Rui Huangs, Bo Xu
Pieteikuma pētniecības un attīstības centrs
Ievads
Jonu apmaiņas hromatogrāfija (IEC) ir hromatogrāfijas metode, ko parasti izmanto, lai atdalītu un attīrītu savienojumus, kas jonu formā parādīti šķīdumā. Saskaņā ar dažādiem apmaināmu jonu maksas stāvokļiem IEC var iedalīt divos veidos, katjonu apmaiņas hromatogrāfijā un anjonu apmaiņas hromatogrāfijā. Katjonu apmaiņas hromatogrāfijā skābās grupas ir saistītas ar atdalīšanas barotnes virsmu. Piemēram, sulfonskābe (-SO3H) ir parasti izmantota grupa spēcīgā katjonu apmaiņā (SCX), kas disociē H+ un negatīvi lādēto grupu -so3- tādējādi var adsorbēt citus katjonus šķīdumā. Anjonu apmaiņas hromatogrāfijā sārmainās grupas tiek piesaistītas atdalīšanas barotnes virsmai. Piemēram, kvartāra amīns (-NR3OH, kur R ir ogļūdeņražu grupa) parasti izmanto spēcīgā anjonu apmaiņā (SAX), kas disociē OH- un pozitīvi lādētā grupā -N+R3 var adsorbēt citus anjonus šķīdumā, kā rezultātā rodas anjonu apmaiņas efekts.
Dabisko produktu vidū flavonoīdi ir piesaistījuši pētnieku uzmanību, jo tie ir loma sirds un asinsvadu slimību profilaksē un ārstēšanā. Tā kā flavonoīdu molekulas ir skābas fenola hidroksilgrupu klātbūtnes dēļ, jonu apmaiņas hromatogrāfija ir alternatīva iespēja papildus parastajai normālajai fāzei vai apgrieztai fāzes hromatogrāfijai šo skābo savienojumu atdalīšanai un attīrīšanai. Flash hromatogrāfijā jonu apmaiņas parasti izmantotie atdalīšanas barotnes ir silikagela matrica, kur jonu apmaiņas grupas ir piesaistītas tā virsmai. Visbiežāk izmantotie jonu apmaiņas režīmi zibspuldzes hromatogrāfijā ir SCX (parasti sulfonskābes grupa) un SAX (parasti kvartāra amīnu grupa). Iepriekš publicētajā pieteikuma piezīmē ar nosaukumu “Sepafash Spēcīgu katjonu apmaiņas hromatogrāfijas kolonnu pielietojums sārmaino savienojumu attīrīšanā” ar Santai Technologies tika izmantotas SCX kolonnas, lai attīrītu sārmainus savienojumus. Šajā amatā kā paraugu tika izmantots neitrālu un skābu standartu maisījums, lai izpētītu SAX kolonnu pielietojumu skābo savienojumu attīrīšanā.
Eksperimentālā sadaļa
1. attēls. Stacionārās fāzes shematiskā diagramma, kas saistīta ar saksa atdalīšanas barotnes virsmu.
Šajā amatā tika izmantota saksa kolonna, kas ir iepriekš iesaiņota ar kvartāra ar amīnu savienotu silīcija dioksīdu (kā parādīts 1. attēlā). Par paraugu attīram tika izmantots hromona un 2,4-dihidroksibenzoskābes maisījums (kā parādīts 2. attēlā). Maisījumu izšķīdināja metanolā un ar inžektoru ielādēja uz zibspuldzes kārtridža. Zibspuldzes attīrīšanas eksperimentālā iestatīšana ir uzskaitīta 1. tabulā.
2. attēls. Divu komponentu ķīmiskā struktūra parauga maisījumā.
| Instruments | Sepabean ™ mašīna t | |||||
| Patronas | 4 g Sepafash standarta sērijas zibspuldzes kārtridža (neregulārs silīcija dioksīds, 40-63 μm, 60 Å, pasūtījuma numurs: S-5101-0004) | 4 g Sepaflash saistītas sērijas saksa zibspuldzes kārtridža (neregulārs silīcija dioksīds, 40-63 μm, 60 Å, pasūtījuma numurs ： SW-5001-004-IR) | ||||
| Viļņa garums | 254 nm (noteikšana), 280 nm (uzraudzība) | |||||
| Mobilā fāze | Šķīdinātājs A: n-heksāns | |||||
| B šķīdinātājs: etilacetāts | ||||||
| Plūsmas ātrums | 30 ml/min | 20 ml/min | ||||
| Parauga slodze | 20 mg (komponenta A un komponenta B maisījums) | |||||
| Gradients | Laiks (CV) | B šķīdinātājs (%) | Laiks (CV) | B šķīdinātājs (%) | ||
| 0 | 0 | 0 | 0 | |||
| 1.7 | 12 | 14 | 100 | |||
| 3.7 | 12 | / | / | |||
| 16 | 100 | / | / | |||
| 18 | 100 | / | / | |||
Rezultāti un diskusija
Pirmkārt, parauga maisījumu atdalīja ar normālu fāzes zibspuldzes kasetni, kas iepriekš iesaiņota ar parastu silīcija dioksīdu. Kā parādīts 3. attēlā, abas parauga sastāvdaļas tika elucētas no kārtridža viena pēc otra. Tālāk parauga attīrīšanai tika izmantota saksa zibspuldzes kasetne. Kā parādīts 4. attēlā, skābā komponents B tika pilnībā saglabāts uz saksa kasetnes. Neitrālais komponents A pakāpeniski tika eluēts no kārtridža ar mobilās fāzes eluāciju.
3. attēls. Parauga zibspuldzes hromatogramma uz parasto parasto fāzes kasetni.
4. attēls. Parauga zibspuldzes hromatogramma uz saksa kasetnes.
Salīdzinot 3. un 4. attēlu, komponentam A ir nekonsekventa maksimuma forma uz divām dažādām zibspuldzes kasetnēm. Lai apstiprinātu, vai eluācijas virsotne atbilst komponentam, mēs varam izmantot pilnu viļņu garuma skenēšanas funkciju, kas ir iebūvēta Sepabean ™ mašīnas vadības programmatūrā. Atveriet divu atdalījumu eksperimentālos datus, velciet uz indikatora līniju uz laika asi (CV) hromatogrammā līdz augstākajam punktam un otrajam augstākajam eluācijas virsotnes punktam, kas atbilst komponentam A, un šo divu punktu pilna viļņa garuma spektrs tiks automātiski parādīts zem hromatogrammas (kā parādīts 5. un 6. attēlā). Salīdzinot visu šo divu atdalījumu viļņa garuma spektra datus, komponentam A ir konsekvents absorbcijas spektrs divos eksperimentos. Komponenta A iemesla dēļ ir nekonsekventa maksimālā forma uz divām dažādām zibspuldzes kasetnēm, tiek spekulēts, ka komponentā A, kurai ir atšķirīgs aizture parastajā fāzes kasetnē un saksa kārtridžā. Tāpēc eluēšanas secība ir atšķirīga komponentam A un piemaisījumos uz šīm divām zibspuldzes kārtridžiem, izraisot nekonsekventu hromatogrammu maksimuma formu.
5. attēls. Komponenta A un piemaisījumu pilna viļņa garuma spektrs, kas atdalīts ar normālu fāzes kasetni.
6. attēls. Komponenta A un piemaisījumu pilna viļņa garuma spektrs, kas atdalīts ar saksa kasetni.
Ja apkopojamais mērķa produkts ir neitrāls komponents A, attīrīšanas uzdevumu var viegli pabeigt, tieši izmantojot SAX kārtridžu eluēšanai pēc parauga ielādes. No otras puses, ja apkopojamais mērķa produkts ir skābais komponents B, uztveršanas atbrīvošanas veidu varētu pieņemt tikai ar nelielu pielāgošanos eksperimentālajiem posmiem: kad paraugs tika ielādēts uz saksa kārtridža un neitrāls komponents A bija pilnīgi eluēts ar normālu fāzes organisko šķīdinātājus, pārslēdziet mobilo fāzi uz metanola šķīdumu, kas satur 5% ESECIC skābes. Acetāta joni mobilajā fāzē konkurēs ar komponentu B par saistīšanos ar kvartāra amīna jonu grupām saksa kārtridža stacionārajā fāzē, tādējādi eluējot komponentu B no kārtridža, lai iegūtu mērķa produktu. Parauga hromatogramma, kas atdalīta jonu apmaiņas režīmā, tika parādīta 7. attēlā.
7. attēls. B Flash hromatogramma B eluēta jonu apmaiņas režīmā uz saksa kasetnes.
Noslēgumā jāsaka, ka skābo vai neitrālo paraugu var ātri attīrīt ar SAX kārtridžu apvienojumā ar normālu fāzes kasetni, izmantojot dažādas attīrīšanas stratēģijas. Turklāt, izmantojot pilna viļņa garuma skenēšanas funkciju, kas iebūvēta Sepabean ™ mašīnas vadības programmatūrā, eluēto frakciju raksturīgo absorbcijas spektru varēja viegli salīdzināt un apstiprināt, palīdzot pētniekiem ātri noteikt eluēto frakciju sastāvu un tīrību un tādējādi uzlabot darba efektivitāti.
| Vienuma numurs | Kolonnas izmērs | Plūsmas ātrums (ml/min) | Max.pressure (PSI/josla) |
| SW-5001-004-IR | 5,9 g | 10-20 | 400/27,5 |
| SW-5001-012-IR | 23 g | 15-30 | 400/27,5 |
| SW-5001-025-IR | 38 g | 15-30 | 400/27,5 |
| SW-5001-040-IR | 55 g | 20-40 | 400/27,5 |
| SW-5001-080-IR | 122 g | 30-60 | 350/24,0 |
| SW-5001-120-IR | 180 g | 40-80 | 300/20,7 |
| SW-5001-220-IR | 340 g | 50-100 | 300/20,7 |
| SW-5001-330-IR | 475 g | 50-100 | 250/17.2
|
2. tabula. SEPAFLASH BEAnded Series Sax Flash kārtridži. Iepakojuma materiāli: Ultra-Ture neregulārā saksa savienotā silīcija dioksīda, 40-63 μm, 60 Å.
Lai iegūtu papildinformāciju par detalizētām Sepabean ™ specifikācijāmMašīna vai pasūtīšanas informācija par Sepaflah sērijas Flash kārtridžiem, lūdzu, apmeklējiet mūsu vietni.
Pasta laiks: 2018. gada novembris