Hongcheng Wang, Bo Xu
Fampiharana R & D Center
Sava lalana
Araka ny maha-amim-pahalalahana ny havana sy ny fombafomba momba ny fizarana sy ny finday, ny kromatography ranon-tsolika dia azo zaraina amin'ny chromatogroforon'ny phase mahazatra (NPC) ary namerina ny Chromatography Dingana (RPC). Ho an'ny RPC, ny polariton'ny dingana finday dia mahery kokoa noho ny amin'ny dingana tsy misy farany. Ny RPC dia nanjary tena nampiasaina indrindra tamin'ny fomba fanondrahana chromatography saro-pady noho ny fahombiazan'ny fahaizany ambony, ny fanapahan-kevitra tsara sy ny mekanika mazava tsara. Noho izany ny RPC dia mety amin'ny fisarahana sy ny fanadiovana ny santionany isan-karazany na ny tsy fahampian'ny alkalo, ny setroka, ny stero-ny Amino, sns. Tombanana fa mihoatra ny 80% ny RPC izao no mampiasa ny dingana fatorana C18. Noho izany ny tsanganana Chromatogy C18 dia lasa tsanganana iraisan'ny manerantany ho an'ny laboratoara rehetra.
Na dia azo ampiasaina amin'ny fangatahana be dia be aza ny Coloumn C18, na izany aza, ho an'ny santionany sasany izay tena hydrophilika, ny tsanganana C18 tsy tapaka, dia mety manana olana rehefa zatra manadio santionany. Ao amin'ny RPC, ny solom-bolo mahazatra mahazatra dia azo raisina araka ny fanaovan-tsofina: rano <methetol <Acetonitrile <ethanol <tetrahydrofuran <isoorpanol. Mba hiantohana ny fitazonana tsara amin'ny tsanganana ho an'ireo santionany ireo (polarim-bary na hydrophilic matanjaka), ny habetsaky ny rafitra iray dia ilaina ampiasaina amin'ny dingana finday. Na izany aza, rehefa mampiasa rafi-pitondrana madio (ao anatin'izany ny rano madio na ny vahaolana masira madio, ny rojo vy, ny rojo vy lava amin'ny tsanganana C18 dia miovaova ny fitazonana ny tsanganana na ny fitazonana azy. Ity trangan-javatra ity dia antsoina hoe "fianjerana hydrophobic" (araka ny aseho ao amin'ny faritra ankavia 1). Na dia avadika aza izany toe-javatra izany rehefa voasasa ny tsanganana miaraka amin'ny solika voajanahary toy ny metanol na acetonitrile, dia mbola mety hiteraka fahasimbana amin'ny tsanganana ihany. Noho izany, ilaina ny misoroka izany toe-javatra izany.
Sary 1. Ny sary schematic of the schematic phasing offended teo amin'ny velaran'ny silica gel tamin'ny tsanganana C18 Column (ankavia) ary Cambea Column (ankavanana).
Mba hamahana ireo olana voalaza etsy ambony ireo, ny mpanamboatra chromatografika dia nanatsara ny fanatsarana ara-teknika. Ny iray amin'ireo fanatsarana ireo dia manao fanovana vitsivitsy eo amin'ny faran'ny Silica Matrix, toy ny fampidirana ireo vondrona Cyano Hydrophilic (araka ny aseho amin'ny ampahany tsara amin'ny tarehimarika 1), mba hahatonga ny hydrophilic silica kokoa. Araka izany, ny rojo C18 amin'ny tany Silika dia mety ho feno tanteraka ao anatin'ny toe-javatra tena be dia be ary ny fianjeran'ny hydrophobic dia azo sorohina. Ireo tsanganana C18 novaina ireo dia antsoina hoe tsanganana C18 C18, tsanganana C18AQ, izay natao ho an'ny toe-piainana tsy azo antoka ary afaka mandefitra ny rafitra 100% 100%. Ny tsanganana C18aq dia nampiharina be dia be tamin'ny fisarahana sy ny fanadiovana ny fitrandrahana tsodrano matanjaka, anisan'izany ny asidra organika, peptides, nucleingides ary otrikaina vita amin'ny rano sy vitamina.
Ny fanondroana dia iray amin'ireo fampiharana mahazatra amin'ny tsanganana C18aq ao amin'ny Flash Fanadiovana ho an'ny santionany, izay manaisotra ny santira na buffer singa ao amin'ny santionany santionany amin'ny fandalinana ireo santionany amin'ny fandalinana santionany. Amin'ity lahatsoratra ity, ny FCF manga mamirapiratra misy ny fanaovan-tsofina mahery dia nampiasaina ho santionany ary nodiovina tamin'ny tsanganana C18aq. Ny solontenan'ny solitany dia nosoloina solika organika avy amin'ny vahaolana buffer, ka hanamora ny fivoarana manaraka ity ary koa ny fametahana solvent sy ny fandidiana fotoana. Ankoatr'izay, ny fahadiovan'ny santionany dia nohatsaraina tamin'ny fanesorana ny loto sasany tao amin'ilay santionany.
Fizarana fanandramana
Sary 2. Ny rafitry ny simika amin'ny santionany.
Ny FCF manga mamirapiratra dia nampiasaina ho santionany amin'ity lahatsoratra ity. Ny fahadiovan'ny santionany dia ny 86% ary ny firafitry ny simika naseho tamin'ny sary 2. Mba hanomanana ny vahaolana santionany, 300 mg powdery dia voaroaka ao anaty vahaolana 1 m Nah2po4 buffer Ny vahaolana santionany dia tsindrona tao anaty tsanganana tselatra avy amin'ny tsindrona iray. Ny fanandramana fanandramana amin'ny fanadiovana tselatra dia voatanisa ao amin'ny latabatra 1.
| fitaovana | Masinina Sepabean ™2 | |||
| Cartridges | 12 G sepaflash c18 rp tselatra baoritra (silika silika, 20 - 45 μm, 100 å, laharan'ny baiko: SW-5222-012-sp) | 12 G sepaflash c18aq rp cartidridge (Silica Silica, 20 - 45 μm, 100 å, laharam-pandidy: SW-5222-012-SP (AQ)) | ||
| halavan'ny onjam | 254 NM | |||
| Mobile Phase | Solvent A: rano Solvent B: Methanol | |||
| Mikoriana | 30 ml / min | |||
| Santionany loading | 300 mg (Blue Blue FCF miaraka amin'ny fahadiovan'ny 86%) | |||
| Gradient | Fotoana (CV) | Solvent b (%) | Fotoana (CV) | Solvent b (%) |
| 0 | 10 | 0 | 0 | |
| 10 | 10 | 10 | 0 | |
| 10.1 | 100 | 10.1 | 100 | |
| 17.5 | 100 | 17.5 | 100 | |
| 17.6 | 10 | 17.6 | 0 | |
| 22.6 | 10 | 22.6 | 0 | |
Valiny sy dinika
A Sepaflash C18AQ RP RP Flash Cartridge dia nampiasaina tamin'ny santionany sy ny fanadiovana. Ny Gradient dia nampiasaina tamin'ny alàlan'ny rano madio izay nampiasaina ho ny fotoana finday tamin'ny fanombohana ny tsy fahampian-tsofina ary hihazakazaka amin'ny volon-tsolika 10 (CV). Araka ny asehon'ny sary 3, rehefa mampiasa rano madio ho toy ny dingana finday, ny santionany dia notazonina tanteraka tamin'ny baoritra tselatra. Manaraka, nitombo mivantana hatramin'ny 100% ny methase ao amin'ny pejin'ny finday ary notazonina ho an'ny 7,5 CV ny gradient. Ny santionany dia nipoitra hatramin'ny 11,5 ka hatramin'ny 13.5 CV. Tao amin'ny fiakarana nangonina, ny vahaolana santionany dia nosoloana ny vahaolana Nah2Po4 Buffer ho an'ny methanol. Ny fampitahàna vahaolana be dia be, ny Methanol dia mora esorina kokoa amin'ny alàlan'ny fihodinan'ny rotary amin'ny dingana manaraka, izay manamora ny fikarohana manaraka.
Sary 3. Ny chromatogram tselatra ao amin'ny santionany amin'ny Cartridge C18AQ.
Mba hampitaha ny fihazonana ny fihazonana ny Cambre Cartridge sy Card Cartridge mahazatra C18AQ ho an'ny santionany amin'ny polarité mahery, ny fitsapana fampitahana dia natao. A Searaflash C18 RP Flash Cartridge dia nampiasaina ary ny tselatra tselatra ho an'ny santionany dia naseho tamin'ny sary 4. Ho an'ny Cartridges C18 tsy tapaka, dia manodidina ny 90% ny tahan'ny dingana avo lenta. Noho izany dia napetraka tao amin'ny 10% methanol tamin'ny 90% ny Gradient. Araka ny asehon'ny sary 4, noho ny fianjeran'ny hydrophobic dia nirodana ny ratera C18 nateraky ny haingam-pandeha avo lenta, ny santionany dia zara raha nitazona ny cartridge C18 tsy tapaka ary navoaka mivantana tamin'ny alàlan'ny Mobile Carty. Vokatr'izany dia tsy azo tanterahina ny fandidiana santionany na ny fanadiovana.
Sary 4. Ny tselatra tselatra ny santionany amin'ny baoritra C18 tsy tapaka.
Ny fampitahana amin'ny gradient linear, ny fampiasana gradient dia manana tombony manaraka ireto:
1. Ny fampiasana solvent sy ny fotoana handehanana fotoana fanadiovana santionany dia mihena.
2. Ny vokatra kendrena kendrena ao anaty tampon-kavoana maranitra, izay mampihena ny haavon'ny fiakarana voangona ary hanamora ny fivoarana mihodina manaraka ary koa ny fotoana famonjena.
3. Ny vokatra voangona dia ao Methanol izay mora hipoaka, ka mihena ny fotoana fanamainana.
Ho famaranana, ho fanadiovana ny santionany izay misy na ny hydrophilic mahery, sepaflash c18aq rp rp
Momba ny Sepaflash Spoled Series C18 RP Flash Cartridges
Misy andian-dahatsoratra momba ny sepaflash c18aq rp Flash Cartridges miaraka amin'ny voafaritra samihafa avy amin'ny teknolojia Santai (araka ny aseho ao amin'ny latabatra 2).
| Laharana entana | Habe tsanganana | Mikoriana (ML / Min) | Max.pressure (PSI / bar) |
| SW-5222-004-SP (AQ) | 5.4 g | 5-15 | 400/2 / 27.5 |
| SW-5222-012-SP (AQ) | 20 g | 10-25 | 400/2 / 27.5 |
| SW-5222-025-SP (AQ) | 33 g | 10-25 | 400/2 / 27.5 |
| SW-5222-040-SP (AQ) | 48 g | 15-30 | 400/2 / 27.5 |
| SW-5222-080-SP (AQ) | 105 g | 25-50 | 350 / 24.0 |
| SW-5222-120-SP (AQ) | 155 g | 30-60 | 300/4.7 |
| SW-5222-220-SP (AQ) | 300 g | 40-80 | 300/4.7 |
| SW-5222-330-SP (AQ) | 420 g | 40-80 | 250/12 |
Latabatra 2. Sepaflash c18aq rp cartridges.
Fitaovana fonosana: Ny fahombiazan'ny SPEMFICE C18 (AQ) -Bended Silica, 20 - 45 μm, 100 å.
logy (aseho amin'ny latabatra 2).
Fotoam-potoana: Aog-27-2018