Руи Хуан, Бо Сю
Колдонмо R&D борбору
Introduction
Пептид – бул аминокислоталардан турган кошулма, алардын ар бири анын ырааттуулугун түзгөн аминокислота калдыктарынын ар кандай түрлөрүнө жана тартибине байланыштуу уникалдуу физикалык жана химиялык касиеттерге ээ.Катуу фазадагы химиялык синтездин өнүгүшү менен ар кандай активдүү пептиддердин химиялык синтези чоң ийгиликтерге жетишти.Бирок катуу фазалык синтез аркылуу алынган пептиддин татаал курамына байланыштуу акыркы продукт ишенимдүү бөлүү ыкмалары менен тазаланышы керек.Пептиддерди тазалоонун кеңири колдонулган ыкмаларына ион алмашуу хроматографиясы (IEC) жана тескери фазалуу жогорку эффективдүү суюктук хроматографиясы (RP-HPLC) кирет, алар аз үлгү жүктөө жөндөмдүүлүгүнүн кемчиликтери, бөлүүчү каражаттардын кымбаттыгы, татаал жана кымбат бөлүүчү жабдуулар, Майда молекулалуу пептиддерди (МВт < 1 кДа) тез тазалоо үчүн мурун Santai Technologies тарабынан ийгиликтүү колдонмо иши басылып чыккан, мында SepaFlash RP C18 картридж тимопентинди (TP-5) тез тазалоо үчүн колдонулган жана талаптарга жооп берген максаттуу продукция алынды.
Сүрөт 1. 20 жалпы аминокислота (www.bachem.com сайтынан чыгарылган).
Пептиддердин составында кеңири таралган аминокислоталардын 20 түрү бар.Бул аминокислоталарды уюлдуулугу жана кислота-негиздик касиети боюнча төмөнкү топторго бөлүүгө болот: полярдуу эмес (гидрофобдук), полярдуу (зарядсыз), кислоталуу же негиздүү (1-сүрөттө көрсөтүлгөндөй).Пептиддик тизмекте, ырааттуулукту түзгөн аминокислоталар көбүнчө полярдуу болсо (1-сүрөттө кызгылт түс менен белгиленгендей), мисалы цистеин, глутамин, аспарагин, серин, треонин, тирозин ж.б., анда бул пептид күчтүү болушу мүмкүн. полярдуулук жана сууда жакшы эрийт.Бул күчтүү полярдык пептид үлгүлөрүн тескери фазалык хроматография аркылуу тазалоо процедурасы учурунда гидрофобдук фазалык коллапс деп аталган кубулуш пайда болот (Santai Technologies тарабынан мурда жарыяланган өтүнмө эскертүүсүн караңыз: Гидрофобдук фазалык кыйроо, AQ Reversed Phase Chromatography колонналары жана алардын колдонмолору).Кадимки C18 мамычаларына салыштырмалуу, жакшыртылган C18AQ мамычалары күчтүү полярдуу же гидрофиликтүү үлгүлөрдү тазалоо үчүн эң ылайыктуу.Бул постто күчтүү полярдык пептид үлгү катары колдонулган жана C18AQ мамычасы менен тазаланган.Натыйжада, талаптарга жооп берген максаттуу продукт алынды жана кийинки изилдөө жана иштеп чыгууларда колдонулушу мүмкүн.
| Инструмент | SepaBean™машина 2 | |||
| Картридждер | 12 г SepaFlash C18 RP флеш-картридж (сфералык кремний диоксиди, 20 - 45 мкм, 100 Å, Заказдын номери: SW-5222-012-SP) | 12 г SepaFlash C18AQ RP флеш-картридж (сфералык кремний диоксиди, 20 - 45 мкм, 100 Å, Заказ номери: SW-5222-012-SP(AQ)) | ||
| Толкун узундугу | 254 нм, 220 нм | 214 нм | ||
| Мобилдик фаза | Эритүүчү А: Суу Эритүүчү В: Ацетонитрил | |||
| Агым ылдамдыгы | 15 мл/мин | 20 мл/мин | ||
| Үлгү жүктөө | 30 мг | |||
| Градиент | Убакыт (CV) | Эриткич B (%) | Убакыт (мүнөт) | Эриткич B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
Жыйынтыктары жана талкуулоо
Кадимки C18 тилкеси менен C18AQ тилкесинин ортосундагы полярдык пептид үлгүсүнүн тазалоо көрсөткүчтөрүн салыштыруу үчүн биз үлгүнү жарк-тазалоо үчүн кадимки C18 тилкесин колдондук.2-сүрөттө көрсөтүлгөндөй, C18 чынжырларынын гидрофобдук фазасынын кыйрашынан улам, жогорку суу катышы шартталган, үлгү кадимки C18 картриджинде дээрлик сакталып калган жана мобилдик фаза менен түздөн-түз элюталанган.Натыйжада, үлгү натыйжалуу бөлүнүп жана тазаланган эмес.
Сүрөт 2. Кадимки C18 картриджиндеги үлгүнүн флеш хроматограммасы.
Андан кийин, биз үлгүнү жарк тазалоо үчүн C18AQ мамычасын колдондук.3-сүрөттө көрсөтүлгөндөй, пептид колонкада эффективдүү кармалып, андан кийин элюталанган.Максаттуу продукт чийки үлгүдөгү аралашмалардан бөлүнүп, чогултулган.Лиофилизациядан кийин жана андан кийин HPLC тарабынан талдангандан кийин, тазаланган продукт 98,2% тазалыкка ээ жана андан ары кийинки кадам изилдөө жана өнүктүрүү үчүн колдонулушу мүмкүн.
Сүрөт 3. C18AQ картриджиндеги үлгүнүн флеш хроматограммасы.
Жыйынтыктап айтканда, SepaFlash C18AQ RP флеш-картриджи SepaBean флеш хроматография системасы менен айкалыштырылган.™машина күчтүү полярдуу же гидрофиликтүү үлгүлөрдү тазалоо үчүн тез жана натыйжалуу чечим сунуш кыла алат.
SepaFlash C18AQ RP флэш-картридждеринин сериясы бар, алар Сантай Технологиясынан ар кандай мүнөздөмөлөргө ээ (2-таблицада көрсөтүлгөндөй).
| Элемент номери | Колонна өлчөмү | Flow Rate (мл/мүнөт) | Max.Pressure (psi/бар) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5,4 г | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 г | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 г | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 г | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 г | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 г | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 г | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 г | 40-80 | 250/17.2 |
Таблица 2. SepaFlash C18AQ RP флеш-картридждери.Таңгактоочу материалдар: Жогорку эффективдүү сфералык C18(AQ) менен байланышкан кремний диоксиди, 20 - 45 мкм, 100 Å.
SepaBean™ машинасынын деталдуу мүнөздөмөлөрү же SepaFlash сериясындагы флеш-картридждер боюнча буйрутма маалыматы үчүн биздин веб-сайтка кириңиз.
Посттун убактысы: 2018-жылдын 12-октябрына чейин