Rui Huang, Bo Xu
ສູນ R&D ຄໍາຮ້ອງສະຫມັກ
ແນະນຳ
peptide ແມ່ນສານປະສົມທີ່ປະກອບດ້ວຍອາຊິດ amino, ແຕ່ລະຄົນມີຄຸນສົມບັດທາງກາຍະພາບແລະເຄມີທີ່ເປັນເອກະລັກເນື່ອງຈາກປະເພດທີ່ແຕກຕ່າງກັນແລະຄໍາສັ່ງຂອງ residue ອາຊິດ amino ປະກອບເປັນລໍາດັບຂອງມັນ.ດ້ວຍການພັດທະນາການສັງເຄາະສານເຄມີໄລຍະແຂງ, ການສັງເຄາະສານເຄມີຂອງ peptides ທີ່ມີການເຄື່ອນໄຫວຕ່າງໆໄດ້ມີຄວາມກ້າວຫນ້າຢ່າງຫຼວງຫຼາຍ.ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ເນື່ອງຈາກອົງປະກອບທີ່ສັບສົນຂອງ peptide ທີ່ໄດ້ຮັບໂດຍການສັງເຄາະໄລຍະແຂງ, ຜະລິດຕະພັນສຸດທ້າຍຄວນໄດ້ຮັບການຊໍາລະໂດຍວິທີການແຍກທີ່ເຊື່ອຖືໄດ້.ວິທີການເຮັດຄວາມສະອາດທີ່ໃຊ້ທົ່ວໄປສໍາລັບ peptides ປະກອບມີ ion exchange chromatography (IEC) ແລະ reversed-phase high performance liquid chromatography (RP-HPLC), ເຊິ່ງມີຂໍ້ເສຍຂອງຄວາມສາມາດໃນການໂຫຼດຕົວຢ່າງຕ່ໍາ, ຄ່າໃຊ້ຈ່າຍສູງຂອງສື່ແຍກຕ່າງຫາກ, ອຸປະກອນແຍກທີ່ສັບສົນແລະຄ່າໃຊ້ຈ່າຍ, ແລະອື່ນໆ. ສໍາລັບການຊໍາລະລ້າງຢ່າງໄວວາຂອງ peptides ໂມເລກຸນຂະຫນາດນ້ອຍ (MW < 1 kDa), ກໍລະນີຄໍາຮ້ອງສະຫມັກທີ່ປະສົບຜົນສໍາເລັດໄດ້ຖືກຈັດພີມມາກ່ອນຫນ້ານີ້ໂດຍ Santai Technologies, ໃນນັ້ນຫມຶກ SepaFlash RP C18 ຖືກນໍາໃຊ້ສໍາລັບການຊໍາລະລ້າງຢ່າງໄວວາຂອງ thymopentin (TP-5) ແລະ. ຜະລິດຕະພັນເປົ້າຫມາຍທີ່ຕອບສະຫນອງຄວາມຕ້ອງການແມ່ນໄດ້ຮັບ.
ຮູບ 1. 20 ອາຊິດ amino ທົ່ວໄປ (ຜະລິດຈາກ www.bachem.com).
ມີ 20 ຊະນິດຂອງອາຊິດ amino ທີ່ພົບເລື້ອຍໃນອົງປະກອບຂອງ peptides.ອາຊິດ amino ເຫຼົ່ານີ້ສາມາດແບ່ງອອກເປັນກຸ່ມດັ່ງຕໍ່ໄປນີ້ອີງຕາມການ polarity ແລະຄຸນສົມບັດອາຊິດຖານຂອງພວກມັນ: ບໍ່ຂົ້ວໂລກ (hydrophobic), polar (uncharged), ອາຊິດຫຼືພື້ນຖານ (ດັ່ງທີ່ສະແດງຢູ່ໃນຮູບ 1).ໃນລໍາດັບ peptide, ຖ້າອາຊິດ amino ທີ່ປະກອບເປັນລໍາດັບສ່ວນຫຼາຍແມ່ນຂົ້ວໂລກ (ຕາມຫມາຍເປັນສີບົວໃນຮູບ 1), ເຊັ່ນ Cysteine, Glutamine, Asparagine, Serine, Threonine, Tyrosine, ແລະອື່ນໆ, peptide ນີ້ອາດຈະແຂງແຮງ. polarity ແລະມີຄວາມລະລາຍສູງໃນນ້ໍາ.ໃນລະຫວ່າງຂັ້ນຕອນການຊໍາລະລ້າງສໍາລັບຕົວຢ່າງ peptide ຂົ້ວໂລກທີ່ເຂັ້ມແຂງເຫຼົ່ານີ້ໂດຍ reversed-phase chromatography, ປະກົດການທີ່ເອີ້ນວ່າການລົ່ມສະຫລາຍໄລຍະ hydrophobic ຈະເກີດຂື້ນ (ອ້າງອີງໃສ່ບັນທຶກຄໍາຮ້ອງສະຫມັກທີ່ຈັດພີມມາກ່ອນຫນ້ານີ້ໂດຍ Santai Technologies: Hydrophobic Phase Collapse, AQ Reversed Phase Chromatography Columns ແລະຄໍາຮ້ອງສະຫມັກຂອງພວກເຂົາ).ເມື່ອປຽບທຽບກັບຄໍລໍາ C18 ປົກກະຕິ, ຖັນ C18AQ ທີ່ໄດ້ຮັບການປັບປຸງແມ່ນເຫມາະສົມທີ່ສຸດສໍາລັບການຊໍາລະລ້າງຂອງຂົ້ວທີ່ເຂັ້ມແຂງຫຼືຕົວຢ່າງ hydrophilic.ໃນບົດຂຽນນີ້, peptide ຂົ້ວໂລກທີ່ເຂັ້ມແຂງໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ເປັນຕົວຢ່າງແລະເຮັດຄວາມສະອາດໂດຍຖັນ C18AQ.ດັ່ງນັ້ນ, ຜະລິດຕະພັນເປົ້າຫມາຍທີ່ຕອບສະຫນອງຄວາມຕ້ອງການໄດ້ຮັບແລະສາມາດນໍາໃຊ້ໃນການຄົ້ນຄວ້າແລະການພັດທະນາຕໍ່ໄປນີ້.
| ເຄື່ອງມື | ເຊໂປນ™ເຄື່ອງ 2 | |||
| ໄສ້ກອກ | 12 g SepaFlash C18 RP flash cartridge (ຊິລິກາ spherical, 20 - 45 μm, 100 Å, Order nunber：SW-5222-012-SP) | 12 g SepaFlash C18AQ RP flash cartridge (ຊິລິກາ spherical, 20 - 45 μm, 100 Å, ຈໍານວນຄໍາສັ່ງ: SW-5222-012-SP(AQ)) | ||
| ຄວາມຍາວຄື້ນ | 254 nm, 220 nm | 214 nm | ||
| ໄລຍະມືຖື | ທາດລະລາຍ A: ນ້ຳ ທາດລະລາຍ B: Acetonitrile | |||
| ອັດຕາການໄຫຼ | 15 ມລ/ນທ | 20 ມລ/ນທ | ||
| ການໂຫຼດຕົວຢ່າງ | 30 ມກ | |||
| Gradient | ເວລາ (CV) | ທາດລະລາຍ B (%) | ເວລາ (ນາທີ) | ທາດລະລາຍ B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
ຜົນໄດ້ຮັບແລະການສົນທະນາ
ເພື່ອປຽບທຽບການປະຕິບັດການເຮັດຄວາມສະອາດສໍາລັບຕົວຢ່າງ polar peptide ລະຫວ່າງຄໍລໍາ C18 ແລະຄໍລໍາ C18AQ ປົກກະຕິ, ພວກເຮົາໄດ້ນໍາໃຊ້ຄໍລໍາ C18 ປົກກະຕິສໍາລັບການທໍາຄວາມສະອາດ flash ຂອງຕົວຢ່າງເປັນການເລີ່ມຕົ້ນ.ດັ່ງທີ່ສະແດງຢູ່ໃນຮູບທີ 2, ເນື່ອງຈາກການຍຸບຕົວຂອງລະບົບໄຮໂດຼລິກຂອງຕ່ອງໂສ້ C18 ທີ່ເກີດຈາກອັດຕາສ່ວນນ້ໍາສູງ, ຕົວຢ່າງໄດ້ຖືກເກັບຮັກສາໄວ້ເປົ່າຢູ່ໃນຕະຫລັບຫມຶກ C18 ປົກກະຕິແລະຖືກ eluted ໂດຍກົງໂດຍໄລຍະມືຖື.ດັ່ງນັ້ນ, ຕົວຢ່າງບໍ່ໄດ້ຖືກແຍກອອກຢ່າງມີປະສິດທິພາບແລະບໍລິສຸດ.
ຮູບທີ 2. ໂຄຣມາໂຕແກຣມແຟລດຂອງຕົວຢ່າງຢູ່ໃນຕະຫລັບຫມຶກ C18 ປົກກະຕິ.
ຕໍ່ໄປ, ພວກເຮົາໃຊ້ຄໍລໍາ C18AQ ສໍາລັບການເຮັດຄວາມສະອາດແຟດຂອງຕົວຢ່າງ.ດັ່ງທີ່ສະແດງຢູ່ໃນຮູບທີ 3, peptide ໄດ້ຖືກເກັບຮັກສາໄວ້ຢ່າງມີປະສິດຕິຜົນຢູ່ໃນຖັນແລະຫຼັງຈາກນັ້ນຖືກຖອດອອກ.ຜະລິດຕະພັນເປົ້າຫມາຍໄດ້ຖືກແຍກອອກຈາກ impurities ໃນຕົວຢ່າງດິບແລະເກັບກໍາ.ຫຼັງຈາກ lyophilization ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນການວິເຄາະໂດຍ HPLC, ຜະລິດຕະພັນທີ່ບໍລິສຸດມີຄວາມບໍລິສຸດ 98.2% ແລະສາມາດຖືກນໍາໃຊ້ຕື່ມອີກສໍາລັບການຄົ້ນຄວ້າແລະການພັດທະນາຂັ້ນຕອນຕໍ່ໄປ.
ຮູບທີ 3. ໂຄຣມາໂຕແກຣມແຟລດຂອງຕົວຢ່າງຢູ່ໃນຕະຫລັບຫມຶກ C18AQ.
ສະຫຼຸບແລ້ວ, SepaFlash C18AQ RP flash cartridge ສົມທົບກັບລະບົບ flash chromatography SepaBean™ເຄື່ອງສາມາດສະຫນອງການແກ້ໄຂໄວແລະປະສິດທິພາບສໍາລັບການຊໍາລະລ້າງຂອງ polar ທີ່ເຂັ້ມແຂງຫຼືຕົວຢ່າງ hydrophilic.
ມີຊຸດຂອງໄສ້ຕອງ flash SepaFlash C18AQ RP ທີ່ມີສະເປັກທີ່ແຕກຕ່າງຈາກ Santai Technology (ດັ່ງທີ່ສະແດງຢູ່ໃນຕາຕະລາງ 2).
| ໝາຍເລກລາຍການ | ຂະໜາດຖັນ | ອັດຕາການໄຫຼ (ມລ/ນາທີ) | ຄວາມກົດດັນສູງສຸດ (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5.4 ກ | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 ກ | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 ກ | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
ຕາຕະລາງ 2. SepaFlash C18AQ RP flash cartridges.ວັດສະດຸຫຸ້ມຫໍ່: ຊິລິກາປະທັບຕາ C18(AQ) spherical ປະສິດທິພາບສູງ, 20 - 45 μm, 100 Å.
ສໍາລັບຂໍ້ມູນເພີ່ມເຕີມກ່ຽວກັບການລະອຽດລະອຽດຂອງເຄື່ອງ SepaBean ™, ຫຼືຂໍ້ມູນການສັ່ງຊື້ໃນ SepaFlash ຊຸດ flash cartridges, ກະລຸນາໄປຢ້ຽມຢາມເວັບໄຊທ໌ຂອງພວກເຮົາ.
ເວລາປະກາດ: ຕຸລາ-12-2018