Hongcheng Wang, Bo Xu
Serlêdana R & D Navenda
Pêşkêş
Li gorî polên têkildar ên qonaxa qonaxa qonax û qonaxa mobîl, dikare kromatografiya liquid dikare di chromatografya normal de (NPC) û kromatografiya qonaxê ya berevajî (RPC) were dabeş kirin. Ji bo RPC, polarbûna qonaxa mobîl ji qonaxa qonaxê bihêztir e. RPC bûye ku di moda veqetandina jînenîgariya derewîn de ji ber karbidestiya xwe ya bilind, çareseriya baş û mekanîzmaya ragirtina paqijkirî ya paqijkirî ya ku tê bikar anîn. Ji ber vê yekê RPC ji bo veqetandin û paqijkirina kompleksên cihêreng, tevî alkaloîd, asîdên nukleîk, ku bi gelemperî, Phenyl, Cyano, Amîno, hwd. Di nav van komên fonksiyonên girêdan de, ku herî zêde tê bikar anîn C18 ye. Tê texmîn kirin ku ji 80% ji RPC-yê bêtir ji 40% ji qonaxa girêdana C18 bikar tînin. Ji ber vê yekê C18 kolomatîk kolatografî bûye ku ji bo her kedê bibe kolonek gerdûnî.
Her çend kolona C18 dikare di nav cûrbecûr serîlêdanan de were bikar anîn, lêbelê, ji bo hin nimûneyên ku pir polar an jî pir polên hîdrofîlîkî ne, dibe ku kolên birêkûpêk ên C18-ê bibin pirsgirêkên ku ji bo paqijkirina nimûneyên wiha hene. Di RPC de, Solventên Hilberîn ên gelemperî dikarin li gorî pola xwe werin ferman kirin: Avê <methanol <acetonitrile <Etanol <tetrahydrofuran <isopropanol. Ji bo piştrastkirina li ser stûna ji bo van nimûneyan (polarek bihêz an jî hîdrofîlî an jî pir zêde), pergala bilind ya xwerû hewce ye ku wekî qonaxa mobîl were bikar anîn. Lêbelê, dema ku pergala avê ya pak an çareseriya xwê ya pak an qonaxa pakêtê ya paqijkirî, li ser qonaxa karbonê ya dirêj, ji hev veqetîne, di encamê de kêmbûna kapasîteya ragirtinê ya kolonê an jî bê girtin. Ev fenomenon tê gotin "hilweşîna qonaxa hîdrofobîk" (wekî ku di beşa çepê ya Figure 1 de tê nîşandan). Her çend vê rewşê ji ber ku kolon bi solên organîk ên wekî metanol an acetontrile tê şuştin, ew hîn jî dikare zirarê bide kolanê. Ji ber vê yekê, pêdivî ye ku pêşî li vê rewşê bigire.
Hêjmar 1. Diagramê Schemical qonaxên girêdanê yên li ser rûyê Silica Gelê di kolona C18 ya birêkûpêk de (çep) û kolona C18AG (rast).
Ji bo çareserkirina pirsgirêkên jorîn, hilberînerên materyalên kromatografîk ên kromografî başkirinên teknîkî kirine. Yek ji van çêtiran guherînên li ser rûyê Matrixê Silica, wekî danasîna hîdrofîlîkî ya cyano (wekî ku di beşa rastê ya Figure 1 de hatî destnîşan kirin, ji bo çêkirina erdê Silica bêtir hîdrofîlî. Bi vî rengî zincîrên C18 li ser rûyê silica bi tevahî di bin şert û mercên giran de dikarin werin dirêj kirin û hilweşîna qonaxa hîdrofobîk dikare were avêtin. Van kolonên C18 C18-ê wekî kolonên C18 yên AQUES têne gotin, Kolonên C18AQ, yên ku ji bo şert û mercên zeytûnê yên giran hatine amadekirin û dikarin 100% pergala avê biparêzin. Kolonên C18AG bi berfirehî di veqetandin û paqijkirina kompleksên pola bihêz de, di nav de acîdên organîk, peptides, nucleosides û vîtamînên avê yên avê.
Desalting yek ji serîlêdanên tîpîk ên kolonên C18AG ji bo nimûneyan e, ku di solventê nimûneyê de dirûvê xwê an buffer rakirin da ku serlêdana nimûneyê di lêkolînên paşê de hêsantir bike. Di vê postê de, FCF ya Brilliant bi polarbûna xurt wekî nimûneyê hate bikar anîn û li kolona C18AQ paqij bû. Solvent nimûne ji hêla çareseriya organîk ve ji çareseriya buffer hate guheztin, bi vî rengî evaporasyona rotaryê ya jêrîn û her weha solvents tomar û dema xebitandinê. Wekî din, paqijiya nimûneyê bi rakirina hin nepoxan di nimûneyê de baş bû.
Beşa ezmûnî
Hêjmar 2. Struktura kîmyewî ya nimûneyê.
FCF ya şîn a Brilliant wekî mînak di vê postê de hate bikar anîn. Paqijiya nimûneya xav ji% 86 û strukturên kîmyewî di Figure 2 de hate nîşandan, 300 mg powder Piştre çareseriya nimûneyê ji hêla injektorê ve di kolona Flash de hate şandin. Damezrandina ceribandina tîrêjê ya flash di tabloya 1 de tête navnîş kirin.
| Alet | Sepabean. Machine2 | |||
| Kartol | 12 G Sepaflash c18 RP Flash Flash (Silica Spherical, 20 - 45 μm, 100 å, Hejmara Ferman: SW-5222-012-SP) | 12 G Sepaflash C18Aq RP Flash Flash (SILICICAL SPHERICAL, 20 - 45 μm, 100 å, Hejmara Ferman: SW-5222-012-SP (AQ)) | ||
| ... | 254 nm | |||
| Qonaxa mobîl | Solvent A: Av Solvent b: methanol | |||
| Rêjeya Flow | 30 ml / min | |||
| Loading nimûne | 300 mg (fcf şîn ya birûmet bi paqijiya 86%) | |||
| Gehremeng | Dem (CV) | Solvent b (%) | Dem (CV) | Solvent b (%) |
| 0 | 10 | 0 | 0 | |
| 10 | 10 | 10 | 0 | |
| 10.1 | 100 | 10.1 | 100 | |
| 17.5 | 100 | 17.5 | 100 | |
| 17.6 | 10 | 17.6 | 0 | |
| 22.6 | 10 | 22.6 | 0 | |
Encam û nîqaş
A Sepaflash C18AQ RP Flash Cartridge ji bo nimûneya despartin û paqijkirinê hate bikar anîn. Step Gradient bi karanîna ku ava paqij hate bikar anîn wekî qonaxa mobîl di destpêka elankirinê de û ji bo 10 kolanên kolonê (CV) dakêşin. Wekî ku di Figure 3 de tê nîşandan, dema ku ava paqij wekî qonaxa mobîl bikar bînin, nimûne bi tevahî li ser kartolên flash hate girtin. Piştre, di qonaxa mobîl de di qonaxa mobîl de rasterast ji% 100 zêde bû û ji bo 7.5 cv hate domandin. Nimûne ji 11.5 û 13.5 CV-ê hate qewirandin. Di fraksiyonên berhevkirî de, çareseriya nimûneyê ji çareseriya buffer NAH2PO4 ji metanol re hate guhertin. Berhevkirina bi çareseriya pir aveav, Methanol pir hêsantir bû ku ji hêla avakirina rotîner ve di pêngava paşê de were derxistin, ku lêkolîna jêrîn hêsantir dike.
Hêjmar 3. Chromatograma Flash-ê ya nimûneyê li ser kartolek C18AQ.
Ji bo berhevkirina tevgera ragirtinê ya kartolên C18AQ û kartolên C18 yên Regular ji bo nimûneyên polarbûna bihêz, ceribandina berhevdana paralel hate kirin. A Sepaflash C18 RP Flash Flash ji bo nimûneyê hate bikar anîn û ji bo nimûneyê di Figure 4 de hate destnîşankirin. Ji ber vê yekê destpêkirina stûnan li% 10% avê di% 10 metanolê de hate danîn. Wekî ku di Figure 4 de tê xuyang kirin, ji ber zincîra hîdrofobîk a ku ji hêla rêjeya bilind a avî ve hatî çêkirin, nimûne li ser kartona C18 ya birêkûpêk hate girtin û rasterast ji hêla qonaxa mobîl ve hate derxistin. Wekî encamek, operasyona nexşeya nimûneyê an paqijkirinê nayê qedandin.
Hêjmar 4. Chromatograma Flash ya nimûneyê li ser kartolek C18 ya birêkûpêk.
Berhevdana bi gradient linear, karanîna pêngava pêngavê xwedan avantajên jêrîn hene:
1. Bikaranîna solvent û dema drav ji bo paqijkirina nimûneyê kêm dibe.
2. Hilbera hilberê di pezê hişk de, ku qumarê perçeyên berhevkirî kêm dike û bi vî rengî ji holê rotareserkirina jêrîn û her weha dema xilaskirinê hêsantir dike.
3
Di encamnameyê de, ji bo paqijkirina nimûneyê ya ku pola an pir bi hêz e, sepaflash c18Aq rp
Di derbarê series Bonded Sepaflash C18 RP Cartridges
Li ser kartolên flash ên Sepaflash C18AF C18AQ bi taybetmendiyên cûda yên ji teknolojiya Santai (wekî ku di Table 2 de tê nîşandan) hene.
| Hejmara Babetê | Mezinahiya kolonê | Rêjeya Flow (ml / min) | Max.pressure (psi / bar) |
| SW-5222-004-SP (AQ) | 5.4 G | 5-15 | 400 / 27.5 |
| SW-5222-012-SP (AQ) | 20 g | 10-25 | 400 / 27.5 |
| SW-5222-025-SP (AQ) | 33 g | 10-25 | 400 / 27.5 |
| SW-5222-040-SP (AQ) | 48 g | 15-30 | 400 / 27.5 |
| SW-5222-0.0-SP (AQ) | 105 g | 25-50 | 350/2004 |
| SW-5222-120-SP (AQ) | 155 g | 30-60 | 300 / 20.7 |
| SW-5222-220-SP (AQ) | 300 g | 40-80 | 300 / 20.7 |
| SW-5222-330-SP (AQ) | 420 G | 40-80 | 250/17.2 |
Table 2. Sepaflash C18Aq RP Flash Cartridges.
Materyalên Packing: Kargêriya High-Kargêrî C18 (Aq) -Boned -Boned Silica, 20 - 45 μm, 100 å.
logî (wekî ku di Table 2 de tê nîşandan).
Demjimêra paşîn: Tebax-27-2018