Hongcheng Wang, Bo Xu
Applicationem R & D Center
Introductio
Secundum relativa momenta stationis periodi et periodi mobilis, chromatographia liquida dividi potest in chromatographiam normalem (NPC) et periodum chromatographiam versa (RPC).Nam RPC, polaritas phaselus mobilis fortior est quam phaselus stationarius.RPC late usus factus est in liquida chromatographia separationis modorum propter suam altissimam efficientiam, bonam resolutionem et manifestam retentionis mechanismum.Ideo RPC apta est ad separationem et purificationem variarum compositorum polaris vel non polarium, inclusis alkaloids, carbohydratibus, acida pinguia, steroids, acida nucleica, amino acida, peptides, servo, etc. In RPC, in RPC, in stationariis frequentissimis usibus est. matrix silica, quae variis coetibus functionibus conjuncta est, inclusis C18, C8, C4, phenyl, cyano, amino, etc. Inter hos circulos functiones functiones coniungitur, quam late usus est C18.Aestimatur plus quam 80% RPC inter C18 connexum phase uti nunc esse.Ergo C18 columna fina facta est necesse-habere columnam universalem pro omni officinarum.
Quamvis C18 columna in applicationibus amplissimis adhiberi possit, tamen nonnulla exemplaria, quae valde polaris vel hydrophilica, regularis C18 columnarum, problemata habere possunt, cum talia exemplaria purgare solebant.In RPC, vulgaris elution solventes ordinari possunt secundum polaritatem: aqua methanolum acetonitrile ethanolum tetrahydrofuran isopropanolum.Ut bonam retentionem in columna certificare pro his speciminibus (validis polaris vel valde hydrophilicis), alta proportio systematis aquei adhibeatur necesse est ut phase mobilis.Attamen, cum systematis aquae purae utens (inclusa solutione aquae purae vel salis purae) ut Phase mobilis, longa carbonis catena in stadio columnae C18 stationaria tendit ad vitandam aquam et inter se miscendum, inde in instanti decrescente. retentio capacitatis columnae vel etiam nullae retentionis.Hoc phaenomenon vocatur "praedagium hydrophobicum" (ut in parte sinistra figurae I).Etsi haec condicio convertitur, cum columna solventibus organicis ut methanolum vel acetonitrilum abluitur, tamen columnae damnum inferre potest.Necessarium igitur est ne haec res fiat.
Figure 1. Schematica diagramma iunctorum phases in superficie silicae gel in columna regulari C18 (reliquit) et columna C18AQ (dextra).
Ad quaestiones praedictas compellare, fabricatores materiae chromatographicae technicas emendare fecerunt.Una harum emendationum facit aliquas modificationes in superficie matricis silicae, ut inductio coetus hydrophilici (ut in dextra parte figurae 1), ut superficies gel hydrophilicae magis efficiat.Ita vincula C18 in superficie silica plene extendi potuerunt sub conditionibus valde aqueis et in ruina periodi hydrophobici vitari potuerunt.Hae columnae modificatae C18 columnae aqueae C18 vocantur, columnae scilicet C18AQ, quae ad condiciones elutionis aqueas valde dispositae sunt et systema aqueum 100% tolerare possunt.C18AQ columnae late applicatae sunt in separatione et purificatione compositorum validorum polarium, inclusa acida organica, peptides, nucleosides et vitaminum aquaticum solutum.
Desalting una est e applicationibus typicis columnarum C18AQ in mico purificationis exemplorum, quae removet sal vel quiddam in sample solvendo ad applicationem exempli in studiis subsequentibus faciliorem.In hoc poste, egregie caeruleus FCF cum valida verticitate adhibitus est ut specimen et in columna C18AQ purgatum.Specimen solvendo substitutum est ab organico solutione quiddam solvendo, ita faciliorem evaporationem sequentem gyratorii necnon solventes solvendo et operando.Praeterea, puritas exempli emendata est sublatis aliquibus immunditiis in sample.
Sectio experimentalis
Figura 2. De structura chemica exempli.
Praeclara Blue FCF pro exemplo in hac posta adhibitum est.Puritas rudis specimen 86% erat et structura chemicae specimen in Figura monstratum est 2. Ad solutionem sample parandam, 300 mg pulverulentum solidum rudis Blue FCF dissolutum est in 1 M NaH2PO4 solutionem quiddam et excussum bene fieri. clare patet solutio.Specimen solutionis tunc in columna mico ab injectore injecta est.Testimonium experimentale fulgoris purificationis in Tabula 1 recensetur.
| Instrumentum | SepaBean™ Machina2 | |||
| Cartridges | 12 g SepaFlash C18 RP cartridge mico (silica sphaerica, 20 - 45 μm, 100 Å, Ordo numeri: SW-5222-012-SP) | 12 g SepaFlash C18AQ RP cartridge mico (sphaerico silica, 20 - 45 µm, 100 , Order numberSW-5222-012-SP(AQ.). | ||
| Necem | 254 nm | |||
| Mobile tempus | Solvendo A.Aqua solvendo B：Methanol | |||
| Influunt rate | 30 mL/min | |||
| Sample loading | 300 mg (Splendide Blue FCF cum puritate 86%) | |||
| Gradiente | Tempus (CV) | Solvendo B (%) | Tempus (CV) | Solvendo B (%) |
| 0 | 10 | 0 | 0 | |
| 10 | 10 | 10 | 0 | |
| 10.1 | 100 | 10.1 | 100 | |
| 17.5 | 100 | 17.5 | 100 | |
| 17.6 | 10 | 17.6 | 0 | |
| 22.6 | 10 | 22.6 | 0 | |
Proventus et Discussion
A SepaFlash C18AQ RP cartridge mico adhibita est ad specimen desertionis et purificationis.Gradus clivus adhibitus est in qua aqua pura usus est ut phaselus mobilis ad initium elutionis et decurrat per 10 volumina columnae (CV).Ut ostenditur in Figura III, cum aqua pura ut mobile phase utens, specimen in cartridge mico perfecte retinuit.Deinde methanolum in periodo mobili directa ad 100% aucta et clivus pro 7.5 CV servatus est.Specimen ab 11.5 ad 13.5 CV elusum est.In fractionibus collectis, solutionis specimen ex NaH2PO4 solutionis methanoli quiddam substitutum est.Cum solutione valde aquea comparata, methanolum multo facilius fuit per gyrativum evaporationem submoveri in subsequenti gradu, quod faciliorem reddit investigationem sequentem.
Figura 3. Chromatogrammi mico specimen in cartridge C18AQ.
Conferre retentio morum cartridge C18AQ et cartridge regularis C18 ad exempla validi verticitatis, probatio parallela comparationis fiebat.A SepaFlash C18 RP cartridge mico adhibitum est, et chromatogrammi mico pro sample in Figura monstratum est 4. Pro cartridge regularis C18, summa ratio aquea tolerata phase circiter 90% est.Initium igitur clivus ponebatur in 10% methanolum in 90% aqua.Ut in Figura 4, ex hydrophobica Phase ruina C18 catenis ab alta ratione aquea causatis, specimen in cartridge regulari C18 vix retenta est et per phase mobile directe elusit.Quam ob rem, operatio exempli faciendi aut purificationis compleri non potest.
Figura 4. Chromatogrammi mico specimen in cartridge regularis C18.
Comparando cum lineari gradiente, usus gradatim gradientis habet sequentia commoda;
1. Solvendo usu et tempus purgationis specimen reducitur.
2. Scopum productum in acuto cacumine elusit, quod volumen fractionum collectorum minuit et sic sequens gyrativum evaporationem adiuvat necnon tempus salvificum.
3. Productum collectum in methanolum est quod facile evaporatur, sic siccatio temporis minuitur.
In fine, ad purificationem exempli, quod valde polare vel valde hydrophilicum est, SepaFlash C18AQ RP cartridges mico componens cum mico praeparativo systematis chromatographiae SepaBean™ Machina solutionem ieiunium et efficacem offerre potuit.
De SepaFlash Bonded Series C18 RP mico cartridges
Series cartridgeorum mico SepaFlash C18AQ RP cum differentibus specificationibus e Santai Technologia (ut in Tabula II ostensum est).
| Item numerus | Columna Location | Influunt Rate (mL/min) | Max.Pressure (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5.4 g | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
Tabula 2. SepaFlash C18AQ RP mico cartridges.
Stipare materias: Efficientia sphaerica C18(AQ) religata silica, 20 - 45 µm, 100 Å.
logy (ut patet in Tabula II).
Post tempus: Aug-27-2018