ರೂಯಿ ಹುವಾಂಗ್, ಬೊ ಕ್ಸು
ಅಪ್ಲಿಕೇಶನ್ R&D ಕೇಂದ್ರ
ಪರಿಚಯ
ಪೆಪ್ಟೈಡ್ ಎನ್ನುವುದು ಅಮೈನೋ ಆಮ್ಲಗಳಿಂದ ಕೂಡಿದ ಸಂಯುಕ್ತವಾಗಿದೆ, ಪ್ರತಿಯೊಂದೂ ಅದರ ಅನುಕ್ರಮವನ್ನು ರೂಪಿಸುವ ಅಮೈನೋ ಆಮ್ಲದ ಅವಶೇಷಗಳ ವಿವಿಧ ಪ್ರಕಾರಗಳು ಮತ್ತು ಕ್ರಮದಿಂದಾಗಿ ವಿಶಿಷ್ಟವಾದ ಭೌತಿಕ ಮತ್ತು ರಾಸಾಯನಿಕ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ.ಘನ ಹಂತದ ರಾಸಾಯನಿಕ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಯೊಂದಿಗೆ, ವಿವಿಧ ಸಕ್ರಿಯ ಪೆಪ್ಟೈಡ್ಗಳ ರಾಸಾಯನಿಕ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯು ಉತ್ತಮ ಪ್ರಗತಿಯನ್ನು ಸಾಧಿಸಿದೆ.ಆದಾಗ್ಯೂ, ಘನ ಹಂತದ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯಿಂದ ಪಡೆದ ಪೆಪ್ಟೈಡ್ನ ಸಂಕೀರ್ಣ ಸಂಯೋಜನೆಯ ಕಾರಣ, ಅಂತಿಮ ಉತ್ಪನ್ನವನ್ನು ವಿಶ್ವಾಸಾರ್ಹ ಬೇರ್ಪಡಿಸುವ ವಿಧಾನಗಳಿಂದ ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಬೇಕು.ಪೆಪ್ಟೈಡ್‌ಗಳಿಗೆ ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಬಳಸುವ ಶುದ್ಧೀಕರಣ ವಿಧಾನಗಳಲ್ಲಿ ಅಯಾನ್ ಎಕ್ಸ್‌ಚೇಂಜ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ (ಐಇಸಿ) ಮತ್ತು ರಿವರ್ಸ್ಡ್-ಫೇಸ್ ಹೈ ಪರ್ಫಾರ್ಮೆನ್ಸ್ ಲಿಕ್ವಿಡ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ (ಆರ್‌ಪಿ-ಎಚ್‌ಪಿಎಲ್‌ಸಿ) ಸೇರಿವೆ, ಇದು ಕಡಿಮೆ ಮಾದರಿ ಲೋಡಿಂಗ್ ಸಾಮರ್ಥ್ಯದ ಅನಾನುಕೂಲಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ, ಪ್ರತ್ಯೇಕತೆಯ ಮಾಧ್ಯಮದ ಹೆಚ್ಚಿನ ವೆಚ್ಚ, ಸಂಕೀರ್ಣ ಮತ್ತು ದುಬಾರಿ ಬೇರ್ಪಡಿಸುವ ಸಾಧನ, ಇತ್ಯಾದಿ. ಸಣ್ಣ ಮಾಲಿಕ್ಯೂಲ್ ಪೆಪ್ಟೈಡ್ಗಳ (MW <1 kDa) ಕ್ಷಿಪ್ರ ಶುದ್ಧೀಕರಣಕ್ಕಾಗಿ, ಸ್ಯಾಂಟೈ ಟೆಕ್ನಾಲಜೀಸ್‌ನಿಂದ ಈ ಹಿಂದೆ ಯಶಸ್ವಿ ಅಪ್ಲಿಕೇಶನ್ ಪ್ರಕರಣವನ್ನು ಪ್ರಕಟಿಸಲಾಯಿತು, ಇದರಲ್ಲಿ ಥೈಮೊಪೆಂಟಿನ್ (TP-5) ನ ತ್ವರಿತ ಶುದ್ಧೀಕರಣಕ್ಕಾಗಿ SepaFlash RP C18 ಕಾರ್ಟ್ರಿಡ್ಜ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಲಾಯಿತು. ಅವಶ್ಯಕತೆಗಳನ್ನು ಪೂರೈಸುವ ಗುರಿ ಉತ್ಪನ್ನವನ್ನು ಪಡೆಯಲಾಗಿದೆ.
ಚಿತ್ರ 1. 20 ಸಾಮಾನ್ಯ ಅಮೈನೋ ಆಮ್ಲಗಳು (www.bachem.com ನಿಂದ ಪುನರುತ್ಪಾದಿಸಲಾಗಿದೆ).
ಪೆಪ್ಟೈಡ್ಗಳ ಸಂಯೋಜನೆಯಲ್ಲಿ ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಕಂಡುಬರುವ 20 ರೀತಿಯ ಅಮೈನೋ ಆಮ್ಲಗಳಿವೆ.ಈ ಅಮೈನೋ ಆಮ್ಲಗಳನ್ನು ಅವುಗಳ ಧ್ರುವೀಯತೆ ಮತ್ತು ಆಸಿಡ್-ಬೇಸ್ ಆಸ್ತಿಗೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿ ಈ ಕೆಳಗಿನ ಗುಂಪುಗಳಾಗಿ ವಿಂಗಡಿಸಬಹುದು: ಧ್ರುವೀಯವಲ್ಲದ (ಹೈಡ್ರೋಫೋಬಿಕ್), ಧ್ರುವೀಯ (ಚಾರ್ಜ್ ಮಾಡದ), ಆಮ್ಲೀಯ ಅಥವಾ ಮೂಲಭೂತ (ಚಿತ್ರ 1 ರಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಿರುವಂತೆ).ಪೆಪ್ಟೈಡ್ ಅನುಕ್ರಮದಲ್ಲಿ, ಅನುಕ್ರಮವನ್ನು ರೂಪಿಸುವ ಅಮೈನೋ ಆಮ್ಲಗಳು ಹೆಚ್ಚಾಗಿ ಧ್ರುವೀಯವಾಗಿರುತ್ತವೆ (ಚಿತ್ರ 1 ರಲ್ಲಿ ಗುಲಾಬಿ ಬಣ್ಣದಲ್ಲಿ ಗುರುತಿಸಲಾಗಿದೆ), ಉದಾಹರಣೆಗೆ ಸಿಸ್ಟೈನ್, ಗ್ಲುಟಾಮಿನ್, ಆಸ್ಪ್ಯಾರಜಿನ್, ಸೆರಿನ್, ಥ್ರೆಯೋನೈನ್, ಟೈರೋಸಿನ್, ಇತ್ಯಾದಿ. ಆಗ ಈ ಪೆಪ್ಟೈಡ್ ಪ್ರಬಲವಾಗಿರಬಹುದು. ಧ್ರುವೀಯತೆ ಮತ್ತು ನೀರಿನಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚು ಕರಗುತ್ತದೆ.ರಿವರ್ಸ್ಡ್-ಫೇಸ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ ಮೂಲಕ ಈ ಬಲವಾದ ಪೋಲಾರ್ ಪೆಪ್ಟೈಡ್ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಶುದ್ಧೀಕರಿಸುವ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ, ಹೈಡ್ರೋಫೋಬಿಕ್ ಹಂತದ ಕುಸಿತ ಎಂಬ ವಿದ್ಯಮಾನವು ಸಂಭವಿಸುತ್ತದೆ (ಸಂತೈ ಟೆಕ್ನಾಲಜೀಸ್‌ನಿಂದ ಈ ಹಿಂದೆ ಪ್ರಕಟಿಸಲಾದ ಅಪ್ಲಿಕೇಶನ್ ಟಿಪ್ಪಣಿಯನ್ನು ನೋಡಿ: ಹೈಡ್ರೋಫೋಬಿಕ್ ಹಂತ ಕುಸಿತ, AQ ರಿವರ್ಸ್ಡ್ ಫೇಸ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ ಕಾಲಮ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಅವುಗಳ ಅಪ್ಲಿಕೇಶನ್‌ಗಳು).ಸಾಮಾನ್ಯ C18 ಕಾಲಮ್‌ಗಳಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ, ಸುಧಾರಿತ C18AQ ಕಾಲಮ್‌ಗಳು ಬಲವಾದ ಧ್ರುವ ಅಥವಾ ಹೈಡ್ರೋಫಿಲಿಕ್ ಮಾದರಿಗಳ ಶುದ್ಧೀಕರಣಕ್ಕೆ ಹೆಚ್ಚು ಸೂಕ್ತವಾಗಿದೆ.ಈ ಪೋಸ್ಟ್‌ನಲ್ಲಿ, ಬಲವಾದ ಪೋಲಾರ್ ಪೆಪ್ಟೈಡ್ ಅನ್ನು ಮಾದರಿಯಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು C18AQ ಕಾಲಮ್‌ನಿಂದ ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಲಾಗಿದೆ.ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ, ಅವಶ್ಯಕತೆಗಳನ್ನು ಪೂರೈಸುವ ಗುರಿ ಉತ್ಪನ್ನವನ್ನು ಪಡೆಯಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಕೆಳಗಿನ ಸಂಶೋಧನೆ ಮತ್ತು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಯಲ್ಲಿ ಬಳಸಬಹುದು.
| ಉಪಕರಣ | ಸೆಪಾಬೀನ್™ಯಂತ್ರ 2 | |||
| ಕಾರ್ಟ್ರಿಜ್ಗಳು | 12 ಗ್ರಾಂ SepaFlash C18 RP ಫ್ಲ್ಯಾಶ್ ಕಾರ್ಟ್ರಿಡ್ಜ್ (ಗೋಳಾಕಾರದ ಸಿಲಿಕಾ, 20 - 45 μm, 100 Å, ಆರ್ಡರ್ ಸಂಖ್ಯೆ:SW-5222-012-SP) | 12 ಗ್ರಾಂ SepaFlash C18AQ RP ಫ್ಲ್ಯಾಶ್ ಕಾರ್ಟ್ರಿಡ್ಜ್ (ಗೋಳಾಕಾರದ ಸಿಲಿಕಾ, 20 - 45 μm, 100 Å, ಆದೇಶ ಸಂಖ್ಯೆ:SW-5222-012-SP(AQ)) | ||
| ತರಂಗಾಂತರ | 254 nm, 220 nm | 214 ಎನ್ಎಂ | ||
| ಮೊಬೈಲ್ ಹಂತ | ದ್ರಾವಕ ಎ: ನೀರು ದ್ರಾವಕ ಬಿ: ಅಸಿಟೋನೈಟ್ರೈಲ್ | |||
| ಹರಿವಿನ ಪರಿಮಾಣ | 15 ಮಿಲಿ/ನಿಮಿಷ | 20 ಮಿಲಿ/ನಿಮಿಷ | ||
| ಮಾದರಿ ಲೋಡಿಂಗ್ | 30 ಮಿಗ್ರಾಂ | |||
| ಗ್ರೇಡಿಯಂಟ್ | ಸಮಯ (CV) | ದ್ರಾವಕ ಬಿ (%) | ಸಮಯ (ನಿಮಿಷ) | ದ್ರಾವಕ ಬಿ (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಮತ್ತು ಚರ್ಚೆ
ಸಾಮಾನ್ಯ C18 ಕಾಲಮ್ ಮತ್ತು C18AQ ಕಾಲಮ್‌ನ ನಡುವೆ ಪೋಲಾರ್ ಪೆಪ್ಟೈಡ್ ಮಾದರಿಯ ಶುದ್ಧೀಕರಣ ಕಾರ್ಯಕ್ಷಮತೆಯನ್ನು ಹೋಲಿಸಲು, ಮಾದರಿಯ ಫ್ಲಾಶ್ ಶುದ್ಧೀಕರಣಕ್ಕಾಗಿ ನಾವು ಸಾಮಾನ್ಯ C18 ಕಾಲಮ್ ಅನ್ನು ಪ್ರಾರಂಭವಾಗಿ ಬಳಸಿದ್ದೇವೆ.ಚಿತ್ರ 2 ರಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಿರುವಂತೆ, ಹೆಚ್ಚಿನ ಜಲೀಯ ಅನುಪಾತದಿಂದ ಉಂಟಾದ C18 ಸರಪಳಿಗಳ ಹೈಡ್ರೋಫೋಬಿಕ್ ಹಂತದ ಕುಸಿತದಿಂದಾಗಿ, ಮಾದರಿಯನ್ನು ಸಾಮಾನ್ಯ C18 ಕಾರ್ಟ್ರಿಡ್ಜ್‌ನಲ್ಲಿ ಉಳಿಸಲಾಗಿಲ್ಲ ಮತ್ತು ಮೊಬೈಲ್ ಹಂತದಿಂದ ನೇರವಾಗಿ ಹೊರಹಾಕಲಾಯಿತು.ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ, ಮಾದರಿಯನ್ನು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿ ಬೇರ್ಪಡಿಸಲಾಗಿಲ್ಲ ಮತ್ತು ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಲಾಗಿಲ್ಲ.
ಚಿತ್ರ 2. ಸಾಮಾನ್ಯ C18 ಕಾರ್ಟ್ರಿಡ್ಜ್‌ನಲ್ಲಿನ ಮಾದರಿಯ ಫ್ಲಾಶ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಾಮ್.
ಮುಂದೆ, ಮಾದರಿಯ ಫ್ಲಾಶ್ ಶುದ್ಧೀಕರಣಕ್ಕಾಗಿ ನಾವು C18AQ ಕಾಲಮ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿದ್ದೇವೆ.ಚಿತ್ರ 3 ರಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಿರುವಂತೆ, ಪೆಪ್ಟೈಡ್ ಅನ್ನು ಕಾಲಮ್ನಲ್ಲಿ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿ ಉಳಿಸಿಕೊಳ್ಳಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ನಂತರ ಹೊರಹಾಕಲಾಯಿತು.ಉದ್ದೇಶಿತ ಉತ್ಪನ್ನವನ್ನು ಕಚ್ಚಾ ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿನ ಕಲ್ಮಶಗಳಿಂದ ಬೇರ್ಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಸಂಗ್ರಹಿಸಲಾಗಿದೆ.ಲೈಯೋಫೈಲೈಸೇಶನ್ ಮತ್ತು ನಂತರ HPLC ಯಿಂದ ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಿದ ನಂತರ, ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಿದ ಉತ್ಪನ್ನವು 98.2% ನಷ್ಟು ಶುದ್ಧತೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ ಮತ್ತು ಮುಂದಿನ ಹಂತದ ಸಂಶೋಧನೆ ಮತ್ತು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಗೆ ಮತ್ತಷ್ಟು ಬಳಸಿಕೊಳ್ಳಬಹುದು.
ಚಿತ್ರ 3. C18AQ ಕಾರ್ಟ್ರಿಡ್ಜ್‌ನಲ್ಲಿನ ಮಾದರಿಯ ಫ್ಲಾಶ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಾಮ್.
ಕೊನೆಯಲ್ಲಿ, SepaFlash C18AQ RP ಫ್ಲ್ಯಾಶ್ ಕಾರ್ಟ್ರಿಡ್ಜ್ ಅನ್ನು ಫ್ಲಾಶ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ ಸಿಸ್ಟಮ್ SepaBean ನೊಂದಿಗೆ ಸಂಯೋಜಿಸಲಾಗಿದೆ™ಯಂತ್ರವು ಬಲವಾದ ಧ್ರುವ ಅಥವಾ ಹೈಡ್ರೋಫಿಲಿಕ್ ಮಾದರಿಗಳ ಶುದ್ಧೀಕರಣಕ್ಕೆ ವೇಗವಾದ ಮತ್ತು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ ಪರಿಹಾರವನ್ನು ನೀಡುತ್ತದೆ.
ಸ್ಯಾಂಟೈ ಟೆಕ್ನಾಲಜಿಯಿಂದ ವಿಭಿನ್ನ ವಿಶೇಷಣಗಳೊಂದಿಗೆ SepaFlash C18AQ RP ಫ್ಲ್ಯಾಷ್ ಕಾರ್ಟ್ರಿಜ್ಗಳ ಸರಣಿಗಳಿವೆ (ಟೇಬಲ್ 2 ರಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಿರುವಂತೆ).
| ಐಟಂ ಸಂಖ್ಯೆ | ಕಾಲಮ್ ಗಾತ್ರ | ಹರಿವಿನ ಪರಿಮಾಣ (ಮಿಲಿ/ನಿಮಿಷ) | ಗರಿಷ್ಠ ಒತ್ತಡ (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5.4 ಗ್ರಾಂ | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 ಗ್ರಾಂ | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 ಗ್ರಾಂ | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 ಗ್ರಾಂ | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 ಗ್ರಾಂ | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 ಗ್ರಾಂ | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 ಗ್ರಾಂ | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 ಗ್ರಾಂ | 40-80 | 250/17.2 |
ಕೋಷ್ಟಕ 2. SepaFlash C18AQ RP ಫ್ಲಾಶ್ ಕಾರ್ಟ್ರಿಜ್ಗಳು.ಪ್ಯಾಕಿಂಗ್ ಸಾಮಗ್ರಿಗಳು: ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಾಮರ್ಥ್ಯದ ಗೋಳಾಕಾರದ C18(AQ)-ಬಂಧಿತ ಸಿಲಿಕಾ, 20 - 45 μm, 100 Å.
SepaBean™ ಯಂತ್ರದ ವಿವರವಾದ ವಿಶೇಷಣಗಳು ಅಥವಾ SepaFlash ಸರಣಿಯ ಫ್ಲ್ಯಾಶ್ ಕಾರ್ಟ್ರಿಜ್ಗಳ ಆರ್ಡರ್ ಮಾಡುವ ಮಾಹಿತಿಗಾಗಿ, ದಯವಿಟ್ಟು ನಮ್ಮ ವೆಬ್‌ಸೈಟ್‌ಗೆ ಭೇಟಿ ನೀಡಿ.
ಪೋಸ್ಟ್ ಸಮಯ: ಅಕ್ಟೋಬರ್-12-2018