Mingzu Yang, Bo Xu
Taikymo tyrimų ir plėtros centras
Įvadas
Antibiotikai yra antrinių metabolitų klasė, kurią gamina mikroorganizmai (įskaitant bakterijas, grybus, aktinomicetus) arba panašius junginius, kurie yra chemiškai arba pusiau sintezuojami.Antibiotikai gali slopinti kitų mikroorganizmų augimą ir išlikimą.Pirmąjį žmogaus atrastą antibiotiką peniciliną 1928 m. atrado britų mikrobiologas Aleksandras Flemingas. Jis pastebėjo, kad pelėsiu užterštoje stafilokokų kultūros lėkštelėje šalia pelėsio esančios bakterijos negali augti.Jis postulavo, kad pelėsis turi išskirti antibakterinę medžiagą, kurią 1928 metais pavadino penicilinu. Tačiau veikliosios medžiagos tuo metu nebuvo išvalytos.1939 m. Ernstas Chainas ir Howardas Florey iš Oksfordo universiteto nusprendė sukurti vaistą, galintį gydyti bakterines infekcijas.Susisiekę su Flemingu, norėdami gauti padermių, jie sėkmingai ištraukė ir išgrynino peniciliną iš padermių.Už sėkmingą penicilino, kaip terapinio vaisto, sukūrimą Flemingas, Chain ir Florey pasidalijo 1945 m. Nobelio medicinos premiją.
Antibiotikai naudojami kaip antibakteriniai vaistai bakterinėms infekcijoms gydyti arba jų profilaktikai.Yra keletas pagrindinių antibiotikų kategorijų, naudojamų kaip antibakterinės medžiagos: β-laktaminiai antibiotikai (įskaitant peniciliną, cefalosporiną ir kt.), aminoglikozidų grupės antibiotikai, makrolidų grupės antibiotikai, tetraciklino grupės antibiotikai, chloramfenikolis (bendras sintetinis antibiotikas) ir kt. biologinė fermentacija, pusiau sintezė ir visa sintezė.Biologinės fermentacijos būdu gaminami antibiotikai turi būti struktūriškai modifikuoti cheminiais metodais dėl cheminio stabilumo, toksinio šalutinio poveikio, antibakterinio spektro ir kitų problemų.Chemiškai modifikuoti antibiotikai gali pasiekti didesnį stabilumą, sumažinti toksinį šalutinį poveikį, išplėsti antibakterinį spektrą, sumažinti atsparumą vaistams, pagerinti biologinį prieinamumą ir taip pagerinti gydymo vaistais poveikį.Todėl pusiau sintetiniai antibiotikai šiuo metu yra populiariausia antibiotikų kūrimo kryptis.
Kuriant pusiau sintetinius antibiotikus, antibiotikai pasižymi žemo grynumo savybėmis, turi daug šalutinių produktų ir sudėtingų komponentų, nes jie gaunami iš mikrobų fermentacijos produktų.Šiuo atveju ypač svarbi pusiau sintetinių antibiotikų priemaišų analizė ir kontrolė.Norint efektyviai identifikuoti ir apibūdinti priemaišas, reikia gauti pakankamą kiekį priemaišų iš pusiau sintetinių antibiotikų sintetinio produkto.Tarp dažniausiai naudojamų priemaišų paruošimo metodų greitoji chromatografija yra ekonomiškas metodas, turintis tokius privalumus kaip didelis mėginio įkrovimo kiekis, maža kaina, laiko taupymas ir tt Flash chromatografija vis dažniau naudojama sintetikos tyrinėtojų.
Šiame įraše pagrindinė pusiau sintetinio aminoglikozidinio antibiotiko priemaiša buvo panaudota kaip mėginys ir išgryninta SepaFlash C18AQ kasetė kartu su greitosios chromatografijos sistemos SepaBean™ aparatu.Reikalavimus atitinkantis tikslinis produktas buvo sėkmingai gautas, o tai rodo labai efektyvų šių junginių valymo sprendimą.
Eksperimentinis skyrius
Mėginį maloniai pateikė vietinė farmacijos įmonė.Mėginys buvo tam tikri amino policikliniai angliavandeniai, o jo molekulinė struktūra buvo panaši į aminoglikozidinius antibiotikus.Mėginio poliškumas buvo gana didelis, todėl jis labai tirpsta vandenyje.Mėginio molekulinės struktūros schema parodyta 1 paveiksle. Neapdoroto mėginio grynumas buvo apie 88%, analizuojant HPLC.Remiantis mūsų ankstesne patirtimi, norint išvalyti šiuos didelio poliškumo junginius, mėginys vos išliks įprastose C18 kolonėlėse.Todėl mėginio gryninimui buvo naudojama C18AQ kolonėlė.
1 pav. Pavyzdžio molekulinės struktūros schema.
Norint paruošti mėginio tirpalą, 50 mg neapdoroto mėginio buvo ištirpinta 5 ml gryno vandens ir po to ultragarsu, kad jis taptų visiškai skaidrus tirpalas.Tada mėginio tirpalas purkštuvu buvo įšvirkščiamas į „flash“ kolonėlę.Eksperimentinė greito valymo sąranka buvo pateikta 1 lentelėje.
| Instrumentas | SepaBean™ aparatas 2 | |
| Kasetės | 12 g SepaFlash C18AQ RP blykstės kasetė (sferinis silicio dioksidas, 20–45 μm, 100 Å, užsakymo numeris: SW-5222-012-SP(AQ)) | |
| Bangos ilgis | 204 nm, 220 nm | |
| Mobili fazė | A tirpiklis: vanduo Tirpiklis B: acetonitrilas | |
| Srauto greitis | 15 ml/min | |
| Mėginio įkėlimas | 50 mg | |
| Gradientas | Laikas (min.) | B tirpiklis (%) |
| 0 | 0 | |
| 19.0 | 8 | |
| 47,0 | 80 | |
| 52.0 | 80 | |
Rezultatai ir DISKUSIJA
Mėginio chromatograma ant C18AQ kasetės parodyta 2 paveiksle. Kaip parodyta 2 paveiksle, labai polinis mėginys buvo veiksmingai išlikęs ant C18AQ kasetės.Po surinktų frakcijų liofolizavimo tikslinio produkto grynumas buvo 96,2% (kaip parodyta 3 paveiksle) pagal HPLC analizę.Rezultatai parodė, kad išgrynintas produktas gali būti toliau naudojamas kitame tyrimo ir plėtros etape.
2 pav. Mėginio greitoji chromatograma ant C18AQ kasetės.
3 pav. Tikslinio produkto HPLC chromatograma.
Apibendrinant galima pasakyti, kad SepaFlash C18AQ RP blykstės kasetė kartu su blykstės chromatografijos sistemos SepaBean™ aparatu gali pasiūlyti greitą ir veiksmingą sprendimą labai poliniams mėginiams išvalyti.
Apie SepaFlash C18AQ RP blykstės kasetes
Yra keletas SepaFlash C18AQ RP blykstės kasečių, kurių specifikacijos skiriasi nuo Santai Technology (kaip parodyta 2 lentelėje).
| Prekės numeris | Stulpelio dydis | Srauto greitis (ml/min.) | Maksimalus slėgis (psi/baras) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5,4 g | 5-15 | 400/27,5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 g | 10-25 | 400/27,5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 g | 10-25 | 400/27,5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 g | 15-30 | 400/27,5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 g | 25-50 | 350/24,0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20,7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20,7 |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 g | 40-80 | 250/17,2 |
2 lentelė. SepaFlash C18AQ RP blykstės kasetės.Pakavimo medžiagos: didelio efektyvumo sferinis C18(AQ) surištas silicio dioksidas, 20 - 45 μm, 100 Å.
Norėdami gauti daugiau informacijos apie išsamias SepaBean™ aparato specifikacijas arba SepaFlash serijos blykstės kasečių užsakymo informaciją, apsilankykite mūsų svetainėje.
Skelbimo laikas: 2018-10-26