Rui Huangas, Bo Xu
Taikymo tyrimų ir plėtros centras
Įvadas
Jonų mainų chromatografija (IEC) yra chromatografinis metodas, paprastai naudojamas atskirti ir išgryninti junginius, kurie yra joninės formos tirpale.Pagal skirtingas keičiamųjų jonų krūvio būsenas IEC galima suskirstyti į du tipus: katijonų mainų chromatografiją ir anijonų mainų chromatografiją.Atliekant katijonų mainų chromatografiją, rūgštinės grupės sujungiamos su atskyrimo terpės paviršiumi.Pavyzdžiui, sulfonrūgštis (-SO3H) yra plačiai naudojama stiprių katijonų mainų (SCX) grupė, kuri disocijuoja H+, o neigiamo krūvio grupė -SO3- gali adsorbuoti kitus tirpale esančius katijonus.Anijonų mainų chromatografijoje šarminės grupės yra prijungiamos prie atskyrimo terpės paviršiaus.Pavyzdžiui, ketvirtinis aminas (-NR3OH, kur R yra angliavandenilio grupė) paprastai naudojamas stipriuose anijonų mainuose (SAX), kuris disocijuoja OH-, o teigiamai įkrauta grupė -N+R3 gali adsorbuoti kitus tirpale esančius anijonus, todėl susidaro anijonas. mainų efektas.
Tarp natūralių produktų flavonoidai patraukė mokslininkų dėmesį dėl savo vaidmens širdies ir kraujagyslių ligų profilaktikai ir gydymui.Kadangi flavonoidų molekulės yra rūgštinės dėl fenolio hidroksilo grupių buvimo, jonų mainų chromatografija yra alternatyvi galimybė, be įprastos normalios fazės arba atvirkštinės fazės chromatografijos, skirtos šiems rūgštiniams junginiams atskirti ir išvalyti.Greitosios chromatografijos metu jonų mainams dažniausiai naudojama atskyrimo terpė yra silikagelio matrica, kurioje jonų mainų grupės yra prijungtos prie jos paviršiaus.Dažniausiai sparčiosios chromatografijos metu naudojami jonų mainų režimai yra SCX (dažniausiai sulfonrūgšties grupė) ir SAX (dažniausiai ketvirtinė aminų grupė).Anksčiau paskelbtoje paraiškos pastaboje pavadinimu „SepaFlash stiprių katijonų mainų chromatografijos kolonėlių taikymas šarminių junginių valymui“, kurią sukūrė Santai Technologies, šarminiams junginiams valyti buvo naudojamos SCX kolonėlės.Šiame įraše neutralių ir rūgščių standartų mišinys buvo naudojamas kaip pavyzdys, siekiant ištirti SAX kolonėlių taikymą rūgščių junginių valymui.
Eksperimentinis skyrius
1 pav. Nejudančios fazės, sujungtos su SAX atskyrimo terpės paviršiumi, schema.
Šiame įraše buvo naudojama SAX kolonėlė, iš anksto supakuota su ketvirtiniu aminu sujungtu silicio dioksidu (kaip parodyta 1 paveiksle).Chromono ir 2,4-dihidroksibenzenkarboksirūgšties mišinys buvo naudojamas kaip gryninamas mėginys (kaip parodyta 2 paveiksle).Mišinys buvo ištirpintas metanolyje ir purkštuvu įdėtas į blykstės kasetę.Eksperimentinė blykstės valymo sąranka pateikta 1 lentelėje.
2 pav. Dviejų komponentų cheminė struktūra mėginio mišinyje.
| Instrumentas | SepaBean™ mašina T | |||||
| Kasetės | 4 g SepaFlash standartinės serijos blykstės kasetė (netaisyklingas silicio dioksidas, 40–63 μm, 60 Å, užsakymo numeris: S-5101-0004) | 4 g SepaFlash Bonded Series SAX blykstės kasetė (netaisyklingas silicio dioksidas, 40–63 μm, 60 Å, užsakymo numeris: SW-5001-004-IR) | ||||
| Bangos ilgis | 254 nm (aptikimas), 280 nm (stebėjimas) | |||||
| Mobili fazė | Tirpiklis A: N-heksanas | |||||
| Tirpiklis B: etilo acetatas | ||||||
| Srauto greitis | 30 ml/min | 20 ml/min | ||||
| Mėginio įkėlimas | 20 mg (A ir B komponento mišinys) | |||||
| Gradientas | Laikas (CV) | B tirpiklis (%) | Laikas (CV) | B tirpiklis (%) | ||
| 0 | 0 | 0 | 0 | |||
| 1.7 | 12 | 14 | 100 | |||
| 3.7 | 12 | / | / | |||
| 16 | 100 | / | / | |||
| 18 | 100 | / | / | |||
Rezultatai ir DISKUSIJA
Pirma, mėginio mišinys buvo atskirtas normalios fazės blykstės kasetė, iš anksto supakuota įprastu silicio dioksidu.Kaip parodyta 3 paveiksle, du mėginio komponentai vienas po kito buvo išplaunami iš kasetės.Tada mėginiui išvalyti buvo panaudota SAX blykstės kasetė.Kaip parodyta 4 paveiksle, rūgštinis B komponentas visiškai išliko ant SAX kasetės.Neutralus komponentas A palaipsniui buvo išplautas iš kasetės, eliuuojant judriąją fazę.
3 pav. Mėginio greitoji chromatograma ant įprastos normalios fazės kasetės.
4 pav. Mėginio greitoji chromatograma ant SAX kasetės.
Lyginant 3 ir 4 paveikslus, komponentas A turi nevienodą smailės formą dviejose skirtingose blykstės kasetėse.Norėdami patvirtinti, ar eliuavimo smailė atitinka komponentą, galime naudoti viso bangos ilgio nuskaitymo funkciją, kuri yra integruota į SepaBean™ įrenginio valdymo programinę įrangą.Atidarykite dviejų atskyrimų eksperimentinius duomenis, vilkite iki indikatoriaus linijos, esančios laiko ašyje (CV) chromatogramoje iki aukščiausio taško ir antrojo aukščiausio eliuavimo smailės taško, atitinkančio A komponentą, ir visą šių dviejų bangos ilgių spektrą. taškai bus automatiškai rodomi po chromatograma (kaip parodyta 5 ir 6 paveiksluose).Lyginant šių dviejų atskyrimų viso bangos ilgio spektro duomenis, komponentas A turi nuoseklų sugerties spektrą dviejuose eksperimentuose.Kadangi komponentas A turi nevienodą smailės formą dviejose skirtingose blykstės kasetėse, spėjama, kad komponente A yra specifinių priemaišų, kurių sulaikymas normalios fazės kasetėje ir SAX kasetėje skiriasi.Todėl komponento A ir šių dviejų blykstės kasečių priemaišų eliuavimo seka skiriasi, todėl chromatogramų smailių forma yra nenuosekli.
5 pav. Visas komponento A bangos ilgio spektras ir priemaiša, atskirta normalios fazės kasete.
6 pav. Visas komponento A bangos ilgio spektras ir priemaiša, atskirta SAX kasete.
Jei tikslinis produktas, kurį reikia surinkti, yra neutralus komponentas A, valymo užduotį galima lengvai atlikti naudojant SAX kasetę eliuavimui po mėginio įdėjimo.Kita vertus, jei tikslinis produktas, kurį reikia surinkti, yra rūgštinis komponentas B, surinkimo ir išleidimo būdas gali būti pritaikytas tik šiek tiek pakoregavus eksperimentinius veiksmus: kai mėginys buvo įdėtas į SAX kasetę ir neutralų komponentą A. buvo visiškai išplautas normalios fazės organiniais tirpikliais, mobiliąją fazę pakeiskite į metanolio tirpalą, kuriame yra 5% acto rūgšties.Acetato jonai judriojoje fazėje konkuruos su komponentu B, kad prisijungtų prie ketvirtinių aminų jonų grupių stacionarioje SAX kasetės fazėje, taip išplaudami komponentą B iš kasetės, kad gautų tikslinį produktą.Mėginio, atskirto jonų mainų režimu, chromatograma parodyta 7 paveiksle.
7 pav. B komponento, eliuuoto jonų mainų režimu SAX kasetėje, blykstės chromatograma.
Apibendrinant galima pasakyti, kad rūgštinis arba neutralus mėginys gali būti greitai išvalytas naudojant SAX kasetę kartu su normalios fazės kasetė, naudojant skirtingas valymo strategijas.Be to, naudojant viso bangos ilgio skenavimo funkciją, integruotą į SepaBean™ aparato valdymo programinę įrangą, galima lengvai palyginti ir patvirtinti būdingą eliuuotų frakcijų sugerties spektrą, padedantį tyrėjams greitai nustatyti eliuuotų frakcijų sudėtį ir grynumą ir taip pagerinti. darbo efektyvumas.
| Prekės numeris | Stulpelio dydis | Srauto greitis (ml/min.) | Maksimalus slėgis (psi/baras) |
| SW-5001-004-IR | 5,9 g | 10-20 | 400/27,5 |
| SW-5001-012-IR | 23 g | 15-30 | 400/27,5 |
| SW-5001-025-IR | 38 g | 15-30 | 400/27,5 |
| SW-5001-040-IR | 55 g | 20-40 | 400/27,5 |
| SW-5001-080-IR | 122 g | 30-60 | 350/24,0 |
| SW-5001-120-IR | 180 g | 40-80 | 300/20,7 |
| SW-5001-220-IR | 340 g | 50-100 | 300/20,7 |
| SW-5001-330-IR | 475 g | 50-100 | 250/17,2
|
2 lentelė. SepaFlash Bonded Series SAX blykstės kasetės.Pakavimo medžiagos: Itin grynas netaisyklingas SAX surištas silicio dioksidas, 40 - 63 μm, 60 Å.
Daugiau informacijos apie išsamias SepaBean™ specifikacijasmašiną arba SepaFlash serijos blykstės kasečių užsakymo informaciją, apsilankykite mūsų svetainėje.
Paskelbimo laikas: 2018-11-09