Rui Huang, Bo Xu
Serlêdan Navenda R&D
Pêşkêş
Peptîd pêkhateyek e ku ji asîdên amînî pêk tê, ku her yek ji wan xwedan taybetmendiyên fîzîkî û kîmyewî yên bêhempa ye ji ber cûrbecûr û rêza bermahiyên asîda amînî yên ku rêza wê pêk tînin.Bi pêşkeftina senteza kîmyewî ya qonaxa zexm re, senteza kîmyewî ya peptîdên cihêreng ên çalak pêşkeftinek mezin çêkiriye.Lêbelê, ji ber pêkhatina tevlihev a peptîdê ku ji hêla senteza qonaxa zexm ve hatî wergirtin, divê hilbera paşîn bi rêbazên veqetandina pêbawer were paqij kirin.Rêbazên paqijkirinê yên ku bi gelemperî ji bo peptîdan têne bikar anîn kromatografiya pevguhertina îyonê (IEC) û kromatografiya şilavê ya bi performansa bilind a qonaxa berevajîkirî (RP-HPLC) hene, ku dezawantajên wan ên kapasîteya barkirina nimûneyê ya kêm, lêçûna bilind a medyaya veqetandinê, alavên veqetandinê yên tevlihev û biha hene, Ji bo paqijkirina bilez a peptîdên molekulên piçûk (MW < 1 kDa), dozek serîlêdanê ya serketî berê ji hêla Santai Technologies ve hate weşandin, ku tê de kartolek SepaFlash RP C18 ji bo paqijkirina bilez a tîmopentîn (TP-5) û hilbera armancê ku hewcedariyên bicîh tîne hate bidestxistin.
Figure 1. 20 asîdên amînî yên hevpar (ji www.bachem.com ve hatî hilberandin).
20 cure asîdên amînî hene ku di pêkhatina peptîdan de hevpar in.Van asîdên amînî li gorî polarîte û taybetmendiya asîd-bazê li komên jêrîn têne dabeş kirin: ne-polar (hîdrofobîk), polar (nebarkirî), asîdî an bingehîn (wek ku di jimar 1 de tê xuyang kirin).Di rêzek peptîd de, heke asîdên amînî yên ku rêzê pêk tînin bi piranî polar bin (wek ku di jimar 1-ê de bi rengê pembe hatî destnîşan kirin), wek Cysteine, Glutamine, Asparagine, Serine, Threonine, Tyrosine, û hwd. wê hingê dibe ku ev peptîd xwedî hêzek bihêz be. polarity û di avê de pir çareser dibe.Di dema prosedûra paqijkirinê de ji bo van nimûneyên peptîdên polar ên bihêz ji hêla kromatografiya qonaxa berevajîkirî ve, diyardeyek bi navê hilweşîna qonaxa hîdrofobîk dê çêbibe (binihêrin serîlêdana berê ya ku ji hêla Santai Technologies ve hatî weşandin: Hilweşîna Qonaxa Hîdrofobîk, Stûnên Kromatografiya Qonaxa Berevajîkirî AQ û Serlêdanên Wan).Li gorî stûnên C18 yên birêkûpêk, stûnên C18AQ yên çêtir ji bo paqijkirina nimûneyên polar an hîdrofîlîk ên bihêz herî maqûl in.Di vê postê de, peptîdek polar a bihêz wekî nimûne hate bikar anîn û ji hêla stûnek C18AQ ve hate paqij kirin.Wekî encamek, hilbera armancê ku hewcedariyên bicîh tîne hate bidestxistin û dikare di lêkolîn û pêşkeftina jêrîn de were bikar anîn.
| Alet | SepaBean™makîne 2 | |||
| Cartridges | 12 g SepaFlash C18 RP cartridge (silica gewr, 20 - 45 μm, 100 Å, Hejmara fermanê: SW-5222-012-SP) | 12 g SepaFlash C18AQ Kartrîja flashê RP (silica gewr, 20 - 45 μm, 100 Å, Hejmara fermanê: SW-5222-012-SP(AQ)) | ||
| Dirêjahiya pêlê | 254 nm, 220 nm | 214 nm | ||
| Qonaxa mobîl | Solvent A: Av Solvent B: Acetonitrile | |||
| Rêjeya herikînê | 15 ml/min | 20 ml/min | ||
| Sample loading | 30 mg | |||
| Gradient | Dem (CV) | Solvent B (%) | Dem (min) | Solvent B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
Encam û Nîqaş
Ji bo berhevkirina performansa paqijkirinê ya ji bo nimûneya peptîda polar di navbera stûna birêkûpêk C18 û stûna C18AQ de, me stûnek birêkûpêk C18 ji bo paqijkirina flashê ya nimûneyê wekî destpêk bikar anî.Wekî ku di Figure 2 de tê xuyang kirin, ji ber hilweşîna qonaxa hîdrofobîk a zincîreyên C18 ku ji ber rêjeya avî ya bilind pêk tê, nimûne bi zorê li ser kartolê birêkûpêk C18 hate girtin û rasterast ji hêla qonaxa mobîl ve hate derxistin.Wekî encamek, nimûne bi bandor nehatiye veqetandin û paqij kirin.
Wêne 2. Kromatograma flash ya nimûneyê ya li ser kartolek birêkûpêk C18.
Dûv re, me stûnek C18AQ ji bo paqijkirina flashê ya nimûneyê bikar anî.Wekî ku di jimar 3 de tê xuyang kirin, peptîd bi bandor li ser stûnê hate girtin û dûv re hate derxistin.Hilbera armanc ji nepakiyên di nimûneya xav de hate veqetandin û berhev kirin.Piştî lyophilization û dûv re ji hêla HPLC ve hatî analîz kirin, hilbera paqijkirî xwedan paqijiyek 98.2% ye û dikare ji bo lêkolîn û pêşveçûna pêngava paşîn bêtir were bikar anîn.
Wêne 3. Kromatograma flash ya nimûneyê ya li ser kartolek C18AQ.
Di encamê de, kartolê flash SepaFlash C18AQ RP bi pergala kromatografiya flash SepaBean re tê hev kirin.™makîne dikare çareseriyek bilez û bi bandor ji bo paqijkirina nimûneyên polar an hîdrofîlîk ên bihêz pêşkêşî bike.
Rêzek fîşekên SepaFlash C18AQ RP yên bi taybetmendiyên cihêreng ên ji Teknolojiya Santai (wek ku di Tablo 2 de tê xuyang kirin) hene.
| Hejmara Babetê | Mezinahiya Stûnê | Rêjeya Herikînê (mL/min) | Max.Press (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5,4 g | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
Table 2. SepaFlash C18AQ RP cerjorên flash.Materyalên pakkirinê: 20 - 45 μm, 100 Å sferîk C18(AQ)-sîlîka girêdayi-berbiçav.
Ji bo bêtir agahdarî li ser taybetmendiyên hûrgulî yên makîneya SepaBean™, an agahdariya fermankirinê li ser cerjorên flash series SepaFlash, ji kerema xwe biçin malpera me.
Dema şandinê: Oct-12-2018