Rui Huang, Bo Xu
응용 프로그램 R & D 센터
소개
펩티드는 아미노산으로 구성된 화합물이며, 각각의 유형 및 순서로 인해 독특한 물리적 및 화학적 특성을 갖는 아미노산 잔기가 서열을 구성하는 아미노산 잔기를 갖는다. 고체 화학적 합성의 발달로, 다양한 활성 펩티드의 화학적 합성은 큰 진전을 이루었다. 그러나, 고체 상 합성에 의해 수득 된 펩티드의 복잡한 조성으로 인해, 최종 생성물은 신뢰할 수있는 분리 방법에 의해 정제되어야한다. 펩티드에 일반적으로 사용되는 정제 방법에는 이온 교환 크로마토 그래피 (IEC) 및 역상 고성능 액체 크로마토 그래피 (RP-HPLC)가 있으며, 이는 낮은 샘플 로딩 용량, 분리 매체의 높은 비용, 복잡하고 비용이 많이 드는 분리 장비 등의 단점이있는 소규모 분자 펩티드 (MW <1 KDA)를위한 성공적인 사례를 포함하여, 전적으로 발표되었다. Thymopentin (TP-5)의 신속한 정제를 위해 Sepaflash RP C18 카트리지가 사용되었고 요구 사항을 충족하는 대상 제품이 얻어졌다.
그림 1. 20 일반적인 아미노산 (www.bachem.com에서 재생).
펩티드의 조성에서 흔한 20 가지 종류의 아미노산이 있습니다. 이들 아미노산은 극성 및 산-염기 특성에 따라 다음 그룹으로 나눌 수있다 : 비극성 (소수성), 극성 (비전), 산성 또는 기본 (도 1에 도시 된 바와 같이). 펩티드 서열에서, 서열을 구성하는 아미노산이 대부분 극성 (그림 1의 분홍색으로 표시) 인 경우, 시스테인, 글루타민, 아스파라긴, 세린, 트레오닌, 티로신 등과 같은이 펩티드는 강한 극성을 가질 수 있고 물에서 매우 용해 될 수있다. 역상 크로마토 그래피에 의해 이러한 강한 극성 펩티드 샘플에 대한 정제 절차 동안, 소수성 위상 붕괴라는 현상이 발생할 것이다 (Santai Technologies의 이전에 발표 된 적용 노트 : 소수성 위상 붕괴, AQ 역 위상 크로마토 그래피 컬럼 및 응용 분야). 일반 C18 컬럼과 비교하여, 개선 된 C18AQ 컬럼은 강한 극성 또는 친수성 샘플의 정제에 가장 적합하다. 이 포스트에서, 강한 극성 펩티드는 샘플로서 이용되고 C18AQ 컬럼에 의해 정제되었다. 결과적으로, 요구 사항을 충족하는 대상 제품이 얻어졌으며 다음 연구 개발에 사용될 수 있습니다.
| 기구 | Sepabean™기계 2 | |||
| 카트리지 | 12 g Sepaflash C18 RP 플래시 카트리지 (구형 실리카, 20-45 μm, 100 Å, 주문 수녀 : SW-5222-012-SP) | 12 g Sepaflash C18AQ RP 플래시 카트리지 (구형 실리카, 20-45 μm, 100Å, 주문 번호 ： SW-5222-012-SP (AQ)) | ||
| 파장 | 254 nm, 220 nm | 214 nm | ||
| 이동 단계 | 솔벤트 A : 물 용매 B : 아세토 니트릴 | |||
| 유량 | 15 ml/분 | 20 ml/분 | ||
| 샘플 로딩 | 30 mg | |||
| 구배 | 시간 (CV) | 용매 B (%) | 시간 (Min) | 용매 B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
결과와 토론
일반 C18 컬럼과 C18AQ 컬럼 사이의 극성 펩티드 샘플의 정제 성능을 비교하기 위해, 우리는 시작으로서 샘플의 플래시 정제를위한 일반 C18 컬럼을 이용 하였다. 도 2에 도시 된 바와 같이, 높은 수성 비율로 인한 C18 사슬의 소수성 위상 붕괴로 인해, 샘플은 일반 C18 카트리지에서 거의 보관되지 않았으며 이동 단계에 의해 직접 용출되었다. 결과적으로, 샘플은 효과적으로 분리되고 정제되지 않았다.
그림 2. 일반 C18 카트리지에서 샘플의 플래시 크로마토 그램.
다음으로, 우리는 샘플의 플래시 정화를 위해 C18AQ 열을 사용했습니다. 도 3에 도시 된 바와 같이, 펩티드는 컬럼에 효과적으로 유지 된 다음 용리시켰다. 표적 생성물을 원시 샘플의 불순물로부터 분리하고 수집 하였다. 동결 건조 후 HPLC에 의해 분석 된 후, 정제 된 생성물은 98.2%의 순도를 가지며 다음 단계 연구 및 개발에 추가로 이용 될 수있다.
그림 3. C18AQ 카트리지에서 샘플의 플래시 크로마토 그램.
결론적으로, Sepaflash C18AQ RP 플래시 카트리지는 플래시 크로마토 그래피 시스템 Sepabean과 결합했습니다.™기계는 강한 극성 또는 친수성 샘플의 정제를위한 빠르고 효과적인 솔루션을 제공 할 수 있습니다.
Santai 기술과는 다른 사양을 가진 Sepaflash C18AQ RP 플래시 카트리지가 일련의 일련의 표 2에 표시되어 있습니다.
| 항목 번호 | 열 크기 | 유량 (ml/min) | 최대 압력 (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP (AQ) | 5.4 g | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP (AQ) | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP (AQ) | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP (AQ) | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP (AQ) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP (AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222220-SP (AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP (AQ) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
표 2. Sepaflash C18AQ RP 플래시 카트리지. 포장 재료 : 고효율 구형 C18 (AQ)-본드 실리카, 20-45 μm, 100Å.
Sepabean ™ Machine의 자세한 사양 또는 Sepaflash Series Flash Cartridges에 대한 주문 정보에 대한 자세한 내용은 웹 사이트를 방문하십시오.
후 시간 : 2018 년 10 월 12 일