Руи Хуан, Бо Сю
Колдонмо R&D борбору
Introduction
Ион алмашуу хроматографиясы (IEC) көбүнчө эритмеде иондук формада берилген кошулмаларды бөлүү жана тазалоо үчүн колдонулган хроматографиялык ыкма.Алмашуучу иондордун ар кандай заряддык абалына ылайык, IEC эки түргө бөлүнөт, катион алмашуу хроматографиясы жана анион алмашуу хроматографиясы.Катион алмашуу хроматографиясында кычкыл топтор бөлүүчү чөйрөнүн бетине байланат.Мисалы, сульфон кислотасы (-SO3H) күчтүү катион алмашууда (SCX) кеңири колдонулган топ, ал Н+ диссоциациялайт жана терс заряддуу -SO3- тобу ошентип эритмедеги башка катиондорду адсорбциялай алат.Анион алмашуу хроматографиясында щелочтук топтор бөлүүчү чөйрөнүн бетине байланышат.Мисалы, төртүнчү амин (-NR3OH, мында R – углеводород тобу) адатта күчтүү анион алмашууда (SAX) колдонулат, ал OH- диссоциациялайт жана оң заряддуу топ -N+R3 эритмедеги башка аниондорду адсорбциялай алат, натыйжада анион пайда болот. алмашуу таасири.
Табигый азыктардын ичинен флавоноиддер жүрөк-кан тамыр ооруларын алдын алуу жана дарылоодогу ролу менен изилдөөчүлөрдүн көңүлүн бурган.Флавоноиддердин молекулалары фенолдук гидроксил топторунун болушунан улам кычкыл болгондуктан, ион алмашуу хроматографиясы бул кислота кошулмаларды бөлүү жана тазалоо үчүн кадимки нормалдуу фазага же тескери фазалык хроматографияга кошумча альтернатива болуп саналат.Флеш хроматографияда ион алмашуу үчүн көбүнчө колдонулган бөлүү каражаты силикагель матрицасы болуп саналат, мында ион алмашуу топтору анын бетине байланат.Флеш хроматографияда эң көп колдонулган ион алмашуу режимдери SCX (көбүнчө сульфон кислотасы тобу) жана SAX (көбүнчө төртүнчү амин тобу) болуп саналат.Santai Technologies компаниясы тарабынан "SepaFlash күчтүү катион алмашуу хроматография колонналарынын щелочтук кошулмаларды тазалоодо колдонулушу" аталышы менен мурда жарыяланган өтүнмө эскертмесинде SCX мамычалары щелочтуу кошулмаларды тазалоо үчүн колдонулган.Бул постто, нейтралдуу жана кислоталык стандарттардын аралашмасы кислота кошулмаларын тазалоодо SAX мамычаларын колдонууну изилдөө үчүн үлгү катары колдонулган.
Эксперименталдык бөлүм
Сүрөт 1. SAX бөлүү чөйрөсүнүн бетине туташтырылган стационардык фазанын схемалык диаграммасы.
Бул постто төртүнчүлүк амин менен байланышкан кремнезем менен алдын ала таңгакталган SAX мамычасы колдонулган (1-сүрөттө көрсөтүлгөндөй).Тазалоо үчүн үлгү катары хромон жана 2,4-дигидроксибензой кислотасынын аралашмасы колдонулган (2-сүрөттө көрсөтүлгөндөй).Аралашма метанолдо эритип, инжектор аркылуу флеш-картриджге жүктөлгөн.Флеш тазалоонун эксперименталдык орнотуулары 1-таблицада келтирилген.
Сүрөт 2. Үлгү аралашмасындагы эки компоненттин химиялык түзүлүшү.
| Инструмент | SepaBean™ машинасы Т | |||||
| Картридждер | 4 г SepaFlash Standard Series флэш-картридж (регулярдуу кремний диоксиди, 40 - 63 мкм, 60 Å, Заказ номери: S-5101-0004) | 4 г SepaFlash Bonded Series SAX флеш-картридж (регулярдуу кремний диоксиди, 40 - 63 мкм, 60 Å, Заказ номери: SW-5001-004-IR) | ||||
| Толкун узундугу | 254 нм (аныктоо), 280 нм (мониторинг) | |||||
| Мобилдик фаза | Эритүүчү А: N-гексан | |||||
| Эритүүчү В: этилацетат | ||||||
| Агым ылдамдыгы | 30 мл/мин | 20 мл/мин | ||||
| Үлгү жүктөө | 20 мг (компонент А жана Б компонентинин аралашмасы) | |||||
| Градиент | Убакыт (CV) | Эриткич B (%) | Убакыт (CV) | Эриткич B (%) | ||
| 0 | 0 | 0 | 0 | |||
| 1.7 | 12 | 14 | 100 | |||
| 3.7 | 12 | / | / | |||
| 16 | 100 | / | / | |||
| 18 | 100 | / | / | |||
Жыйынтыктары жана талкуулоо
Биринчиден, үлгү аралашмасы кадимки кремнезем менен алдын ала таңгакталган кадимки фазалык флеш-картридж менен бөлүнгөн.3-сүрөттө көрсөтүлгөндөй, үлгүдөгү эки компонент биринин артынан бири картриджден чыгарылды.Андан кийин үлгүнү тазалоо үчүн SAX флеш-картриджи колдонулган.4-сүрөттө көрсөтүлгөндөй, B кислоталуу компоненти SAX картриджинде толугу менен сакталып калган.Нейтралдуу А компоненти акырындык менен картриджден мобилдик фазанын элюциясы менен чыгарылды.
Сүрөт 3. Кадимки нормалдуу фазалуу картридждеги үлгүнүн флеш хроматограммасы.
Сүрөт 4. SAX картриджиндеги үлгүнүн флеш хроматограммасы.
3-сүрөт менен 4-сүрөттү салыштырганда, А компоненти эки башка флеш картриджде туура келбеген пик формага ээ.Элюция чокусу компонентке туура келерин тастыктоо үчүн SepaBean™ машинасынын башкаруу программасына орнотулган толук толкун узундугун сканерлөө мүмкүнчүлүгүн колдоно алабыз.Эки бөлүүнүн эксперименталдык маалыматтарын ачыңыз, хроматограммадагы убакыт огунун (CV) индикатор сызыгына A компонентине туура келген элюция чокусунун эң жогорку чекитине жана экинчи эң жогорку чекитине жана бул экөөнүн толук толкун узундук спектрине сүйрүңүз. чекиттер автоматтык түрдө хроматограмманын астында көрсөтүлөт (5-сүрөттө жана 6-сүрөттө көрсөтүлгөндөй).Бул эки бөлүнүүнүн толук толкун узундуктагы спектринин маалыматтарын салыштырганда, А компоненти эки экспериментте ырааттуу жутулуу спектрине ээ.Компонент А эки башка флеш-картриджде дал келбеген пик формага ээ болгондуктан, А компонентинде кадимки фазалык картриджде жана SAX картриджинде ар кандай кармалуучу өзгөчө ыпластык бар деп болжолдонууда.Демек, А компоненти жана бул эки жаркыраган картридждеги аралашма үчүн элюциянын ырааттуулугу ар башка, натыйжада хроматограммаларда чоку формасы туура келбейт.
Сүрөт 5. А компонентинин толук толкун узундуктагы спектри жана нормалдуу фазалык картридж менен бөлүнгөн аралашма.
Сүрөт 6. А компонентинин толук толкун узундуктагы спектри жана SAX картридж менен бөлүнгөн аралашма.
Эгерде чогултула турган максаттуу продукт нейтралдуу А компоненти болсо, тазалоо тапшырмасы үлгүнү жүктөгөндөн кийин элеюция үчүн SAX картриджинин түздөн-түз жардамы менен оңой бүтүрүлөт.Башка жагынан алганда, эгерде чогултула турган максаттуу продукт кислоталуу В компоненти болсо, басып алуу-чыгаруу ыкмасы эксперименталдык кадамдардагы бир аз тууралоо менен гана кабыл алынышы мүмкүн: үлгү SAX картриджине жана нейтралдуу А компонентине жүктөлгөндө. нормалдуу фазалык органикалык эриткичтер менен толугу менен элюцияланган, кыймылдуу фазаны 5% уксус кислотасын камтыган метанол эритмесине которуу.Мобилдик фазадагы ацетат иондору SAX картриджинин стационардык фазасындагы төртүнчү амин иондук топтору менен байланышуу үчүн В компоненти менен атаандашат, ошону менен максаттуу продуктуну алуу үчүн В компонентин картриджден тазалайт.Ион алмашуу режиминде бөлүнгөн үлгүнүн хроматограммасы 7-сүрөттө көрсөтүлгөн.
Сүрөт 7. SAX картриджинде ион алмашуу режиминде элюцияланган В компонентинин флеш хроматограммасы.
Жыйынтыктап айтканда, кычкыл же нейтралдуу үлгүнү SAX картриджинин жардамы менен ар кандай тазалоо стратегияларын колдонуу менен кадимки фазалуу картридж менен тез тазалоого болот.Андан тышкары, SepaBean™ машинасынын башкаруу программасына орнотулган толук толкун узундугун сканерлөө функциясынын жардамы менен, элюталанган фракциялардын мүнөздүү жутуу спектрин оңой салыштырууга жана ырастоого болот, бул изилдөөчүлөргө элюцияланган фракциялардын курамын жана тазалыгын тез аныктоого жардам берип, ошону менен иш натыйжалуулугун.
| Элемент номери | Колонна өлчөмү | Flow Rate (мл/мүнөт) | Max.Pressure (psi/бар) |
| SW-5001-004-IR | 5,9 г | 10-20 | 400/27.5 |
| SW-5001-012-IR | 23 г | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5001-025-IR | 38 г | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5001-040-IR | 55 г | 20-40 | 400/27.5 |
| SW-5001-080-IR | 122 г | 30-60 | 350/24.0 |
| SW-5001-120-IR | 180 г | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5001-220-IR | 340 г | 50-100 | 300/20.7 |
| SW-5001-330-IR | 475 г | 50-100 | 250/17.2
|
Таблица 2. SepaFlash Bonded Series SAX флеш-картридждери.Таңгактоочу материалдар: Ультра таза туура эмес SAX менен байланышкан кремний диоксиди, 40 - 63 мкм, 60 Å.
SepaBean™ деталдуу мүнөздөмөлөрү жөнүндө кошумча маалымат алуу үчүнмашина, же SepaFlash сериясындагы флеш-картридждерге буйрутма маалымат алуу үчүн, биздин веб-сайтка кириңиз.
Билдирүү убактысы: 2018-жылдын 09-ноябры