Rui Huang, Bo Xu
មជ្ឈមណ្ឌលស្រាវជ្រាវ និងអភិវឌ្ឍន៍កម្មវិធី
សេចក្តីផ្តើម
peptide គឺជាសមាសធាតុផ្សំឡើងនៃអាស៊ីតអាមីណូ ដែលនីមួយៗមានលក្ខណៈសម្បត្តិរូបវន្ត និងគីមីតែមួយគត់ ដោយសារប្រភេទផ្សេងគ្នា និងលំដាប់នៃសំណល់អាស៊ីតអាមីណូដែលបង្កើតជាលំដាប់របស់វា។ជាមួយនឹងការអភិវឌ្ឍនៃការសំយោគគីមីដំណាក់កាលរឹង ការសំយោគគីមីនៃ peptides សកម្មផ្សេងៗបានរីកចម្រើនយ៉ាងខ្លាំង។ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយដោយសារតែសមាសធាតុស្មុគស្មាញនៃ peptide ដែលទទួលបានដោយការសំយោគដំណាក់កាលរឹងផលិតផលចុងក្រោយគួរតែត្រូវបានបន្សុតដោយវិធីសាស្ត្របំបែកដែលអាចទុកចិត្តបាន។វិធីសាស្ត្របន្សុតដែលប្រើជាទូទៅសម្រាប់ peptides រួមមាន ion exchange chromatography (IEC) និង reversed-phase-phase reversed-phase high performance liquid chromatography (RP-HPLC) ដែលមានគុណវិបត្តិនៃសមត្ថភាពផ្ទុកសំណាកទាប ការចំណាយខ្ពស់នៃមេឌៀបំបែក ភាពស្មុគស្មាញ និងថ្លៃដើមនៃឧបករណ៍បំបែក។ ល។ សម្រាប់ការបន្សុតយ៉ាងឆាប់រហ័សនៃ peptides ម៉ូលេគុលតូច (MW < 1 kDa) ករណីកម្មវិធីជោគជ័យត្រូវបានបោះពុម្ពផ្សាយពីមុនដោយ Santai Technologies ដែលក្នុងនោះ cartridge SepaFlash RP C18 ត្រូវបានប្រើសម្រាប់ការបន្សុតយ៉ាងឆាប់រហ័សនៃ thymopentin (TP-5) និង ផលិតផលគោលដៅបំពេញតម្រូវការត្រូវបានទទួល។
រូបភាពទី 1. អាស៊ីតអាមីណូទូទៅចំនួន 20 (ផលិតឡើងវិញពី www.bachem.com) ។
មានអាស៊ីតអាមីណូចំនួន 20 ប្រភេទដែលជាទូទៅនៅក្នុងសមាសភាពនៃ peptides ។អាស៊ីតអាមីណូទាំងនេះអាចបែងចែកជាក្រុមដូចខាងក្រោមនេះ យោងទៅតាមលក្ខណៈប៉ូល និងអាស៊ីតមូលដ្ឋានរបស់វា៖ មិនមែនប៉ូឡា (hydrophobic) ប៉ូល (មិនបញ្ចូល) អាសុីត ឬមូលដ្ឋាន (ដូចបង្ហាញក្នុងរូបភាពទី 1) ។នៅក្នុងលំដាប់ peptide ប្រសិនបើអាស៊ីតអាមីណូដែលបង្កើតជាលំដាប់គឺភាគច្រើនជាប៉ូល (ដូចដែលបានសម្គាល់ពណ៌ផ្កាឈូកក្នុងរូបភាពទី 1) ដូចជា Cysteine, Glutamine, Asparagine, Serine, Threonine, Tyrosine ជាដើម។ ប៉ូល និងរលាយក្នុងទឹក។ក្នុងអំឡុងពេលនៃនីតិវិធីបន្សុតសម្រាប់សំណាក peptide ប៉ូលដ៏រឹងមាំទាំងនេះដោយក្រូម៉ាទីតដំណាក់កាលបញ្ច្រាស បាតុភូតមួយហៅថាការដួលរលំដំណាក់កាល hydrophobic នឹងកើតឡើង (យោងលើកំណត់ចំណាំកម្មវិធីដែលបានបោះពុម្ពពីមុនដោយ Santai Technologies: Hydrophobic Phase Collapse, AQ Reversed Phase Chromatography Columns និងកម្មវិធីរបស់ពួកគេ)។បើប្រៀបធៀបជាមួយជួរឈរ C18 ធម្មតា ជួរឈរ C18AQ ដែលត្រូវបានកែលម្អគឺសមបំផុតសម្រាប់ការបន្សុតនៃសំណាករាងប៉ូលដ៏រឹងមាំ ឬ hydrophilic ។នៅក្នុងការប្រកាសនេះ peptide ប៉ូលដ៏រឹងមាំមួយត្រូវបានប្រើប្រាស់ជាគំរូ និងត្រូវបានបន្សុតដោយជួរឈរ C18AQ ។ជាលទ្ធផល ផលិតផលគោលដៅបំពេញតាមតម្រូវការត្រូវបានទទួល និងអាចប្រើប្រាស់ក្នុងការស្រាវជ្រាវ និងអភិវឌ្ឍន៍ដូចខាងក្រោម។
| ឧបករណ៍ | សេប៉ាបៀន™ម៉ាស៊ីន 2 | |||
| ប្រអប់ព្រីន | ប្រអប់ព្រីនធ័រ SepaFlash C18 RP 12 ក្រាម (ស៊ីលីកាស្វ៊ែរ, 20 - 45 μm, 100 Å, Order nunber：SW-5222-012-SP) | 12 ក្រាម SepaFlash C18AQ RP ប្រអប់ព្រីនធ័រ (ស៊ីលីកាស្វ៊ែរ, 20 - 45 μm, 100 Å, លេខបញ្ជាទិញ: SW-5222-012-SP(AQ)) | ||
| រលក | 254 nm, 220 nm | 214 nm | ||
| ដំណាក់កាលចល័ត | សារធាតុរំលាយ A: ទឹក។ សារធាតុរំលាយ B: acetonitrile | |||
| អត្រាលំហូរ | 15 មីលីលីត្រ / នាទី។ | 20 មីលីលីត្រ / នាទី។ | ||
| ការផ្ទុកគំរូ | 30 មីលីក្រាម | |||
| ជម្រាល | ពេលវេលា (CV) | សារធាតុរំលាយ B (%) | ពេលវេលា (នាទី) | សារធាតុរំលាយ B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | ៧.៥ | 18 | |
| ១២.៥ | 6 | ១៣.០ | 18 | |
| ១៦.៥ | 10 | ១៤.០ | 22 | |
| ១៩.០ | 41 | ១៥.៥ | 22 | |
| ២១.០ | 41 | ១៨.០ | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| ២២.០ | 87 | |||
| ២៩.០ | 87 | |||
លទ្ធផលនិងការពីភាក្សា
ដើម្បីប្រៀបធៀបការអនុវត្តការបន្សុតសម្រាប់គំរូ peptide រាងប៉ូលរវាងជួរឈរ C18 ធម្មតា និងជួរឈរ C18AQ យើងបានប្រើជួរឈរ C18 ធម្មតាសម្រាប់ការបន្សុតពន្លឺនៃគំរូជាការចាប់ផ្តើម។ដូចដែលបានបង្ហាញក្នុងរូបភាពទី 2 ដោយសារតែការដួលរលំនៃដំណាក់កាល hydrophobic នៃខ្សែសង្វាក់ C18 ដែលបណ្តាលមកពីសមាមាត្រទឹកខ្ពស់ គំរូត្រូវបានរក្សាទុកទទេនៅលើ cartridge C18 ធម្មតា ហើយត្រូវបានដកចេញដោយផ្ទាល់ដោយដំណាក់កាលចល័ត។ជាលទ្ធផល គំរូមិនត្រូវបានបំបែក និងបន្សុតប្រកបដោយប្រសិទ្ធភាព។
រូបភាពទី 2. ពន្លឺ chromatogram នៃគំរូនៅលើ cartridge C18 ធម្មតា។
បន្ទាប់មក យើងបានប្រើជួរឈរ C18AQ សម្រាប់ការបន្សុតពន្លឺនៃគំរូ។ដូចដែលបានបង្ហាញក្នុងរូបភាពទី 3 សារធាតុ peptide ត្រូវបានរក្សាទុកយ៉ាងមានប្រសិទ្ធភាពនៅលើជួរឈរហើយបន្ទាប់មកត្រូវបានដកចេញ។ផលិតផលគោលដៅត្រូវបានបំបែកចេញពីភាពមិនបរិសុទ្ធនៅក្នុងសំណាកឆៅ និងប្រមូល។បន្ទាប់ពីការធ្វើ lyophilization ហើយបន្ទាប់មកវិភាគដោយ HPLC ផលិតផលដែលបានបន្សុតមានភាពបរិសុទ្ធ 98.2% ហើយអាចត្រូវបានប្រើប្រាស់បន្ថែមទៀតសម្រាប់ការស្រាវជ្រាវ និងការអភិវឌ្ឍន៍ជំហានបន្ទាប់។
រូបភាពទី 3. ពន្លឺ chromatogram នៃគំរូនៅលើ cartridge C18AQ ។
សរុបសេចក្តីមក SepaFlash C18AQ RP flash cartridge រួមបញ្ចូលគ្នាជាមួយប្រព័ន្ធ flash chromatography SepaBean™ម៉ាស៊ីនអាចផ្តល់នូវដំណោះស្រាយលឿន និងមានប្រសិទ្ធភាពសម្រាប់ការបន្សុតនៃសំណាករាងប៉ូល ឬ hydrophilic ដ៏រឹងមាំ។
មានប្រអប់ព្រីនធ័រ SepaFlash C18AQ RP ដែលមានលក្ខណៈពិសេសខុសៗគ្នាពីបច្ចេកវិទ្យា Santai (ដូចបង្ហាញក្នុងតារាងទី 2)។
| លេខទំនិញ | ទំហំជួរឈរ | អត្រាលំហូរ (មីលីលីត្រ/នាទី) | សម្ពាធអតិបរមា (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5.4 ក្រាម។ | ៥-១៥ | ៤០០/២៧.៥ |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 ក្រាម។ | ១០-២៥ | ៤០០/២៧.៥ |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 ក្រាម។ | ១០-២៥ | ៤០០/២៧.៥ |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 ក្រាម។ | ១៥-៣០ | ៤០០/២៧.៥ |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 ក្រាម។ | ២៥-៥០ | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 ក្រាម។ | ៣០-៦០ | ៣០០/២០.៧ |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 ក្រាម។ | ៤០-៨០ | ៣០០/២០.៧ |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 ក្រាម។ | ៤០-៨០ | ២៥០/១៧.២ |
តារាងទី 2. SepaFlash C18AQ RP flash cartridges ។សមា្ភារៈវេចខ្ចប់៖ ស៊ីលីកាដែលជាប់ស្អិត C18(AQ) ស្វ៊ែរដែលមានប្រសិទ្ធភាពខ្ពស់, 20 - 45 μm, 100 Å។
សម្រាប់ព័ត៌មានបន្ថែមអំពីលក្ខណៈលម្អិតនៃម៉ាស៊ីន SepaBean™ ឬព័ត៌មានបញ្ជាទិញនៅលើប្រអប់ព្រីនធ័រស៊េរី SepaFlash សូមចូលមើលគេហទំព័ររបស់យើង។
ពេលវេលាបង្ហោះ៖ ថ្ងៃទី ១២-តុលា ២០១៨