Rui Huang, Bo Xu
ສູນ R&D ຄໍາຮ້ອງສະຫມັກ
ແນະນຳ
ການແລກປ່ຽນ ion chromatography (IEC) ແມ່ນວິທີການ chromatographic ທີ່ໃຊ້ທົ່ວໄປເພື່ອແຍກແລະຊໍາລະທາດປະສົມທີ່ນໍາສະເຫນີໃນຮູບແບບ ionic ໃນການແກ້ໄຂ.ອີງຕາມການຮັບຜິດຊອບທີ່ແຕກຕ່າງກັນຂອງ ions ແລກປ່ຽນ, IEC ສາມາດແບ່ງອອກເປັນສອງປະເພດ, chromatography ແລກປ່ຽນ cation ແລະ chromatography ແລກປ່ຽນ anion.ໃນ cation exchange chromatography, ກຸ່ມອາຊິດຖືກຜູກມັດກັບຫນ້າດິນຂອງສື່ແຍກ.ສໍາລັບຕົວຢ່າງ, ອາຊິດຊູນຟູຣິກ (-SO3H) ແມ່ນກຸ່ມທີ່ໃຊ້ທົ່ວໄປໃນການແລກປ່ຽນ cation ທີ່ເຂັ້ມແຂງ (SCX), ເຊິ່ງ dissociates H + ແລະກຸ່ມທີ່ຖືກຄິດຄ່າທໍານຽມທາງລົບ -SO3- ດັ່ງນັ້ນຈຶ່ງສາມາດດູດຊຶມ cations ອື່ນໆໃນການແກ້ໄຂ.ໃນ chromatography ການແລກປ່ຽນ anion, ກຸ່ມທີ່ເປັນດ່າງຖືກຜູກມັດກັບຫນ້າດິນຂອງສື່ແຍກຕ່າງຫາກ.ສໍາລັບຕົວຢ່າງ, quaternary amine (-NR3OH, ບ່ອນທີ່ R ແມ່ນກຸ່ມ hydrocarbon) ປົກກະຕິແລ້ວຖືກນໍາໃຊ້ໃນການແລກປ່ຽນ anion ທີ່ເຂັ້ມແຂງ (SAX), ເຊິ່ງ dissociates OH- ແລະກຸ່ມທີ່ມີຄ່າບວກ -N + R3 ສາມາດ adsorb anions ອື່ນໆໃນການແກ້ໄຂ, ສົ່ງຜົນໃຫ້ anion. ຜົນກະທົບການແລກປ່ຽນ.
ໃນບັນດາຜະລິດຕະພັນທໍາມະຊາດ, flavonoids ໄດ້ດຶງດູດຄວາມສົນໃຈຂອງນັກຄົ້ນຄວ້າຍ້ອນບົດບາດຂອງເຂົາເຈົ້າໃນການປ້ອງກັນແລະການປິ່ນປົວພະຍາດ cardiovascular.ເນື່ອງຈາກໂມເລກຸນ flavonoid ເປັນກົດຍ້ອນມີກຸ່ມ phenolic hydroxyl, ການແລກປ່ຽນ ion chromatography ແມ່ນທາງເລືອກອື່ນນອກເຫນືອຈາກໄລຍະປົກກະຕິແບບທໍາມະດາຫຼື chromatography ໄລຍະປີ້ນກັບກັນສໍາລັບການແຍກແລະການເຮັດຄວາມສະອາດຂອງທາດປະສົມທີ່ເປັນກົດເຫຼົ່ານີ້.ໃນ flash chromatography, ສື່ແຍກທີ່ໃຊ້ທົ່ວໄປສໍາລັບການແລກປ່ຽນ ion ແມ່ນ silica gel matrix ບ່ອນທີ່ກຸ່ມແລກປ່ຽນ ion ຖືກຜູກມັດກັບຫນ້າດິນຂອງມັນ.ຮູບແບບການແລກປ່ຽນ ion ທີ່ໃຊ້ທົ່ວໄປທີ່ສຸດໃນ flash chromatography ແມ່ນ SCX (ປົກກະຕິແລ້ວກຸ່ມອາຊິດ sulfonic) ແລະ SAX (ປົກກະຕິແລ້ວກຸ່ມ amine quaternary).ໃນບັນທຶກຄໍາຮ້ອງສະຫມັກທີ່ຈັດພີມມາກ່ອນຫນ້ານີ້ທີ່ມີຫົວຂໍ້ "ການນໍາໃຊ້ຖັນ SepaFlash Strong Cation Exchange Chromatography ໃນການຊໍາລະທາດປະສົມທີ່ເປັນດ່າງ" ໂດຍ Santai Technologies, ຖັນ SCX ໄດ້ຖືກຈ້າງງານສໍາລັບການຊໍາລະຂອງທາດປະສົມທີ່ເປັນດ່າງ.ໃນບົດຂຽນນີ້, ການປະສົມຂອງມາດຕະຖານທີ່ເປັນກາງແລະອາຊິດໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ເປັນຕົວຢ່າງເພື່ອຄົ້ນຫາການນໍາໃຊ້ຖັນ SAX ໃນການເຮັດຄວາມສະອາດຂອງທາດປະສົມອາຊິດ.
ພາກສ່ວນທົດລອງ
ຮູບທີ 1. ແຜນວາດ schematic ຂອງໄລຍະ stationary ຜູກມັດກັບພື້ນຜິວຂອງສື່ແຍກ SAX.
ໃນບົດຂຽນນີ້, ຖັນ SAX ທີ່ຖືກບັນຈຸດ້ວຍ quaternary amine bonded silica ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ (ດັ່ງທີ່ສະແດງຢູ່ໃນຮູບ 1).ການປະສົມຂອງ Chromone ແລະອາຊິດ 2,4-dihydroxybenzoic ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ເປັນຕົວຢ່າງທີ່ຈະບໍລິສຸດ (ດັ່ງທີ່ສະແດງຢູ່ໃນຮູບ 2).ປະສົມໄດ້ຖືກລະລາຍໃນ methanol ແລະ loaded ໃສ່ cartridge flash ໂດຍ injector.ການຕັ້ງຄ່າທົດລອງຂອງການຊໍາລະລ້າງ flash ແມ່ນລະບຸໄວ້ໃນຕາຕະລາງ 1.
ຮູບທີ 2. ໂຄງສ້າງທາງເຄມີຂອງສອງອົງປະກອບໃນສ່ວນປະສົມຂອງຕົວຢ່າງ.
| ເຄື່ອງມື | SepaBean™ ເຄື່ອງ T | |||||
| ໄສ້ກອກ | 4 g SepaFlash Standard Series flash cartridge (ຊິລິກາບໍ່ສະຫມໍ່າສະເຫມີ, 40 - 63 μm, 60 Å, ຈໍານວນຄໍາສັ່ງ: S-5101-0004) | 4 g SepaFlash Bonded Series SAX flash cartridge (irregular silica, 40 - 63 μm, 60 Å, Order number: SW-5001-004-IR) | ||||
| ຄວາມຍາວຄື້ນ | 254 nm (ການກວດພົບ), 280 nm (ຕິດຕາມ) | |||||
| ໄລຍະມືຖື | ທາດລະລາຍ A: N-hexane | |||||
| ທາດລະລາຍ B: Ethyl acetate | ||||||
| ອັດຕາການໄຫຼ | 30 ມລ/ນາທີ | 20 ມລ/ນທ | ||||
| ການໂຫຼດຕົວຢ່າງ | 20 ມກ (ປະສົມຂອງອົງປະກອບ A ແລະອົງປະກອບ B) | |||||
| Gradient | ເວລາ (CV) | ທາດລະລາຍ B (%) | ເວລາ (CV) | ທາດລະລາຍ B (%) | ||
| 0 | 0 | 0 | 0 | |||
| 1.7 | 12 | 14 | 100 | |||
| 3.7 | 12 | / | / | |||
| 16 | 100 | / | / | |||
| 18 | 100 | / | / | |||
ຜົນໄດ້ຮັບແລະການສົນທະນາ
ປະການທໍາອິດ, ການປະສົມຕົວຢ່າງໄດ້ຖືກແຍກອອກໂດຍ cartridge ໄລຍະປົກກະຕິຂອງ flash packed ກ່ອນ packed ກັບ silica ປົກກະຕິ.ດັ່ງທີ່ສະແດງຢູ່ໃນຮູບທີ 3, ທັງສອງອົງປະກອບໃນຕົວຢ່າງໄດ້ຖືກຖອດອອກຈາກໄສ້ຕອງຫນຶ່ງຫຼັງຈາກທີ່ອື່ນ.ຕໍ່ໄປ, ໄສ້ຕອງແຟດ SAX ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ສໍາລັບການຊໍາລະລ້າງຕົວຢ່າງ.ດັ່ງທີ່ສະແດງຢູ່ໃນຮູບທີ 4, ອົງປະກອບຂອງອາຊິດ B ຖືກຮັກສາໄວ້ຢ່າງສົມບູນຢູ່ໃນຕະຫລັບຫມຶກ SAX.ອົງປະກອບທີ່ເປັນກາງ A ໄດ້ຖືກຖອດອອກເທື່ອລະກ້າວຈາກໄສ້ຕອງດ້ວຍ elution ຂອງໄລຍະມືຖື.
ຮູບທີ 3. ໂຄຣມາໂຕແກຣມແຟລດຂອງຕົວຢ່າງຢູ່ໃນຕະຫລັບຫມຶກໄລຍະປົກກະຕິ.
ຮູບທີ 4. ໂຄຣມາໂຕແກຣມແຟລດຂອງຕົວຢ່າງຢູ່ໃນຕະຫລັບຫມຶກ SAX.
ເມື່ອປຽບທຽບຮູບທີ 3 ແລະຮູບທີ 4, ອົງປະກອບ A ມີຮູບຮ່າງສູງສຸດທີ່ບໍ່ສອດຄ່ອງກັນຢູ່ໃນຕະຫລັບແຟລດສອງອັນ.ເພື່ອຢືນຢັນວ່າຈຸດສູງສຸດຂອງ elution ແມ່ນກົງກັນກັບອົງປະກອບ, ພວກເຮົາສາມາດໃຊ້ຄຸນສົມບັດການສະແກນຄວາມຍາວເຕັມທີ່ສ້າງຂຶ້ນໃນຊອບແວຄວບຄຸມຂອງເຄື່ອງຈັກ SepaBean™.ເປີດຂໍ້ມູນການທົດລອງຂອງທັງສອງແຍກ, ລາກໄປຫາເສັ້ນຕົວຊີ້ວັດຕາມແກນເວລາ (CV) ໃນ chromatogram ໄປຫາຈຸດສູງສຸດ ແລະຈຸດສູງສຸດທີສອງຂອງຈຸດສູງສຸດຂອງ elution ທີ່ສອດຄ້ອງກັບອົງປະກອບ A, ແລະຄື້ນຄວາມຍາວເຕັມຂອງທັງສອງອັນນີ້. ຈຸດຈະຖືກສະແດງໂດຍອັດຕະໂນມັດຢູ່ລຸ່ມໂຄຣມາໂຕແກຣມ (ດັ່ງທີ່ສະແດງໃນຮູບທີ 5 ແລະຮູບ 6).ເມື່ອປຽບທຽບຂໍ້ມູນ spectrum ຄວາມຍາວເຕັມຂອງສອງແຍກເຫຼົ່ານີ້, ອົງປະກອບ A ມີ spectrum ການດູດຊຶມທີ່ສອດຄ່ອງໃນສອງການທົດລອງ.ສໍາລັບເຫດຜົນຂອງອົງປະກອບ A ມີຮູບຮ່າງສູງສຸດທີ່ບໍ່ສອດຄ່ອງກັນໃນສອງໄສ້ຕອງ flash ທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ມັນຄາດວ່າມີຄວາມບໍ່ສະອາດສະເພາະໃນອົງປະກອບ A ທີ່ມີການເກັບຮັກສາທີ່ແຕກຕ່າງກັນກ່ຽວກັບ cartridge ໄລຍະປົກກະຕິແລະ cartridge SAX.ດັ່ງນັ້ນ, ລໍາດັບ eluting ແມ່ນແຕກຕ່າງກັນສໍາລັບອົງປະກອບ A ແລະຄວາມບໍ່ສະອາດຢູ່ໃນທັງສອງ flash cartridges, ສົ່ງຜົນໃຫ້ຮູບຮ່າງຂອງ chromatograms ບໍ່ສອດຄ່ອງກັນ.
ຮູບ 5. ຄື້ນຄວາມຖີ່ເຕັມຂອງອົງປະກອບ A ແລະ impurity ແຍກອອກໂດຍ cartridge ໄລຍະປົກກະຕິ.
ຮູບທີ່ 6. ຄື້ນຄວາມຖີ່ເຕັມຂອງອົງປະກອບ A ແລະຄວາມບໍ່ສະອາດທີ່ແຍກອອກໂດຍ SAX cartridge.
ຖ້າຜະລິດຕະພັນເປົ້າຫມາຍທີ່ຈະເກັບກໍາແມ່ນອົງປະກອບ A ທີ່ເປັນກາງ, ວຽກງານການຊໍາລະລ້າງສາມາດສໍາເລັດໄດ້ງ່າຍໂດຍການນໍາໃຊ້ໄສ້ຕອງ SAX ໂດຍກົງສໍາລັບການ elution ຫຼັງຈາກການໂຫຼດຕົວຢ່າງ.ໃນທາງກົງກັນຂ້າມ, ຖ້າຜະລິດຕະພັນເປົ້າຫມາຍທີ່ຈະເກັບກໍາແມ່ນອົງປະກອບຂອງອາຊິດ B, ລັກສະນະການປ່ອຍຕົວສາມາດຖືກຮັບຮອງເອົາດ້ວຍການປັບຕົວເລັກນ້ອຍໃນຂັ້ນຕອນການທົດລອງ: ເມື່ອຕົວຢ່າງຖືກໂຫລດໃສ່ຖັງ SAX ແລະອົງປະກອບທີ່ເປັນກາງ A. ໄດ້ຖືກ eluted ຫມົດອອກດ້ວຍ solvents ອິນຊີໄລຍະປົກກະຕິ, ປ່ຽນໄລຍະມືຖືເປັນການແກ້ໄຂ methanol ທີ່ມີ 5% ອາຊິດ acetic.acetate ions ໃນໄລຍະມືຖືຈະແຂ່ງຂັນກັບອົງປະກອບ B ສໍາລັບການຜູກມັດກັບກຸ່ມ amine quaternary ໃນໄລຍະ stationary ຂອງໄສ້ຕອງ SAX, ດັ່ງນັ້ນຈຶ່ງ eluting ອົງປະກອບ B ຈາກຕະຫລັບໄດ້ທີ່ຈະໄດ້ຜະລິດຕະພັນເປົ້າຫມາຍ.chromatogram ຂອງຕົວຢ່າງທີ່ແຍກອອກໃນຮູບແບບການແລກປ່ຽນ ion ໄດ້ສະແດງຢູ່ໃນຮູບ 7.
ຮູບທີ 7. ໂຄຣມາໂຕແກຣມແຟລດຂອງອົງປະກອບ B ໄດ້ຖືກຖອດອອກໃນໂໝດແລກປ່ຽນໄອອອນຢູ່ໃນຕະຫລັບຫມຶກ SAX.
ສະຫຼຸບແລ້ວ, ຕົວຢ່າງທີ່ເປັນອາຊິດຫຼືເປັນກາງສາມາດຖືກຊໍາລະລ້າງຢ່າງໄວວາໂດຍຕະຫລັບຫມຶກ SAX ປະສົມປະສານກັບໄສ້ຕອງໄລຍະປົກກະຕິໂດຍໃຊ້ກົນລະຍຸດການຊໍາລະທີ່ແຕກຕ່າງກັນ.ຍິ່ງໄປກວ່ານັ້ນ, ດ້ວຍການຊ່ວຍເຫຼືອຂອງລັກສະນະການສະແກນຄວາມຍາວເຕັມທີ່ສ້າງຂຶ້ນໃນຊໍແວຄວບຄຸມຂອງເຄື່ອງຈັກ SepaBean, ລັກສະນະການດູດຊຶມຂອງຊິ້ນສ່ວນ eluted ສາມາດປຽບທຽບແລະຢືນຢັນໄດ້ງ່າຍ, ຊ່ວຍໃຫ້ນັກຄົ້ນຄວ້າກໍານົດອົງປະກອບແລະຄວາມບໍລິສຸດຂອງຊິ້ນສ່ວນ eluted ຢ່າງໄວວາແລະປັບປຸງ. ປະສິດທິພາບການເຮັດວຽກ.
| ໝາຍເລກລາຍການ | ຂະໜາດຖັນ | ອັດຕາການໄຫຼ (ມລ/ນາທີ) | ຄວາມກົດດັນສູງສຸດ (psi/bar) |
| SW-5001-004-IR | 5.9 ກ | 10-20 | 400/27.5 |
| SW-5001-012-IR | 23 ກ | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5001-025-IR | 38 ກ | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5001-040-IR | 55 g | 20-40 | 400/27.5 |
| SW-5001-080-IR | 122 ກ | 30-60 | 350/24.0 |
| SW-5001-120-IR | 180 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5001-220-IR | 340 g | 50-100 | 300/20.7 |
| SW-5001-330-IR | 475 g | 50-100 | 250/17.2
|
ຕາຕະລາງ 2. SepaFlash Bonded Series SAX flash cartridges.ວັດສະດຸຫຸ້ມຫໍ່: Ultra-pure irregular SAX-bonded silica, 40 - 63 μm, 60 Å.
ສໍາລັບຂໍ້ມູນເພີ່ມເຕີມກ່ຽວກັບລາຍລະອຽດສະເພາະຂອງ SepaBean™ເຄື່ອງ, ຫຼືຂໍ້ມູນການສັ່ງຊື້ໃນ SepaFlash ຊຸດ flash cartridges, ກະລຸນາຢ້ຽມຊົມເວັບໄຊທ໌ຂອງພວກເຮົາ.
ເວລາປະກາດ: ວັນທີ 09-09-2018