Neiegkeeten Banner

Neiegkeeten

D'Applikatioun vun der c18Aq Sailen an der Rengheet vu staarke Polar Peptide

D'Applikatioun vun der c18Aq Sailen an der Rengheet vu staarke Polar Peptide

Rui Huang, BO XU
Applikatioun R & D Zentrum

Aféierung
E Pitzid ass e Concours dat vun Amins a Akafscience besteet, déi all Zort kierperlecher a chokesch Eisen ausgemaach huet duerch déi verschidden Zorte maachen. Wann Dir de bedarsste chemikgescheschresten, déi chemikalent Synthes vun verschiddene aktive Peefeges vu verschiddene aktiven Pittal gemaach huet. Fordeeg iwwert d'komplizéiert Kompetatiounsform vun deneptéierten Terrain, duerchsoléiert Chase Symhaten, fuert, déi vun zouverléissege Sänger mat der Verleedung. Déi heefeg benotzt Priedungsmethoden fir Péngbezuelung vun der klenger Molberghraphde pepides (MW <RACE PHASSED CHROMAMOMAMAMAMABLED, wat fir eng Noutluedmbedingung ass, déi den Noutbelaaschtungsrüstung benotzt ginn, aswuel asw. Technologien, an där e Trennlahlash RP C18 Patroun fir déi schnell Péngung vum Thymopentin benotzt gouf (TP-5) an d'Zilprodukt, déi d'Ufuerderunge kritt goufen.

Figur 1. 20 gemeinsam Aminosaieren (reproduzéiert vu www.bachem.com).

Et ginn 20 Argängen vun Am Mainocier déi gemeinsam an der Zesummepasst vun pittellt sinn. Dës Aminosäure kënne sech an déi folgend Gruppe ginn, no hirer Polizder an der Sécatilitéitsausgesot: Net-Polar (hydrophob), Polar (onkorgéiert). An engem peepideklezenz, wann d'Ininosaieren d'Sequenzen aussträicht sinn haaptsächlech polaren (wéi gepostte Faarf an der Figur 1), wéi Cystomin, asligatorlech, asignesch, asparat. D'Ponnieurung Awunner fir hunn déi strategesch Technoits: häerzhkt eng Täsch Zesummesetzung, AQ Kolmagopie mam Colomets, genannt Ashas Choûture gesat. Am Verglach mat der reegelméisser C18 SRAMEN, déi verbessert C18AQ Sailen sinn am meeschte gëeegent fir d'Péngpolung oder hydrophils. An dësem Post, e staarke Polar Peptide gouf als Probe benotzt a mat enger c18Aq Kolonn geruff. Als Resultat ass d'Zilprodukt den Optraghueler ze gewannen a konnt mat an den folgenden Fuerschung an Entwécklung benotzt ginn.

Experimentell Sektioun
De Probe gouf am Experiment benotzt war e synthetesche Peopid, dee frëndlech vun engem Client Laboratoire gouf. Deeptide war ongeféier 1 kda a mw an huet staark Polaritéit wéinst multiple Polaranäidingsbiller an hirer Sequenz. D'Rengheet vum Rat Probe ass ongeféier 80%. Fir d'Probe Léisung ze preparéieren, 60 MG Wäiss Pulverkranker gouf opgeléist a 5 ml Pure Waasser an da gëtt et eng komplett kloer Léisung ze kréien. Déi Probe Léisung gouf an der Flash Kolonn vun engem Injektor injizéiert. Den experimentellen Setup vun der Flash Purification ass an der Tabell 1 opgezielt.

Instrument

SVKEKTANMaschinn 2

Koperriden

12 G Seplen C18 RP Flash Carthorge (Kugel Silica, 20 - 45 μM, 100 Å, d'Uerdnung Nunber: Sw-5012-012 -01

12 Gplangfall

Wellelängt

254 NM, 220 NM

214 nm

Mobil Phase

Léisungsmëttel a: Waasser

Léisungsmëttel b: AcTONITILIL

Fléissend Taux

15 ml / min

20 ml / min

Géif Probéieren

30 mg

Kierznost

Zäit (CV)

Léisungsmëttel b (%)

Zäit (min)

Léisungsmëttel b (%)

0

0

0

4

1.0

0

1.0

4

10.0

6

7.5

18

12,5

6

13.0

18

16,5

10

14.0

22

19,0

41

15,5

22

21.0

41

18..0

38

/

/

20.0

38

22.0

87

9.0 -0

87

Dësch 1. Den experimentellen Setup fir Flash Purification.

Resultater an Diskussioun
Fir d'Péngungs Performance ze vergläichen fir de Polar päptive Probe tëscht reegiellen C18 Kolonn an C18A Kolonn, mir ginn eng reegelméisseg C18 Kolonn fir d'Flahschung vun der Flahnen. Wéi si 22 stoen, wéinst dem Heyphostoire Salden vun de C18 Ketten, déi duerch d'Handde Phasi dierft ass. Als Resultat war de Probe net effektiv getrennt a gereinegt.

Figur 2. D'Flash Carkomatogramm vun der Probe op engem reguläre C18 Patroun.

Nächst, mir hunn eng C18AAQ Kolonn fir d'Flash Prioritéit vun der Probe benotzt. Wéi an Figur 3 gewisen, ass de Peptide effektiv op der Kolonn opgeholl an duerno ausgelooss. D'Zilprodukt gouf aus Däiget aus dem Ausgewielunge getrennt gespiert a gesammelt ginn. Nom Lyphisisiséierung an dunn analyséiert vum HPLPC, dat beléifte Produkt huet eng Rengheet vun 9,2,2% a Entwécklung.

Figur 3. D'Flash Cholomatogramm vun der Probe op engem C18AQ Patroun.

A Conclusioun, SeplulaFash C18AQ RP Flash Cartridge kombinéiert mat der Flash Chromatographie System SetveranMaschinn kënnt eng schnell an effektiv Léisung fir d'Péngféierung vu staarke Polar oder hydrophilesche Proben.

Iwwer den Trennflash C18AQ RP Flash Cartridges

Et sinn eng Serie vun dem Sätz C18Aqaq Cplodderen mat verschiddene Resultater aus der Saarwëllefinanzéierung (wéi gewisen 2).

Artikel iwwert

Coloun

Fléissend Taux

(ml / min)

Max.Pressure

(PSI / Bar)

SW-5222-004-SP (AQ)

5.4 g

5-15

400 / 27.5

SW-5222-012-SP (AQ)

20. g

10-25

400 / 27.5

SW-5222-025-SP (AQ)

33 G

10-25

400 / 27.5

SW-5222-040-SP (AQ)

48 G

15-30

400 / 27.5

SW-5222-080-SP (AQ)

105 g

25-50

350 / 24.0

SW-5222-120-SP (AQ)

155 g

30-60

300 / 20.7

SW-5222-220-SP (AQ)

300 G

40-80

300 / 20.7

SW-5222-330-SP (AQ)

420 g

40-80

250 / 17.2

Dësch 2. Trennlahash C18AQ RP Flash Cartridges. Package Materialien: Héicheffizienz Kugelzesch C18 (AQ) -Boed Silica, 20 - 48 μm, 100 μ.

Fir weider Informatioun iwwer detailléierte Spezifikatioune vun Siewebolchtekëscht, oder d'Uerdnung op Settressour Sänger Flaïurdikterten, besicht eiser Websäit.


Postzäit: Oct-12-2018