Rui Huangas, Bo Xu
Taikymo tyrimų ir plėtros centras
Įvadas
Peptidas yra junginys, sudarytas iš aminorūgščių, kurių kiekviena turi unikalių fizinių ir cheminių savybių dėl skirtingų aminorūgščių liekanų, sudarančių jo seką, tipų ir eilės.Tobulėjant kietosios fazės cheminei sintezei, įvairių aktyvių peptidų cheminė sintezė padarė didelę pažangą.Tačiau dėl sudėtingos kietosios fazės sintezės būdu gauto peptido sudėties galutinis produktas turi būti išgrynintas patikimais atskyrimo metodais.Dažniausiai naudojami peptidų gryninimo metodai apima jonų mainų chromatografiją (IEC) ir atvirkštinės fazės didelio efektyvumo skysčių chromatografiją (RP-HPLC), kurių trūkumai yra maža mėginio įkrovimo talpa, didelė atskyrimo terpės kaina, sudėtinga ir brangi atskyrimo įranga, tt Greitam mažų molekulių peptidų (MW < 1 kDa) gryninimui Santai Technologies anksčiau paskelbė sėkmingą taikymo atvejį, kuriame SepaFlash RP C18 kasetė buvo naudojama greitam timopentino (TP-5) ir buvo gautas reikalavimus atitinkantis tikslinis produktas.
1 pav. 20 įprastų aminorūgščių (atgaminta iš www.bachem.com).
Peptidų sudėtyje yra 20 rūšių aminorūgščių.Šios aminorūgštys gali būti suskirstytos į šias grupes pagal jų poliškumą ir rūgšties-šarmų savybę: nepolines (hidrofobines), polines (neįkrautas), rūgštines arba bazines (kaip parodyta 1 paveiksle).Jei peptidų sekoje aminorūgštys, sudarančios seką, dažniausiai yra polinės (kaip pažymėta rausva spalva 1 paveiksle), pvz., cisteinas, glutaminas, asparaginas, serinas, treoninas, tirozinas ir kt., šis peptidas gali turėti stiprią savybę. poliškumas ir gerai tirpsta vandenyje.Atliekant šių stiprių polinių peptidų mėginių gryninimo procedūrą atvirkštinės fazės chromatografija, įvyks reiškinys, vadinamas hidrofobinės fazės žlugimu (žr. anksčiau paskelbtą Santai Technologies programos pastabą: Hidrofobinės fazės žlugimas, AQ atvirkštinės fazės chromatografijos kolonėlės ir jų taikymas).Palyginti su įprastomis C18 kolonėlėmis, patobulintos C18AQ kolonėlės yra tinkamiausios stiprių polinių arba hidrofilinių mėginių valymui.Šiame pranešime kaip mėginys buvo panaudotas stiprus polinis peptidas ir išgrynintas C18AQ kolonėlė.Dėl to buvo gautas reikalavimus atitinkantis tikslinis produktas, kuris gali būti naudojamas tolesniems tyrimams ir plėtrai.
| Instrumentas | SepaBean™mašina 2 | |||
| Kasetės | 12 g SepaFlash C18 RP blykstės kasetė (sferinis silicio dioksidas, 20–45 μm, 100 Å, užsakymo numeris: SW-5222-012-SP) | 12 g SepaFlash C18AQ RP blykstės kasetė (sferinis silicio dioksidas, 20–45 μm, 100 Å, užsakymo numeris: SW-5222-012-SP(AQ)) | ||
| Bangos ilgis | 254 nm, 220 nm | 214 nm | ||
| Mobili fazė | A tirpiklis: vanduo Tirpiklis B: acetonitrilas | |||
| Srauto greitis | 15 ml/min | 20 ml/min | ||
| Mėginio įkėlimas | 30 mg | |||
| Gradientas | Laikas (CV) | B tirpiklis (%) | Laikas (min.) | B tirpiklis (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
Rezultatai ir DISKUSIJA
Norėdami palyginti polinio peptido mėginio gryninimo efektyvumą tarp įprastos C18 kolonėlės ir C18AQ kolonėlės, mes panaudojome įprastą C18 kolonėlę greitam mėginio gryninimui.Kaip parodyta 2 paveiksle, dėl didelio vandens santykio sukelto C18 grandinių hidrofobinės fazės žlugimo, mėginys vos išliko ant įprastos C18 kasetės ir buvo tiesiogiai išplautas judriosios fazės.Dėl to mėginys nebuvo veiksmingai atskirtas ir išvalytas.
2 pav. Mėginio greitoji chromatograma ant įprastos C18 kasetės.
Tada mes panaudojome C18AQ kolonėlę greitam mėginio gryninimui.Kaip parodyta 3 paveiksle, peptidas buvo veiksmingai išlaikomas kolonėlėje ir tada išplautas.Tikslinis produktas buvo atskirtas nuo priemaišų žaliaviniame mėginyje ir surinktas.Po liofilizavimo ir išanalizuoto HPLC, išgryninto produkto grynumas yra 98,2% ir gali būti toliau naudojamas kitame tyrimo ir plėtros etape.
3 pav. Mėginio greitoji chromatograma ant C18AQ kasetės.
Apibendrinant, SepaFlash C18AQ RP blykstės kasetė kartu su blykstės chromatografijos sistema SepaBean™aparatas galėtų pasiūlyti greitą ir veiksmingą sprendimą stiprių polinių ar hidrofilinių mėginių valymui.
Yra keletas SepaFlash C18AQ RP blykstės kasečių, kurių specifikacijos skiriasi nuo Santai Technology (kaip parodyta 2 lentelėje).
| Prekės numeris | Stulpelio dydis | Srauto greitis (ml/min.) | Maksimalus slėgis (psi/baras) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5,4 g | 5-15 | 400/27,5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 g | 10-25 | 400/27,5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 g | 10-25 | 400/27,5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 g | 15-30 | 400/27,5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 g | 25-50 | 350/24,0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20,7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20,7 |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 g | 40-80 | 250/17,2 |
2 lentelė. SepaFlash C18AQ RP blykstės kasetės.Pakavimo medžiagos: didelio efektyvumo sferinis C18(AQ) surištas silicio dioksidas, 20 - 45 μm, 100 Å.
Norėdami gauti daugiau informacijos apie išsamias SepaBean™ aparato specifikacijas arba SepaFlash serijos blykstės kasečių užsakymo informaciją, apsilankykite mūsų svetainėje.
Paskelbimo laikas: 2018-10-12