Hongcheng Wang, Bo Xu
ສູນ R&D ຄໍາຮ້ອງສະຫມັກ
ແນະນຳ
ອີງຕາມການ polarities ທີ່ກ່ຽວຂ້ອງຂອງໄລຍະ stationary ແລະໄລຍະມືຖື, chromatography ແຫຼວສາມາດແບ່ງອອກເປັນ chromatography ໄລຍະປົກກະຕິ (NPC) ແລະໄລຍະ reversed chromatography (RPC).ສໍາລັບ RPC, polarity ຂອງໄລຍະມືຖືແມ່ນເຂັ້ມແຂງກວ່າໄລຍະ stationary.RPC ໄດ້ກາຍເປັນຫນຶ່ງໃນການນໍາໃຊ້ຢ່າງກວ້າງຂວາງທີ່ສຸດໃນຮູບແບບການແຍກ chromatography ຂອງແຫຼວເນື່ອງຈາກປະສິດທິພາບສູງ, ຄວາມລະອຽດທີ່ດີແລະກົນໄກການເກັບຮັກສາທີ່ຊັດເຈນ.ດັ່ງນັ້ນ RPC ແມ່ນເຫມາະສົມສໍາລັບການແຍກແລະການຊໍາລະຂອງສານປະກອບຂົ້ວໂລກຕ່າງໆຫຼືບໍ່ມີຂົ້ວ, ລວມທັງ alkaloids, ຄາໂບໄຮເດດ, ອາຊິດໄຂມັນ, steroids, ອາຊິດ nucleic, ອາຊິດ amino, peptides, ທາດໂປຼຕີນ, ແລະອື່ນໆໃນ RPC, ໄລຍະ stationary ທີ່ໃຊ້ຫຼາຍທີ່ສຸດແມ່ນ. ມາຕຣິກເບື້ອງ silica gel ທີ່ຜູກມັດກັບກຸ່ມທີ່ມີປະໂຫຍດຕ່າງໆ, ລວມທັງ C18, C8, C4, phenyl, cyano, amino, ແລະອື່ນໆ.ມັນໄດ້ຖືກຄາດຄະເນວ່າຫຼາຍກວ່າ 80% ຂອງ RPC ໃນປັດຈຸບັນແມ່ນໃຊ້ C18 ໄລຍະຜູກມັດ.ດັ່ງນັ້ນຖັນ C18 chromatography ໄດ້ກາຍເປັນຄໍລໍາທົ່ວໄປທີ່ຕ້ອງມີສໍາລັບທຸກໆຫ້ອງທົດລອງ.
ເຖິງແມ່ນວ່າຖັນ C18 ສາມາດຖືກນໍາໃຊ້ໃນຂອບເຂດທີ່ກວ້າງຂວາງຂອງຄໍາຮ້ອງສະຫມັກ, ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ສໍາລັບບາງຕົວຢ່າງທີ່ມີຂົ້ວຫຼາຍຫຼື hydrophilic ສູງ, ຄໍລໍາ C18 ປົກກະຕິອາດຈະມີບັນຫາໃນເວລາທີ່ຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອຊໍາລະຕົວຢ່າງດັ່ງກ່າວ.ໃນ RPC, ສານລະລາຍ elution ທີ່ໃຊ້ທົ່ວໄປສາມາດສັ່ງໄດ້ຕາມຂົ້ວຂອງພວກມັນ: ນ້ໍາ < methanol < acetonitrile < ethanol < tetrahydrofuran < isopropanol.ເພື່ອຮັບປະກັນການເກັບຮັກສາທີ່ດີຢູ່ໃນຖັນສໍາລັບຕົວຢ່າງເຫຼົ່ານີ້ (ຂົ້ວໂລກທີ່ເຂັ້ມແຂງຫຼື hydrophilic ສູງ), ອັດຕາສ່ວນສູງຂອງລະບົບນ້ໍາແມ່ນມີຄວາມຈໍາເປັນທີ່ຈະຖືກນໍາໃຊ້ເປັນໄລຍະມືຖື.ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ເມື່ອນໍາໃຊ້ລະບົບນ້ໍາບໍລິສຸດ (ລວມທັງນ້ໍາບໍລິສຸດຫຼືການແກ້ໄຂເກືອບໍລິສຸດ) ເປັນໄລຍະມືຖື, ລະບົບຕ່ອງໂສ້ຄາບອນຍາວຢູ່ໃນໄລຍະ stationary ຂອງຖັນ C18 ມັກຈະຫລີກລ້ຽງນ້ໍາແລະປະສົມກັບກັນແລະກັນ, ເຮັດໃຫ້ເກີດການຫຼຸດລົງໃນທັນທີ. ຄວາມອາດສາມາດເກັບຮັກສາຂອງຖັນຫຼືແມ້ກະທັ້ງບໍ່ມີການເກັບຮັກສາ.ປະກົດການນີ້ເອີ້ນວ່າ "ການລົ້ມລະລາຍໄລຍະ hydrophobic" (ດັ່ງທີ່ສະແດງຢູ່ໃນສ່ວນຊ້າຍຂອງຮູບທີ 1).ເຖິງແມ່ນວ່າສະຖານະການນີ້ແມ່ນປີ້ນກັບກັນໄດ້ເມື່ອຖັນຖືກລ້າງດ້ວຍສານລະລາຍອິນຊີເຊັ່ນ methanol ຫຼື acetonitrile, ມັນຍັງສາມາດເຮັດໃຫ້ເກີດຄວາມເສຍຫາຍຕໍ່ຖັນ.ດັ່ງນັ້ນ, ມັນເປັນສິ່ງຈໍາເປັນເພື່ອປ້ອງກັນບໍ່ໃຫ້ສະຖານະການນີ້ເກີດຂຶ້ນ.
ຮູບ 1. ແຜນວາດ schematic ຂອງໄລຍະຜູກມັດຢູ່ດ້ານຂອງ silica gel ໃນຄໍລໍາ C18 ປົກກະຕິ (ຊ້າຍ) ແລະຖັນ C18AQ (ຂວາ).
ເພື່ອແກ້ໄຂບັນຫາທີ່ກ່າວມາຂ້າງເທິງ, ຜູ້ຜະລິດວັດສະດຸຫຸ້ມຫໍ່ chromatographic ໄດ້ປັບປຸງດ້ານວິຊາການ.ຫນຶ່ງໃນການປັບປຸງເຫຼົ່ານີ້ແມ່ນເຮັດໃຫ້ການດັດແກ້ບາງຢ່າງກ່ຽວກັບຫນ້າດິນຂອງ silica matrix, ເຊັ່ນ: ການແນະນໍາຂອງກຸ່ມ cyano hydrophilic (ດັ່ງທີ່ສະແດງຢູ່ໃນສ່ວນທີ່ຖືກຕ້ອງຂອງຮູບ 1), ເພື່ອເຮັດໃຫ້ຫນ້າດິນຂອງ silica gel ໄດ້ hydrophilic ຫຼາຍ.ດັ່ງນັ້ນລະບົບຕ່ອງໂສ້ C18 ຢູ່ເທິງພື້ນຜິວ silica ສາມາດຂະຫຍາຍອອກໄດ້ຢ່າງເຕັມສ່ວນພາຍໃຕ້ສະພາບທີ່ມີນ້ໍາທີ່ມີນ້ໍາສູງແລະການລົ້ມລົງຂອງໄລຍະ hydrophobic ສາມາດຫຼີກເວັ້ນໄດ້.ຖັນ C18 ທີ່ຖືກດັດແປງເຫຼົ່ານີ້ເອີ້ນວ່າຖັນ C18 aqueous, ຄືຖັນ C18AQ, ເຊິ່ງຖືກອອກແບບມາສໍາລັບເງື່ອນໄຂທີ່ມີນ້ໍາທີ່ມີນ້ໍາສູງແລະສາມາດທົນທານຕໍ່ລະບົບນ້ໍາ 100%.ຖັນ C18AQ ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ຢ່າງກວ້າງຂວາງໃນການແຍກແລະການເຮັດຄວາມສະອາດຂອງທາດປະສົມຂົ້ວໂລກທີ່ເຂັ້ມແຂງ, ລວມທັງອາຊິດອິນຊີ, peptides, nucleosides ແລະວິຕາມິນທີ່ລະລາຍໃນນ້ໍາ.
Desalting ແມ່ນຫນຶ່ງໃນການນໍາໃຊ້ປົກກະຕິຂອງຄໍລໍາ C18AQ ໃນ flash purification ສໍາລັບຕົວຢ່າງ, ເຊິ່ງເອົາອົງປະກອບຂອງເກືອຫຼື buffer ໃນຕົວລະລາຍຕົວຢ່າງເພື່ອຄວາມສະດວກໃນການນໍາໃຊ້ຕົວຢ່າງໃນການສຶກສາຕໍ່ໄປ.ໃນບົດຂຽນນີ້, Brilliant Blue FCF ທີ່ມີຂົ້ວທີ່ເຂັ້ມແຂງໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ເປັນຕົວຢ່າງແລະບໍລິສຸດໃນຖັນ C18AQ.ຕົວລະລາຍຕົວຢ່າງຖືກແທນທີ່ດ້ວຍສານລະລາຍອິນຊີຈາກສານກັນບູດ, ດັ່ງນັ້ນຈຶ່ງອໍານວຍຄວາມສະດວກໃນການລະເຫີຍຂອງ rotary ດັ່ງຕໍ່ໄປນີ້ເຊັ່ນດຽວກັນກັບການປະຫຍັດຕົວລະລາຍແລະເວລາປະຕິບັດງານ.ນອກຈາກນັ້ນ, ຄວາມບໍລິສຸດຂອງຕົວຢ່າງໄດ້ຖືກປັບປຸງໂດຍການກໍາຈັດຄວາມບໍ່ສະອາດໃນຕົວຢ່າງ.
ພາກສ່ວນທົດລອງ
ຮູບທີ 2. ໂຄງສ້າງທາງເຄມີຂອງຕົວຢ່າງ.
The Brilliant Blue FCF ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ເປັນຕົວຢ່າງໃນການຕອບນີ້.ຄວາມບໍລິສຸດຂອງຕົວຢ່າງດິບແມ່ນ 86% ແລະໂຄງສ້າງທາງເຄມີຂອງຕົວຢ່າງໄດ້ສະແດງຢູ່ໃນຮູບ 2. ເພື່ອກະກຽມການແກ້ໄຂຕົວຢ່າງ, ຝຸ່ນ crude 300 mg ຂອງ Brilliant Blue FCF ໄດ້ຖືກລະລາຍໃນ 1 M NaH2PO4 buffer solution ແລະສັ່ນສະເທືອນດີທີ່ຈະກາຍເປັນ ເປັນການແກ້ໄຂທີ່ຈະແຈ້ງຢ່າງສົມບູນ.ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ການແກ້ໄຂຕົວຢ່າງໄດ້ຖືກສີດເຂົ້າໄປໃນຖັນ flash ໂດຍ injector.ການຕັ້ງຄ່າທົດລອງຂອງການຊໍາລະລ້າງ flash ແມ່ນລະບຸໄວ້ໃນຕາຕະລາງ 1.
| ເຄື່ອງມື | ເຄື່ອງ SepaBean™2 | |||
| ໄສ້ກອກ | 12 g SepaFlash C18 RP flash cartridge (ຊິລິກາ spherical, 20 - 45 μm, 100 Å, ຈໍານວນຄໍາສັ່ງ: SW-5222-012-SP) | 12 g SepaFlash C18AQ RP flash cartridge (ຊິລິກາ spherical, 20 - 45 μm, 100 Å, ຈໍານວນຄໍາສັ່ງ: SW-5222-012-SP(AQ)) | ||
| ຄວາມຍາວຄື້ນ | 254 nm | |||
| ໄລຍະມືຖື | ທາດລະລາຍ A: ນ້ຳ ທາດລະລາຍ B: Methanol | |||
| ອັດຕາການໄຫຼ | 30 ມລ/ນາທີ | |||
| ການໂຫຼດຕົວຢ່າງ | 300 ມກ (Brilliant Blue FCF ທີ່ມີຄວາມບໍລິສຸດ 86%) | |||
| Gradient | ເວລາ (CV) | ທາດລະລາຍ B (%) | ເວລາ (CV) | ທາດລະລາຍ B (%) |
| 0 | 10 | 0 | 0 | |
| 10 | 10 | 10 | 0 | |
| 10.1 | 100 | 10.1 | 100 | |
| 17.5 | 100 | 17.5 | 100 | |
| 17.6 | 10 | 17.6 | 0 | |
| 22.6 | 10 | 22.6 | 0 | |
ຜົນໄດ້ຮັບແລະການສົນທະນາ
A SepaFlash C18AQ RP flash cartridge ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ສໍາລັບການລ້າງຕົວຢ່າງແລະການຊໍາລະລ້າງ.ຂັ້ນຕອນ gradient ຖືກນໍາໃຊ້ໃນທີ່ນ້ໍາບໍລິສຸດຖືກນໍາໃຊ້ເປັນໄລຍະມືຖືໃນຕອນເລີ່ມຕົ້ນຂອງ elution ແລະດໍາເນີນການສໍາລັບ 10 ປະລິມານຖັນ (CV).ດັ່ງທີ່ສະແດງຢູ່ໃນຮູບທີ 3, ເມື່ອນໍາໃຊ້ນ້ໍາບໍລິສຸດເປັນໄລຍະມືຖື, ຕົວຢ່າງໄດ້ຖືກເກັບຮັກສາໄວ້ຢ່າງສົມບູນໃນໄສ້ຕອງ flash.ຕໍ່ໄປ, methanol ໃນໄລຍະມືຖືໄດ້ຖືກເພີ່ມຂຶ້ນໂດຍກົງເຖິງ 100% ແລະ gradient ໄດ້ຖືກຮັກສາໄວ້ສໍາລັບ 7.5 CV.ຕົວຢ່າງໄດ້ຖືກຍົກອອກມາຈາກ 11.5 ຫາ 13.5 CV.ໃນຊິ້ນສ່ວນທີ່ເກັບກໍາ, ການແກ້ໄຂຕົວຢ່າງໄດ້ຖືກທົດແທນຈາກການແກ້ໄຂ buffer NaH2PO4 ກັບ methanol.ເມື່ອປຽບທຽບກັບການແກ້ໄຂທີ່ມີນ້ໍາສູງ, methanol ແມ່ນງ່າຍຂຶ້ນຫຼາຍທີ່ຈະເອົາອອກໂດຍການລະເຫີຍຂອງ rotary ໃນຂັ້ນຕອນຕໍ່ໄປ, ເຊິ່ງເຮັດໃຫ້ການຄົ້ນຄວ້າດັ່ງຕໍ່ໄປນີ້.
ຮູບທີ 3. ໂຄຣມາໂຕແກຣມແຟລດຂອງຕົວຢ່າງຢູ່ໃນຕະຫລັບຫມຶກ C18AQ.
ເພື່ອປຽບທຽບພຶດຕິກໍາການເກັບຮັກສາຂອງຕະຫລັບຫມຶກ C18AQ ແລະຕະຫລັບ C18 ປົກກະຕິສໍາລັບຕົວຢ່າງຂອງຂົ້ວທີ່ເຂັ້ມແຂງ, ການທົດສອບການປຽບທຽບຂະຫນານໄດ້ຖືກປະຕິບັດ.A SepaFlash C18 RP flash cartridge ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ແລະ flash chromatogram ສໍາລັບຕົວຢ່າງໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນໃນຮູບ 4. ສໍາລັບຕະຫລັບຫມຶກ C18 ປົກກະຕິ, ອັດຕາສ່ວນໄລຍະ aqueous ທົນທານສູງສຸດແມ່ນປະມານ 90%.ເພາະສະນັ້ນ, gradient ເລີ່ມຕົ້ນໄດ້ຖືກຕັ້ງໄວ້ທີ່ 10% methanol ໃນນ້ໍາ 90%.ດັ່ງທີ່ສະແດງຢູ່ໃນຮູບທີ 4, ເນື່ອງຈາກການຍຸບຕົວຂອງລະບົບຕ່ອງໂສ້ C18 ທີ່ເກີດຈາກອັດຕາສ່ວນນ້ໍາສູງ, ຕົວຢ່າງໄດ້ຖືກເກັບຮັກສາໄວ້ເປົ່າຢູ່ໃນຕະຫລັບຫມຶກ C18 ປົກກະຕິແລະຖືກ eluted ໂດຍກົງໂດຍໄລຍະມືຖື.ດັ່ງນັ້ນ, ການດໍາເນີນງານຂອງຕົວຢ່າງ desolting ຫຼື purification ບໍ່ສາມາດສໍາເລັດ.
ຮູບທີ 4. ໂຄຣມາໂຕແກຣມແຟລດຂອງຕົວຢ່າງຢູ່ໃນຕະຫລັບຫມຶກ C18 ປົກກະຕິ.
ເມື່ອປຽບທຽບກັບ gradient ເສັ້ນ, ການໃຊ້ gradient ຂັ້ນຕອນມີຂໍ້ດີດັ່ງຕໍ່ໄປນີ້:
1. ການນໍາໃຊ້ຕົວລະລາຍແລະເວລາແລ່ນສໍາລັບການຊໍາລະຕົວຢ່າງແມ່ນຫຼຸດລົງ.
2. ຜະລິດຕະພັນເປົ້າຫມາຍ elutes ໃນຈຸດສູງສຸດແຫຼມ, ເຊິ່ງຫຼຸດຜ່ອນປະລິມານຂອງແຕ່ສ່ວນຫນຶ່ງທີ່ເກັບກໍາແລະດັ່ງນັ້ນຈຶ່ງອໍານວຍຄວາມສະດວກ rotary evaporation ດັ່ງຕໍ່ໄປນີ້ເຊັ່ນດຽວກັນກັບປະຫຍັດເວລາ.
3. ຜະລິດຕະພັນທີ່ເກັບກໍາຢູ່ໃນ methanol ງ່າຍທີ່ຈະ evaporated, ດັ່ງນັ້ນເວລາແຫ້ງແລ້ງແມ່ນຫຼຸດລົງ.
ສະຫລຸບລວມແລ້ວ, ສໍາລັບການຊໍາລະລ້າງຕົວຢ່າງທີ່ເປັນຂົ້ວໂລກຫຼືນ້ໍາສູງ, SepaFlash C18AQ RP flash cartridges ສົມທົບກັບລະບົບ flash chromatography ກະກຽມ SepaBean ™ເຄື່ອງສາມາດສະຫນອງການແກ້ໄຂໄວແລະປະສິດທິພາບ.
ກ່ຽວກັບໄສ້ຕອງ SepaFlash Bonded Series C18 RP flash
ມີຊຸດຂອງໄສ້ຕອງ flash SepaFlash C18AQ RP ທີ່ມີສະເປັກທີ່ແຕກຕ່າງຈາກ Santai Technology (ດັ່ງທີ່ສະແດງຢູ່ໃນຕາຕະລາງ 2).
| ໝາຍເລກລາຍການ | ຂະໜາດຖັນ | ອັດຕາການໄຫຼ (ມລ/ນາທີ) | ຄວາມກົດດັນສູງສຸດ (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5.4 ກ | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 ກ | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 ກ | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
ຕາຕະລາງ 2. SepaFlash C18AQ RP flash cartridges.
ວັດສະດຸຫຸ້ມຫໍ່: ຊິລິກາປະທັບຕາ C18(AQ) spherical ປະສິດທິພາບສູງ, 20 - 45 μm, 100 Å.
logy (ດັ່ງທີ່ສະແດງຢູ່ໃນຕາຕະລາງ 2).
ເວລາປະກາດ: 27-8-2018