Fitaovana famonosana: silika mifatotra C18(AQ) avo lenta, 20 - 45 μm, 100 Å.
Raha mila fanazavana fanampiny momba ny antsipiriany momba ny milina SepaBean ™, na ny fampahalalana famandrihana amin'ny cartridges flash andiany SepaFlash, tsidiho azafady ny tranokalanay.
Fotoana fandefasana: Oct-12-2018