Rui Huangs, Bo Xu
Pieteikuma pētniecības un attīstības centrs
Ievads
Peptīds ir savienojums, kas sastāv no aminoskābēm, no kurām katram ir unikālas fizikālās un ķīmiskās īpašības, pateicoties dažādiem aminoskābju atlikumu veidiem, kas veido tā secību. Izstrādājot cieto fāžu ķīmisko sintēzi, dažādu aktīvo peptīdu ķīmiskā sintēze ir guvusi lielu progresu. Tomēr, ņemot vērā sarežģīto peptīda sastāvu, kas iegūts ar cietās fāzes sintēzi, galaprodukts jāattīra ar uzticamām atdalīšanas metodēm. Parasti izmantotās peptīdu attīrīšanas metodes ietver jonu apmaiņas hromatogrāfiju (IEC) un apgrieztās fāzes augstas veiktspējas šķidruma hromatogrāfiju (RP-HPLC), kurām ir zemas parauga slodzes spējas trūkumi, augstas atdalīšanas barotnes izmaksas, kas ir sarežģītas un dārgas atdalīšanas iekārtas utt. kuru timopentīna (TP-5) straujai attīrīšanai tika izmantota Sepafash RP C18 kārtridža, un tika iegūta mērķa produkts, kas atbilst prasībām.
1. attēls. 20 Parastās aminoskābes (reproducētas no www.bachem.com).
Peptīdu sastāvā ir 20 aminoskābju veidi. Šīs aminoskābes var iedalīt šādās grupās atbilstoši to polaritātes un skābes bāzes īpašībai: nepolāram (hidrofobiskai), polārajai (neuzlādēta), skāba vai pamata (kā parādīts 1. attēlā). Peptīdu secībā, ja aminoskābes, kas veido secību, lielākoties ir polārās (kā 1. attēlā iezīmētas rozā krāsā), piemēram, cisteīns, glutamīns, asparagīns, serīns, treonīns, tirozīns utt., Tad šim peptīdam var būt spēcīga polaritāte un tas ir ļoti šķīstošs ūdenī. Šo spēcīgo polāro peptīdu paraugu attīrīšanas procedūras laikā, izmantojot apgrieztas fāzes hromatogrāfiju, notiks fenomens, ko sauc par hidrofobisko fāzes sabrukumu (skat. Santai Technologies iepriekš publicēto lietojumprogrammu: Hidrofobiskā fāzes sabrukšana, AQ mainīta fāzes hromatogrāfijas kolonnas un to pielietojumi). Salīdzinot ar regulārajām C18 kolonnām, uzlabotās C18AQ kolonnas ir vispiemērotākās spēcīgu polāro vai hidrofilu paraugu attīrīšanai. Šajā amatā kā paraugu tika izmantots spēcīgs polārais peptīds un attīrīts ar C18AQ kolonnu. Tā rezultātā tika iegūts mērķa produkts, kas atbilst prasībām, un to varēja izmantot šādos pētījumos un attīstībā.
| Instruments | Kapu gaļa™Mašīna 2 | |||
| Patronas | 12 g Sepafash C18 Rp Flash kārtridža (sfēriskais silīcija dioksīds, 20-45 μm, 100 Å, pasūtiet Nunber ： SW-5222-012-Sp) | 12 g Sepafash C18Aq RP Flash kārtridža (sfēriskais silīcija dioksīds, 20-45 μm, 100 Å, pasūtījuma numurs ： SW-5222-012-Sp (aq))) | ||
| Viļņa garums | 254 nm, 220 nm | 214 nm | ||
| Mobilā fāze | Šķīdinātājs A: Ūdens B šķīdinātājs: acetonitrils | |||
| Plūsmas ātrums | 15 ml/min | 20 ml/min | ||
| Parauga slodze | 30 mg | |||
| Gradients | Laiks (CV) | B šķīdinātājs (%) | Laiks (min) | B šķīdinātājs (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
Rezultāti un diskusija
Lai salīdzinātu polārā peptīda parauga attīrīšanas veiktspēju starp parasto C18 kolonnu un C18AQ kolonnu, parauga zibspuldzēšanai mēs izmantojām parasto C18 kolonnu kā sākumu. Kā parādīts 2. attēlā, C18 ķēžu hidrofobās fāzes sabrukšanas dēļ, ko izraisa augsta ūdens attiecība, paraugu tik tikko saglabāja uz parastās C18 kārtridža un tika tieši eluēta ar mobilo fāzi. Tā rezultātā paraugs netika efektīvi atdalīts un attīrīts.
2. attēls. Parauga zibspuldzes hromatogramma uz parastās C18 kārtridža.
Tālāk parauga zibspuldzei mēs izmantojām C18AQ kolonnu. Kā parādīts 3. attēlā, peptīds tika efektīvi saglabāts uz kolonnas un pēc tam eluēts. Mērķa produkts tika atdalīts no piemaisījumiem neapstrādātā paraugā un savākts. Pēc liofilizācijas un pēc tam to analizēja HPLC, attīrītā produkta tīrība ir 98,2%, un to varētu vēl vairāk izmantot nākamā soļa izpētei un attīstībai.
3. attēls. Parauga zibspuldzes hromatogramma uz C18AQ kārtridža.
Noslēgumā jāsaka, ka Sepaflah C18AQ RP Flash kārtridža apvienojumā ar Flash hromatogrāfijas sistēmas kapu jūras reģionu™Mašīna varētu piedāvāt ātru un efektīvu risinājumu spēcīgu polāro vai hidrofilu paraugu attīrīšanai.
Ir virkne Sepaflah C18AQ RP Flash kārtridžu ar atšķirīgām specifikācijām no Santai tehnoloģijas (kā parādīts 2. tabulā).
| Vienuma numurs | Kolonnas izmērs | Plūsmas ātrums (ml/min) | Max.pressure (PSI/josla) |
| SW-5222-004-Sp (AQ) | 5,4 g | 5-15 | 400/27,5 |
| SW-5222-012-SP (AQ) | 20 g | 10-25 | 400/27,5 |
| SW-5222-025-Sp (AQ) | 33 g | 10-25 | 400/27,5 |
| SW-5222-040-Sp (AQ) | 48 g | 15-30 | 400/27,5 |
| SW-5222-080-Sp (AQ) | 105 g | 25-50 | 350/24,0 |
| SW-5222-120-Sp (AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20,7 |
| SW-5222-220-Sp (AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20,7 |
| SW-5222-330-Sp (AQ) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
2. tabula. SEPAFLASH C18AQ RP Flash kārtridži. Iepakojuma materiāli: augstas efektivitātes sfēriska C18 (AQ) silīcija dioksīds, 20-45 μm, 100 Å.
Lai iegūtu papildinformāciju par Sepabean ™ mašīnas detalizētām specifikācijām vai pasūtīšanas informāciju par Sepaflash sērijas Flash kārtridžiem, lūdzu, apmeklējiet mūsu vietni.
Pasta laiks: 2018. gada 12. oktobris