Rui Huangs, Bo Sju
Lietojumprogrammu pētniecības un attīstības centrs
Ievads
Jonu apmaiņas hromatogrāfija (IEC) ir hromatogrāfijas metode, ko parasti izmanto, lai atdalītu un attīrītu savienojumus, kas šķīdumā atrodas jonu formā.Saskaņā ar dažādiem maināmo jonu uzlādes stāvokļiem IEC var iedalīt divos veidos: katjonu apmaiņas hromatogrāfijā un anjonu apmaiņas hromatogrāfijā.Katjonu apmaiņas hromatogrāfijā skābes grupas tiek piesaistītas atdalīšanas vides virsmai.Piemēram, sulfonskābe (-SO3H) ir plaši izmantota grupa spēcīgajā katjonu apmaiņā (SCX), kas disociē H+, un negatīvi lādētā grupa -SO3- tādējādi var adsorbēt citus katjonus šķīdumā.Anjonu apmaiņas hromatogrāfijā sārmainās grupas tiek piesaistītas atdalīšanas vides virsmai.Piemēram, kvartārais amīns (-NR3OH, kur R ir ogļūdeņraža grupa) parasti tiek izmantots spēcīgajā anjonu apmaiņā (SAX), kas disociē OH- un pozitīvi lādētā grupa -N+R3 var adsorbēt citus anjonus šķīdumā, kā rezultātā veidojas anjons. apmaiņas efekts.
No dabīgiem produktiem flavonoīdi ir piesaistījuši pētnieku uzmanību, jo tiem ir nozīme sirds un asinsvadu slimību profilaksē un ārstēšanā.Tā kā flavonoīdu molekulas ir skābas fenola hidroksilgrupu klātbūtnes dēļ, jonu apmaiņas hromatogrāfija ir alternatīva iespēja papildus parastajai normālās fāzes vai apgrieztās fāzes hromatogrāfijai šo skābo savienojumu atdalīšanai un attīrīšanai.Flash hromatogrāfijā jonu apmaiņai parasti izmantotais atdalīšanas līdzeklis ir silikagela matrica, kur jonu apmaiņas grupas ir saistītas ar tās virsmu.Flash hromatogrāfijā visbiežāk izmantotie jonu apmaiņas režīmi ir SCX (parasti sulfonskābes grupa) un SAX (parasti kvartārā amīnu grupa).Santai Technologies iepriekš publicētajā pieteikuma piezīmē ar nosaukumu “SepaFlash spēcīgu katjonu apmaiņas hromatogrāfijas kolonnu pielietojums sārmu savienojumu attīrīšanā” sārmainu savienojumu attīrīšanai tika izmantotas SCX kolonnas.Šajā ziņojumā kā paraugs tika izmantots neitrālu un skābu standartu maisījums, lai izpētītu SAX kolonnu pielietojumu skābo savienojumu attīrīšanā.
Eksperimentālā sadaļa
1. attēls. Stacionārās fāzes shematiskā diagramma, kas savienota ar SAX separācijas vides virsmu.
Šajā ziņojumā tika izmantota SAX kolonna, kas iepriekš pildīta ar kvartāra amīnu savienotu silīcija dioksīdu (kā parādīts 1. attēlā).Kā attīrāmais paraugs tika izmantots hroma un 2,4-dihidroksibenzoskābes maisījums (kā parādīts 2. attēlā).Maisījums tika izšķīdināts metanolā un ar inžektoru ievietots zibspuldzes kārtridžā.Zibspuldzes attīrīšanas eksperimentālā iestatīšana ir norādīta 1. tabulā.
2. attēls. Abu komponentu ķīmiskā struktūra parauga maisījumā.
| Instruments | SepaBean™ iekārta T | |||||
| Kasetnes | 4 g SepaFlash standarta sērijas zibspuldzes kasetne (neregulāra silīcija dioksīds, 40–63 μm, 60 Å, pasūtījuma numurs: S-5101-0004) | 4 g SepaFlash Bonded Series SAX zibspuldzes kasetne (neregulāra silīcija dioksīds, 40–63 μm, 60 Å, pasūtījuma numurs: SW-5001-004-IR) | ||||
| Viļņa garums | 254 nm (atklāšana), 280 nm (uzraudzība) | |||||
| Mobilā fāze | Šķīdinātājs A: N-heksāns | |||||
| Šķīdinātājs B: etilacetāts | ||||||
| Plūsmas ātrums | 30 ml/min | 20 ml/min | ||||
| Parauga ielāde | 20 mg (komponenta A un komponenta B maisījums) | |||||
| Gradients | Laiks (CV) | Šķīdinātājs B (%) | Laiks (CV) | Šķīdinātājs B (%) | ||
| 0 | 0 | 0 | 0 | |||
| 1.7 | 12 | 14 | 100 | |||
| 3.7 | 12 | / | / | |||
| 16 | 100 | / | / | |||
| 18 | 100 | / | / | |||
Rezultāti un diskusija
Pirmkārt, parauga maisījums tika atdalīts ar parastās fāzes zibspuldzes kārtridžu, kas iepriekš bija iepakots ar parasto silīcija dioksīdu.Kā parādīts 3. attēlā, abas parauga sastāvdaļas viena pēc otras tika eluētas no kārtridža.Pēc tam parauga attīrīšanai tika izmantota SAX zibspuldzes kasetne.Kā parādīts 4. attēlā, skābais komponents B tika pilnībā saglabāts SAX kasetnē.Neitrālais komponents A tika pakāpeniski eluēts no kārtridža, eluējot kustīgo fāzi.
3. attēls. Parauga zibspuldzes hromatogramma uz parastās normālās fāzes kasetnes.
4. attēls. Parauga zibspuldzes hromatogramma uz SAX kasetnes.
Salīdzinot 3. un 4. attēlu, komponentam A ir nekonsekventa pīķa forma abās dažādās zibspuldzes kasetnēs.Lai pārliecinātos, vai eluēšanas maksimums atbilst komponentam, mēs varam izmantot pilna viļņa garuma skenēšanas funkciju, kas ir iebūvēta SepaBean™ iekārtas vadības programmatūrā.Atveriet abu atdalīšanas eksperimentālos datus, velciet uz indikatora līniju uz laika ass (CV) hromatogrammā līdz augstākajam punktam un otrajam augstākajam eluācijas maksimuma punktam, kas atbilst komponentam A, un visu šo divu viļņu garuma spektru. punkti tiks automātiski parādīti zem hromatogrammas (kā parādīts 5. un 6. attēlā).Salīdzinot šo divu atdalījumu pilna viļņa garuma spektra datus, komponentam A ir konsekvents absorbcijas spektrs divos eksperimentos.Tā kā komponentam A ir nekonsekventa pīķa forma uz divām dažādām zibspuldzes kasetnēm, tiek uzskatīts, ka komponentā A ir specifiski piemaisījumi, kuriem ir atšķirīga aizture normālās fāzes kasetnē un SAX kasetnē.Tāpēc eluēšanas secība komponentam A un piemaisījumiem uz šīm divām zibspuldzēm ir atšķirīga, kā rezultātā hromatogrammās ir nekonsekventa pīķa forma.
5. attēls. Sastāvdaļas A pilna viļņa garuma spektrs un piemaisījums, kas atdalīts ar normālās fāzes kasetni.
6. attēls. Ar SAX kārtridžu atdalītais komponenta A un piemaisījumu pilns viļņa garuma spektrs.
Ja ievācamais mērķa produkts ir neitrāls komponents A, attīrīšanas uzdevumu var viegli pabeigt, tieši izmantojot SAX kasetni eluēšanai pēc parauga ievietošanas.No otras puses, ja ievācamais mērķa produkts ir skābais komponents B, uztveršanas un atbrīvošanas veidu var izmantot tikai ar nelielu pielāgošanu eksperimentālajos posmos: kad paraugs tika ievietots SAX kasetnē un neitrālajā komponentā A. tika pilnībā eluēts ar normālās fāzes organiskajiem šķīdinātājiem, pārvietojiet kustīgo fāzi uz metanola šķīdumu, kas satur 5% etiķskābi.Acetāta joni mobilajā fāzē konkurēs ar komponentu B par saistīšanos ar kvartārajām amīna jonu grupām SAX kārtridža stacionārajā fāzē, tādējādi eluējot komponentu B no kārtridža, lai iegūtu mērķa produktu.Jonu apmaiņas režīmā atdalītā parauga hromatogramma parādīta 7. attēlā.
7. attēls. Komponenta B zibspuldzes hromatogramma, kas eluēta jonu apmaiņas režīmā SAX kasetnē.
Visbeidzot, skābu vai neitrālu paraugu var ātri attīrīt ar SAX kārtridžu kombinācijā ar normālās fāzes kārtridžu, izmantojot dažādas attīrīšanas stratēģijas.Turklāt, izmantojot SepaBean™ iekārtas vadības programmatūrā iebūvēto pilna viļņa garuma skenēšanas funkciju, eluēto frakciju raksturīgo absorbcijas spektru var viegli salīdzināt un apstiprināt, palīdzot pētniekiem ātri noteikt eluēto frakciju sastāvu un tīrību un tādējādi uzlabot. darba efektivitāte.
| Lietas numurs | Kolonnas izmērs | Plūsmas ātrums (ml/min) | Maksimālais spiediens (psi/bar) |
| SW-5001-004-IR | 5,9 g | 10-20 | 400/27,5 |
| SW-5001-012-IR | 23 g | 15-30 | 400/27,5 |
| SW-5001-025-IR | 38 g | 15-30 | 400/27,5 |
| SW-5001-040-IR | 55 g | 20-40 | 400/27,5 |
| SW-5001-080-IR | 122 g | 30-60 | 350/24,0 |
| SW-5001-120-IR | 180 g | 40-80 | 300/20,7 |
| SW-5001-220-IR | 340 g | 50-100 | 300/20,7 |
| SW-5001-330-IR | 475 g | 50-100 | 250/17.2
|
2. tabula. SepaFlash Bonded Series SAX zibspuldzes kasetnes.Iepakojuma materiāli: īpaši tīrs neregulārs ar SAX savienots silīcija dioksīds, 40 - 63 μm, 60 Å.
Lai iegūtu papildinformāciju par detalizētām SepaBean™ specifikācijāmiekārtu vai SepaFlash sērijas zibspuldzes kasetņu pasūtīšanas informāciju, lūdzu, apmeklējiet mūsu vietni.
Ievietošanas laiks: Nov-09-2018