Rui Huang, Bo Xu
Taikymo tyrimų ir plėtros centras
Įvadas
Peptidas yra junginys, sudarytas iš aminorūgščių, kurių kiekviena turi unikalias fizines ir chemines savybes dėl skirtingų aminorūgščių liekanų tipų ir tvarkos, sudarančios jo seką. Vystydamasis kietos fazės cheminės sintezės, įvairių aktyvių peptidų cheminė sintezė padarė didelę pažangą. Tačiau dėl sudėtingos peptido sudėties, gauto kietos fazės sintezės metu, galutinį produktą reikia išgryninti patikimais atskyrimo metodais. Paprastai naudojami peptidų gryninimo metodai yra jonų mainų chromatografija (IEC) ir atvirkštinės fazės aukštos kokybės skysčių chromatografija (RP-HPLC), kurių mažos mėginių apkrovos talpos, didelės atskyrimo terpės, sudėtingos ir brangios atskyrimo įrangos ir kt. Trūkumai, kad būtų galima greitai valyti mažus molekulių peptidus (MW <1 kDA), prieš tai buvo sėkminga ir kt. Kuris „Sepaflash RP C18“ kasetė buvo panaudota greitam timopentino (TP-5) valymui, o tikslinio produkto, tenkinančio reikalavimus, tenkinimui.
1 paveikslas. 20 Bendrosios aminorūgštys (atkurtos iš www.bachem.com).
Yra 20 rūšių aminorūgščių, būdingų peptidų sudėčiai. Šios aminorūgštys gali būti suskirstytos į šias grupes pagal jų poliškumą ir rūgščių-bazės savybes: nepoolinį (hidrofobinį), polinį (neįkrautą), rūgštinę ar bazinę (kaip parodyta 1 paveiksle). Peptidų seka, jei seka sudaro amino rūgštis, dažniausiai yra polinės (kaip pažymėtos rausvos spalvos 1 paveiksle), tokios kaip cisteinas, glutaminas, šparaginas, serinas, treoninas, tirozinas ir kt., Tada šis peptidas gali turėti stiprų poliškumą ir būti labai tirpi vandenyje. Atliekant šių stiprių poliarinių peptidų mėginių valymo procedūrą, naudojant atvirkštinės fazės chromatografiją, įvyks fenomenas, vadinamas hidrofobinės fazės griūtimi (žr. Anksčiau paskelbtą „Santai Technologies“ programos pastabą: hidrofobinės fazės žlugimas, aq atvirkštinės fazės chromatografijos kolonėlės ir jų pritaikymas). Palyginti su įprastomis C18 kolonomis, patobulintos C18AQ kolonos yra tinkamiausios stipriems poliariniams ar hidrofiliniams mėginiams valyti. Šiame įraše buvo naudojamas stiprus poliarinis peptidas kaip mėginys ir išgrynintas C18AQ kolonėle. Dėl to buvo gauti tikslinio produkto, tenkinančio reikalavimus, buvo gauti ir gali būti naudojami atliekant šiuos tyrimus ir plėtrą.
| Instrumentas | Sepabean™2 mašina | |||
| Kasetės | 12 g „Sepaflash C18 RP“ blykstės kasetė (sferinis silicio dioksidas, 20–45 μm, 100 Å, užsakymas Nunber ： SW-5222-012-SP) | 12 g „Sepaflash C18AQ RP“ blykstės kasetė (sferinė silicio dioksidas, 20-45 μm, 100 Å, užsakymo numeris ： SW-5222-012-SP (AQ)) | ||
| Bangos ilgis | 254 nm, 220 nm | 214 nm | ||
| Mobilioji fazė | Tirpiklis A: vanduo Tirpiklis B: acetonitrilas | |||
| Srauto greitis | 15 ml/min | 20 ml/min | ||
| Mėginio pakrovimas | 30 mg | |||
| Gradientas | Laikas (CV) | Tirpiklis B (%) | Laikas (min) | Tirpiklis B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
Rezultatai ir diskusija
Norėdami palyginti polinio peptido mėginio gryninimo efektyvumą tarp įprasto C18 ir C18AQ stulpelio, mes panaudojome įprastą C18 stulpelį, skirtą bandinio blykstės gryninimui kaip pradžią. Kaip parodyta 2 paveiksle, dėl c18 grandinių hidrofobinės fazės griūties, kurią sukelia didelis vandeninis santykis, mėginys vos nebuvo išlaikytas įprastoje C18 kasetėje ir buvo tiesiogiai išplauta mobilioji fazė. Dėl to mėginys nebuvo veiksmingai atskirtas ir išgrynintas.
2 paveikslas. Mėginio blykstės chromatograma ant įprastos C18 kasetės.
Tada mėginio blykstės gryninimui panaudojome C18AQ stulpelį. Kaip parodyta 3 paveiksle, peptidas buvo veiksmingai išlaikytas kolonėlėje, o paskui išplauta. Tikslinis produktas buvo atskirtas nuo neapdoroto mėginio priemaišų ir surinktas. Po liofilizacijos ir tada išanalizuotas HPLC, išgryninto produkto grynumas yra 98,2% ir gali būti toliau naudojamas kito žingsnio tyrimams ir tobulėjimui.
3 paveikslas. Mėginio blykstės chromatograma ant C18AQ kasetės.
Apibendrinant galima pasakyti,™Mašina galėtų pasiūlyti greitą ir veiksmingą sprendimą išvalyti stiprius poliarinius ar hidrofilinius mėginius.
Yra daugybė „Sepaflash C18AQ RP“ blykstės kasečių, turinčių skirtingas „Santai“ technologijos specifikacijas (kaip parodyta 2 lentelėje).
| Prekės numeris | Stulpelio dydis | Srauto greitis (ml/min) | MAX.PRESSURE (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP (aq) | 5,4 g | 5-15 | 400/27,5 |
| SW-5222-012-SP (aq) | 20 g | 10-25 | 400/27,5 |
| SW-5222-025-SP (AQ) | 33 g | 10-25 | 400/27,5 |
| SW-5222-040-SP (AQ) | 48 g | 15-30 | 400/27,5 |
| SW-5222-080-SP (aq) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP (AQ) | 155 g | 30–60 | 300/20,7 |
| SW-5222-220-SP (AQ) | 300 g | 40–80 | 300/20,7 |
| SW-5222-330-SP (AQ) | 420 g | 40–80 | 250/17.2 |
2 lentelė. „Sepaflash C18aq RP“ blykstės kasetės. Pakavimo medžiagos: Didelio efektyvumo sferinė C18 (AQ) silicio dioksidas, 20-45 μm, 100 Å.
Norėdami gauti daugiau informacijos apie išsamias „Sepabean ™ Machine“ specifikacijas arba užsakymo informaciją apie „Sepaflash“ serijos „Flash“ kasetes, apsilankykite mūsų svetainėje.
Pašto laikas: 2018 m. Spalio 12 d