Rui Huang, Bo Xu
Taikymo tyrimų ir plėtros centras
Įvadas
Jonų mainų chromatografija (IEC) yra chromatografinis metodas, paprastai naudojamas atskirti ir išvalyti junginius, kurie yra joninės formos tirpale. Remiantis skirtingomis keičiamų jonų krūvio būsenomis, IEC galima suskirstyti į dvi rūšis: katijonų mainų chromatografiją ir anijonų mainų chromatografiją. Katijonų mainų chromatografijoje rūgštinės grupės yra sujungtos su atskyrimo terpės paviršiumi. Pavyzdžiui, sulfonrūgštis (-o3h) yra dažniausiai naudojama stiprių katijonų mainų (SCX) grupėje, kuri disociaruoja H+ ir neigiamai įkrautą grupę -So3- gali adsorbuoti kitus tirpalo katijonus. Anijonų mainų chromatografijoje šarminės grupės yra sujungtos su atskyrimo terpės paviršiumi. Pvz., Kvartero aminas (-nr3OH, kur R yra angliavandenilių grupė) paprastai naudojamas stipriuose anijonų mainuose (SAX), kuris disociarui ir yra ir teigiamai įkrautas grupė -n+R3 gali adsorbuoti kitus anijonus tirpale, todėl atsiranda anijonų mainų efektas.
Tarp natūralių produktų flavonoidai patraukė tyrėjų dėmesį dėl jų vaidmens siekiant prevencijos ir gydymo širdies ir kraujagyslių ligomis. Kadangi flavonoidinės molekulės yra rūgščios dėl fenolio hidroksilo grupių buvimo, jonų mainų chromatografija yra alternatyvi galimybė, be įprastos normalios fazės arba atvirkštinės fazės chromatografijos, skirtos atskirti ir valyti šiuos rūgščius junginius. Flash chromatografijoje dažniausiai naudojama jonų mainų atskyrimo terpė yra silikagelio matrica, kur jonų mainų grupės yra sujungtos su jo paviršiumi. Dažniausiai naudojami jonų mainų režimai „Flash“ chromatografijoje yra SCX (paprastai sulfoninės rūgšties grupė) ir saksai (paprastai ketvirtinė aminų grupė). Anksčiau paskelbtame taikymo pastaboje su pavadinimu „SANTAI Technologies -„ Sepaflash Strong Cation Exchange “chromatografijos stulpeliai, valyti šarminius junginius“, SCX stulpeliai buvo naudojami šarminių junginių valymui. Šiame įraše kaip mėginį buvo naudojamas neutralių ir rūgščių standartų mišinys, siekiant ištirti saksų kolonų naudojimą rūgščių junginių valymui.
Eksperimentinis skyrius
1 paveikslas. Stacionarios fazės schema, sujungta su saksų atskyrimo terpės paviršiumi.
Šiame įraše buvo naudojamas saksų kolonėlė, supakuota su keturkampiu amino surištu silicio dioksidu (kaip parodyta 1 paveiksle). Kaip mėginį, kurį reikia išgryninti, buvo naudojamas chromono ir 2,4-dihidroksibenzoinės rūgšties mišinys (kaip parodyta 2 paveiksle). Mišinys ištirpintas metanolyje, o injektorius - į blykstės kasetę. Eksperimentinė blykstės gryninimo sąranka išvardyta 1 lentelėje.
2 paveikslas. Dviejų komponentų cheminė struktūra mėginio mišinyje.
| Instrumentas | „Sepabean ™“ mašina t | |||||
| Kasetės | 4 g „Sepaflash“ standartinės serijos „Flash“ kasetė (netaisyklingas silicio dioksidas, 40–63 μm, 60 Å, užsakymo numeris: S-5101-0004) | 4 g „Sepaflash“ surištos serijos „Sax Flash“ kasetė (netaisyklingas silicio dioksidas, 40–63 μm, 60 Å, užsakymo numeris ： SW-5001-004-IR) | ||||
| Bangos ilgis | 254 nm (aptikimas), 280 nm (stebėjimas) | |||||
| Mobilioji fazė | Tirpiklis A: N-heksanas | |||||
| Tirpiklis B: etilo acetatas | ||||||
| Srauto greitis | 30 ml/min | 20 ml/min | ||||
| Mėginio pakrovimas | 20 mg (A komponento ir komponento B) mišinys | |||||
| Gradientas | Laikas (CV) | Tirpiklis B (%) | Laikas (CV) | Tirpiklis B (%) | ||
| 0 | 0 | 0 | 0 | |||
| 1.7 | 12 | 14 | 100 | |||
| 3.7 | 12 | / | / | |||
| 16 | 100 | / | / | |||
| 18 | 100 | / | / | |||
Rezultatai ir diskusija
Pirma, mėginio mišinys buvo atskirtas normalios fazės blykstės kasetėje, supakuota su įprastu silicio dioksidu. Kaip parodyta 3 paveiksle, du mėginio komponentai buvo išplauti iš kasetės vienas po kito. Toliau mėginio valymui buvo panaudota „Sax Flash“ kasetė. Kaip parodyta 4 paveiksle, rūgštus komponentas B buvo visiškai išlaikytas ant saksų kasetės. Neutralus komponentas A buvo palaipsniui išplaunamas iš kasetės su mobiliosios fazės eliuavimu.
3 paveikslas. Mėginio blykstės chromatograma ant įprastos normalios fazės kasetės.
4 paveikslas. Mėginio blykstės chromatograma ant saksų kasetės.
Palyginus 3 ir 4 paveikslus, komponentas A turi nenuoseklią dviejų skirtingų blykstės kasečių smailės formą. Norėdami patvirtinti, ar „Eleution Peak“ atitinka komponentą, galime naudoti visą bangos ilgio nuskaitymo funkciją, kuri yra įmontuota į „Sepabean ™“ mašinos valdymo programinę įrangą. Atidarykite dviejų atskyrimų eksperimentinius duomenis, tempkite į indikatoriaus liniją laiko ašyje (CV) chromatogramoje iki aukščiausio taško ir antrojo aukščiausio eliuavimo smailės taško, atitinkančio A komponentą A, ir visas šių dviejų taškų bangos ilgio spektras bus automatiškai parodytas po chromatograma (kaip parodyta 5 ir 6 paveiksle). Palyginus šių dviejų atskyrimų visų bangos ilgio spektro duomenis, komponentas A turi nuoseklų absorbcijos spektrą dviejuose eksperimentuose. Dėl komponento A komponento yra nenuoseklios didžiausios formos dviem skirtingais blykstės kasetėmis, spėliojama, kad komponente A yra specifinė priemaiša, kuri skirtingai sulaiko normalią fazės kasetę ir Sakso kasetę. Todėl šių dviejų blykstės kasečių komponentui A ir priemaišų seka skiriasi, todėl chromatogramų smailės forma nesuderinama.
5 paveikslas. Visas komponento A bangos ilgio spektras ir priemaiša, atskirta normalios fazės kasetė.
6 paveikslas. Visas komponento A ir priemaišų bangos ilgio spektras ir priemaiša, atskirta Sakso kasete.
Jei tikslinis produktas, kurį reikia surinkti, yra neutralus komponentas A, valymo užduotį galima lengvai atlikti tiesiogiai naudojant Sax kasetę eliuacijai po mėginio pakrovimo. Kita vertus, jei surinktas tikslinis produktas yra rūgštus komponentas B, fiksavimo atpalaidavimo būdas galėtų būti pritaikytas tik šiek tiek reguliuojant eksperimentinius etapus: Kai mėginys buvo pakrautas ant Sax kasetės, o neutralus komponentas A buvo visiškai išplautas normalios fazės organiniais solvikliais, mobiliojo telefono faze į metanolio tirpalą, kuriame yra 5% acterinės rūgšties. Acetato jonai mobiliojoje fazėje konkuruos su komponentu B dėl jungimosi su ketvirtinėmis amino jonų grupėmis stacionarioje Sax kasetės fazėje, taip ištraukiant komponentą B iš kasetės, kad gautumėte tikslinį produktą. Jonų mainų režime atskirtos mėginio chromatograma parodyta 7 paveiksle.
7 paveikslas. Komponento B blykstės chromatograma, išplaunama jonų mainų režimu ant saksų kasetės.
Apibendrinant galima pasakyti, kad rūgščią ar neutralų mėginį būtų galima greitai išgryninti saksų kasetėje kartu su normalia fazės kasetė, naudojant skirtingas valymo strategijas. Be to, padedant visiško bangos ilgio nuskaitymo funkcijai, įmontuotai „Sepabean ™“ aparato valdymo programinei įrangai, buvo galima lengvai palyginti ir patvirtinti, kad tyrėjams būtų galima lengvai palyginti ir taip pagerinti darbo efektyvumą, padedant tyrėjams greitai nustatyti išplėstinių frakcijų absorbcijos spektrą ir taip pagerinti darbo efektyvumą.
| Prekės numeris | Stulpelio dydis | Srauto greitis (ml/min) | MAX.PRESSURE (psi/bar) |
| SW-5001-004-IR | 5,9 g | 10-20 | 400/27,5 |
| SW-5001-012-IR | 23 g | 15-30 | 400/27,5 |
| SW-5001-025-IR | 38 g | 15-30 | 400/27,5 |
| SW-5001-040-IR | 55 g | 20–40 | 400/27,5 |
| SW-5001-080-IR | 122 g | 30–60 | 350/24.0 |
| SW-5001-120-IR | 180 g | 40–80 | 300/20,7 |
| SW-5001-220-IR | 340 g | 50–100 | 300/20,7 |
| SW-5001-330-IR | 475 g | 50–100 | 250/17.2
|
2 lentelė. „Sepaflash“ surištos serijos „Sax Flash“ kasetės. Pakavimo medžiagos: ypač nereguliarus saksų riešo silicio dioksidas, 40–63 μm, 60 Å.
Norėdami gauti daugiau informacijos apie išsamias „Sepabean ™“ specifikacijasMašina arba užsakymo informacija apie „Sepaflash“ serijos „Flash“ kasetes, apsilankykite mūsų svetainėje.
Pašto laikas: 2018-09-09