Mingzu Yang, Bo Xu
Pieteikuma pētniecības un attīstības centrs
Ievads
Antibiotikas ir sekundāro metabolītu klase, ko ražo mikroorganismi (ieskaitot baktērijas, sēnītes, aktinomicetes) vai līdzīgus savienojumus, kas ir ķīmiski sintezēti vai daļēji sintezēti. Antibiotikas varētu kavēt citu mikroorganismu augšanu un izdzīvošanu. Pirmo antibiotiku, ko cilvēku atklāja penicilīns, 1928. gadā atklāja Lielbritānijas mikrobiologs Aleksandrs Flemings. Viņš novēroja, ka baktērijas veidnes tuvumā nevar augt Staphylococcus kultūras traukā, kas bija piesārņots ar pelējumu. Viņš postulēja, ka veidnei ir jāatdod antibakteriāla viela, kuru viņš nosauca par penicilīnu 1928. gadā. Tomēr aktīvās sastāvdaļas tajā laikā netika attīrītas. 1939. gadā Ernsts ķēde un Hovards Florijs no Oksfordas universitātes nolēma izstrādāt zāles, kas varētu ārstēt baktēriju infekcijas. Pēc sazināšanās ar Flemingu, lai iegūtu celmus, viņi no celmiem veiksmīgi ieguva un attīrīja penicilīnu. Par veiksmīgu penicilīna attīstību kā terapeitisko narkotiku, Fleminga, ķēde un Florijs dalījās ar 1945. gada Nobela prēmiju medicīnā.
Antibiotikas izmanto kā antibakteriālus līdzekļus baktēriju infekciju ārstēšanai vai novēršanai. Ir vairākas galvenās antibiotiku kategorijas, ko izmanto kā antibakteriālus līdzekļus: β-laktāma antibiotikas (ieskaitot penicilīnu, cefalosporīnu utt.), Aminoglikozīdu antibiotikas, makrolīdu antibiotikas, tetraciklīna antibiotikas, hlorhenikoņu antibiotiku antibiotiku avoti (kopējais sintētiskais antibiotikas) un utt Daļēji sintēze un pilnīga sintēze. Antibiotikas, ko ražo bioloģiskā fermentācija, ir strukturāli jāmaina ar ķīmiskām metodēm ķīmiskās stabilitātes, toksiskas blakusparādību, antibakteriālo spektra un citu jautājumu dēļ. Pēc ķīmiski modificēta antibiotikas varētu sasniegt paaugstinātu stabilitāti, samazināt toksiskas blakusparādības, paplašinātu antibakteriālo spektru, samazinātu zāļu izturību, uzlabotu biopieejamību un tādējādi uzlabotu zāļu ārstēšanas efektu. Tāpēc daļēji sintētiskās antibiotikas šobrīd ir vispopulārākais virziens antibiotiku izstrādē.
Daļēji sintētisko antibiotiku attīstībā antibiotikām ir zemas tīrības īpašības, daudz blakusproduktu un sarežģītu komponentu, jo tie ir iegūti no mikrobu fermentācijas produktiem. Šajā gadījumā īpaši svarīga ir daļēji sintētisko antibiotiku piemaisījumu analīze un kontrole. Lai efektīvi identificētu un raksturotu piemaisījumus, no daļēji sintētisko antibiotiku sintētiskā produkta ir nepieciešams iegūt pietiekamu daudzumu piemaisījumu. Starp parasti izmantotajām piemaisījumu sagatavošanas metodēm zibspuldzes hromatogrāfija ir rentabla metode ar tādām priekšrocībām kā liela parauga iekraušanas summa, zemas izmaksas, laika taupīšana utt. Zibspuldzes hromatogrāfija arvien vairāk izmantoja sintētiskos pētniekus.
Šajā amatā daļēji sintētiskā aminoglikozīda antibiotikas galvenais piemaisījums tika izmantots kā paraugs un attīrīts ar sepaflah C18Aq kārtridžu, kas apvienots ar zibspuldzes hromatogrāfijas sistēmas Sepabean ™ mašīnu. Mērķa produkts, kas atbilst prasībām, tika veiksmīgi iegūts, kas liecina par ļoti efektīvu risinājumu šo savienojumu attīrīšanai.
Eksperimentālā sadaļa
Paraugu laipni nodrošināja vietējais farmācijas uzņēmums. Paraugs bija sava veida aminospoliklisko ogļhidrātu, un tā molekulārā struktūra bija līdzīga ar aminoglikozīdu antibiotikām. Parauga polaritāte bija diezgan augsta, padarot to ļoti šķīstošu ūdenī. Parauga molekulārās struktūras shematiskā diagramma bija parādīta 1. attēlā. Neapstrādāta parauga tīrība bija aptuveni 88%, kā to analizēja HPLC. Šo augstās polaritātes savienojumu attīrīšanai paraugs tik tikko tiks saglabāts parastajās C18 kolonnās saskaņā ar mūsu iepriekšējo pieredzi. Tāpēc parauga attīrīšanai tika izmantota C18AQ kolonna.
1. attēls. Parauga molekulārās struktūras shematiskā diagramma.
Lai sagatavotu parauga šķīdumu, 50 mg jēlnaftas paraugs tika izšķīdināts 5 ml tīrā ūdenī un pēc tam ultraskaņu, lai tas kļūtu par pilnīgi dzidru šķīdumu. Pēc tam parauga šķīdumu inžektors ievadīja zibspuldzē. Zibspuldzes attīrīšanas eksperimentālā iestatīšana tika uzskaitīta 1. tabulā.
| Instruments | Sepabean ™ mašīna 2 | |
| Patronas | 12 g Sepafash C18AQ RP Flash kārtridža (sfēriska silīcija dioksīds, 20-45μm, 100 Å, pasūtījuma numurs ： SW-5222-012-Sp (aq)) | |
| Viļņa garums | 204 nm, 220 nm | |
| Mobilā fāze | Šķīdinātājs A: Ūdens B šķīdinātājs: acetonitrils | |
| Plūsmas ātrums | 15 ml/min | |
| Parauga slodze | 50 mg | |
| Gradients | Laiks (min) | B šķīdinātājs (%) |
| 0 | 0 | |
| 19.0 | 8 | |
| 47,0 | 80 | |
| 52.0 | 80 | |
Rezultāti un diskusija
Parauga zibspuldzes hromatogramma C18AQ kārtridžā tika parādīta 2. attēlā. Kā parādīts 2. attēlā, ļoti polārais paraugs tika efektīvi saglabāts uz C18AQ kārtridža. Pēc savākto frakciju liofolizācijas mērķa produkta tīrība bija 96,2% (kā parādīts 3. attēlā) ar HPLC analīzi. Rezultāti norādīja, ka attīrīto produktu var vēl vairāk izmantot nākamajā soļa izpētē un attīstībā.
2. attēls. Parauga zibspuldzes hromatogramma uz C18AQ kārtridža.
3. attēls. Mērķa produkta HPLC hromatogramma.
Noslēgumā jāsaka, ka SepaFlah C18AQ RP Flash kārtridža apvienojumā ar Flash hromatogrāfijas sistēmas Sepabean ™ mašīnu varētu piedāvāt ātru un efektīvu risinājumu ļoti polāro paraugu attīrīšanai.
Par sepafash C18AQ RP Flash kārtridžiem
Ir virkne Sepaflah C18AQ RP Flash kārtridžu ar atšķirīgām specifikācijām no Santai tehnoloģijas (kā parādīts 2. tabulā).
| Vienuma numurs | Kolonnas izmērs | Plūsmas ātrums (ml/min) | Max.pressure (PSI/josla) |
| SW-5222-004-Sp (AQ) | 5,4 g | 5-15 | 400/27,5 |
| SW-5222-012-SP (AQ) | 20 g | 10-25 | 400/27,5 |
| SW-5222-025-Sp (AQ) | 33 g | 10-25 | 400/27,5 |
| SW-5222-040-Sp (AQ) | 48 g | 15-30 | 400/27,5 |
| SW-5222-080-Sp (AQ) | 105 g | 25-50 | 350/24,0 |
| SW-5222-120-Sp (AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20,7 |
| SW-5222-220-Sp (AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20,7 |
| SW-5222-330-Sp (AQ) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
2. tabula. SEPAFLASH C18AQ RP Flash kārtridži. Iepakojuma materiāli: augstas efektivitātes sfēriska C18 (AQ) silīcija dioksīds, 20-45 μm, 100 Å.
Lai iegūtu papildinformāciju par Sepabean ™ mašīnas detalizētām specifikācijām vai pasūtīšanas informāciju par Sepaflash sērijas Flash kārtridžiem, lūdzu, apmeklējiet mūsu vietni.
Pasta laiks: 2018. gada 26. oktobris