Meiyuan Qian, Yuefeng Tan, Bo Xu
Taikymo tyrimų ir plėtros centras
Įvadas
Taxus (Taxus chinensis arba Kinijos kukmedis) yra laukinė augalas, kurį saugo šalis. Tai yra retas ir nykstantis augalas, kurį palieka ketvirtiniai ledynai. Tai taip pat vienintelis natūralus vaistinis augalas pasaulyje. Taksus paskirstomas vidutinio klimato zonoje šiauriniame pusrutulyje iki vidutinio pobūdžio regiono, kuriame pasaulyje yra apie 11 rūšių. Kinijoje yra 4 rūšys ir 1 įvairovė, būtent šiaurės rytų taksus, „Yunnan Taxus“, „Taxus“, „Tibeto taksus“ ir „Southern Taxus“. Šios penkios rūšys yra platinamos Pietvakarių Kinijoje, Pietų Kinijoje, Centrinėje Kinijoje, Rytų Kinijoje, Šiaurės Vakarų Kinijoje, Šiaurės rytų Kinijoje ir Taivane. Taxus augaluose yra daugybė cheminių komponentų, įskaitant taksanus, flavonoidus, lignanus, steroidus, fenolio rūgštis, seskviterpenus ir glikozidus. Garsusis priešnavikinis narkotikų taksolas (arba paklitakselis) yra savotiškas taksanai. Taksolas turi unikalius priešvėžiniųjų mechanizmus. Taksolas gali „užšaldyti“ mikrotubulus, šukuodamas su jais ir neleidžiant mikrotubuliams atskirti chromosomas ląstelių dalijimosi metu, todėl mirė skiriant ląsteles, ypač greitai dauginančias vėžio ląsteles [1]. Be to, suaktyvindamas makrofagus, taksolas sumažina TNF-α (naviko nekrozės faktoriaus) receptorius ir išsiskyrimą su TNF-α, taip žudydamas arba slopindamas naviko ląsteles [2]. Be to, taksolas gali sukelti apoptozę, veikdama apoptozinio receptoriaus keliu, kurį sukelia FAS/FASL, arba suaktyvindamas cisteino proteazės sistemą [3]. Dėl daugybės tikslinių priešvėžinių poveikių taksolas yra plačiai naudojamas gydant kiaušidžių vėžį, krūties vėžį, nesmulkialąstelinį ląstelių plaučių vėžį (NSCLC), skrandžio vėžį, stemplės vėžį, šlapimo pūslės vėžį, prostatos vėžį, piktybinę melanomą, galvos ir kaklo vėžį ir kt. [4]. Ypač dėl pažengusio krūties vėžio ir pažengusio kiaušidžių vėžio, taksolas turi puikų gydomąjį poveikį, todėl jis yra žinomas kaip „paskutinė gynybos linija gydant vėžį“.
Taksolas yra populiariausias priešvėžinis vaistas tarptautinėje rinkoje pastaraisiais metais ir laikomas vienu veiksmingiausių priešvėžinių vaistų žmonėms per ateinančius 20 metų. Pastaraisiais metais, sprogstamam gyventojų skaičiui ir vėžiui augti, taksolio paklausa taip pat žymiai padidėjo. Šiuo metu klinikiniams ar moksliniams tyrimams reikalingas taksolas daugiausia išgaunamas tiesiogiai iš taksų. Deja, taksolio kiekis augaluose yra gana mažas. Pavyzdžiui, taksolio kiekis yra tik 0,069% „Taxus Brevifolia“ žievėje, kuri paprastai laikoma didžiausiu kiekiu. Norint išgauti 1 g taksolio, tam reikia apie 13,6 kg taksvos žievės. Remiantis šiuo įvertinimu, kiaušidžių vėžio pacientui gydyti reikia 3–12 taksų medžių, kuriems yra daugiau nei 100 metų. Dėl šios priežasties buvo supjaustyta daugybė taksvų medžių, dėl kurių šios brangios rūšys buvo beveik išnykusios. Be to, taksus yra labai prastas išteklių ir lėto augimo, todėl jį sunku toliau tobulinti ir naudoti taksolius.
Šiuo metu bendra taksolio sintezė buvo sėkmingai baigta. Tačiau jo sintetinis maršrutas yra labai sudėtingas ir brangus, todėl jis neturi jokios pramonės reikšmės. Pusiau sintetinis taksolio metodas dabar yra gana subrendęs ir yra laikomas veiksmingu būdu išplėsti taksolio šaltinį, be dirbtinio sodinimo. Trumpai tariant, taksolio pusiau sintezėje, taksolio pirmtako junginys, kurio santykinai gausu taksų gamyklose, yra išgaunamas ir po to cheminės sintezės metu paverčiamas taksoliu. 10-deacetilbaccatino ⅲ kiekis taksų bakakata gali būti iki 0,1%. O adatas lengva atsinaujinti, palyginti su žirgais. Todėl taksolio pusiau sintezė, pagrįsta 10-deacetilbaccatin ⅲ, pritraukia vis daugiau tyrėjų dėmesio [5] (kaip parodyta 1 paveiksle).
1 paveikslas. Pusiau sintetinis taksolio būdas, pagrįstas 10-deacetilbaccatin ⅲ.
Šiame įraše taksvų augalo ekstraktas buvo išgrynintas atliekant blykstės paruošimo skysčių chromatografijos sistemos „Sepabean ™“ mašiną kartu su SEPAFLASH C18 atvirkštinės fazės (RP) blykstės kasetėmis, pagamintomis „Santai Technologies“. Tikslinis produktas, tenkinantis grynumo reikalavimus, buvo gauti ir gali būti naudojami atliekant vėlesnius mokslinius tyrimus, siūlant ekonomiškai efektyvų sprendimą greitai valyti tokio tipo natūralius produktus.
| Instrumentas | „Sepabean ™“ mašina | |
| Kasetė | 12 g „Sepaflash C18 RP“ blykstės kasetė (sferinis silicio dioksidas, 20–45 μm, 100 Å, užsakymo numeris ： SW-5222-012-SP) | |
| Bangos ilgis | 254 nm (aptikimas), 280 nm (stebėjimas) | |
| Mobilioji fazė | Tirpiklis A: vanduo | |
| Tirpiklis B: metanolio | ||
| Srauto greitis | 15 ml/min | |
| Mėginio pakrovimas | 20 mg neapdorotas mėginys, ištirpintas 1 ml DMSO | |
| Gradientas | Laikas (min) | Tirpiklis B (%) |
| 0 | 10 | |
| 5 | 10 | |
| 7 | 28 | |
| 14 | 28 | |
| 16 | 40 | |
| 20 | 60 | |
| 27 | 60 | |
| 30 | 72 | |
| 40 | 72 | |
| 43 | 100 | |
| 45 | 100 | |
Rezultatai ir diskusija
Neapdoroto ekstrakto iš taksų ekstrakto blykstės chromatograma buvo parodyta 2 paveiksle. Analizuojant chromatogramą, tikslinį produktą ir priemaišas, pasiektas pradinis atskyrimas. Be to, gerą atkuriamumą taip pat įgyvendino kelios mėginių injekcijos (duomenys nepateikti). Rankinio chromatografijos metodo atskyrimas su stiklo kolonomis užtruks apie 4 valandas. Palyginus su tradiciniu rankinės chromatografijos metodu, automatinio valymo metodas šiame įraše reikalauja tik 44 minučių, kad būtų atlikta visa valymo užduotis (kaip parodyta 3 paveiksle). Daugiau nei 80% laiko ir didelį tirpiklio kiekį galima išsaugoti naudojant automatinį metodą, kuris gali efektyviai sumažinti sąnaudas ir žymiai pagerinti darbo efektyvumą.
2 paveikslas. Neapdoroto ekstrakto iš taksų ekstrakto blykstės chromatograma.
3 paveikslas. Rankinės chromatografijos metodo palyginimas naudojant automatinį gryninimo metodą.
Apibendrinant galima pasakyti, kad „Sepaflash C18 RP“ „Flash“ kasetės su „Sepabean ™“ mašina gali pasiūlyti greitą ir efektyvų sprendimą greitai valyti natūralius produktus, tokius kaip taksų ekstraktas.
Nuorodos
1. Alushin GM, Lander GC, Kellogg EH, Zhang R, Baker D ir Nogales E. Didelės skiriamosios gebos mikrotubulų struktūros atskleidžia struktūrinius perėjimus ββ-tubulino metu po GTP hidrolizės. Ląstelė, 2014, 157 (5), 1117-1129.
2. Burkhart CA, Berman JW, Swindell CS ir Horwitz SB. Ryšys tarp taksolio struktūros ir kitų taksanų, sukeliant naviko nekrozės faktoriaus α geno ekspresiją ir citotoksiškumą. Vėžio tyrimai, 1994, 54 (22), 5779-5782.
3. „Park SJ“, „Wu CH“, „Gordon JD“, „Zhong X“, „Emami A“ ir „Safa AR“. Taksolas sukelia nuo kaspazės-10 priklausomą apoptozę, J. Biol. Chem., 2004, 279, 51057-51067.
4. paklitakselis. Amerikos sveikatos sistemos vaistininkų draugija. [2015 m. Sausio 2 d.]
5. Bruce'as Ganemas ir Rolandas R. Franke. „Paclitaxel“ iš pirminių taksanų: „Organozirconium Chemijos“ kūrybinio išradimo perspektyva. J. Org. Chem., 2007, 72 (11), 3981-3987.
Yra daugybė „Sepaflash C18 RP“ blykstės kasečių, turinčių skirtingas „Santai“ technologijos specifikacijas (kaip parodyta 2 lentelėje).
| Prekės numeris | Stulpelio dydis | Srauto greitis (ml/min) | MAX.PRESSURE (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP | 5,4 g | 5-15 | 400/27,5 |
| SW-5222-012-SP | 20 g | 10-25 | 400/27,5 |
| SW-5222-025-SP | 33 g | 10-25 | 400/27,5 |
| SW-5222-040-SP | 48 g | 15-30 | 400/27,5 |
| SW-5222-080-SP | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP | 155 g | 30–60 | 300/20,7 |
| SW-5222-220-SP | 300 g | 40–80 | 300/20,7 |
| SW-5222-330-SP | 420 g | 40–80 | 250/17.2 |
2 lentelė. „Sepaflash C18 RP“ blykstės kasetės.
Pakavimo medžiagos: Didelio efektyvumo sferinė C18 sujungtas silicio dioksidas, 20–45 μm, 100 Å
Norėdami gauti daugiau informacijos apie išsamias „Sepabean ™ Machine“ specifikacijas arba užsakymo informaciją apie „Sepaflash“ serijos „Flash“ kasetes, apsilankykite mūsų svetainėje
Pašto laikas: 2018 m. Rugsėjo 20 d