Руи Хуан, Бо Сю
Қолданбалы R&D орталығы
Кіріспе
Ион алмасу хроматографиясы (IEC) - ерітіндіде иондық түрде берілген қосылыстарды бөлу және тазарту үшін әдетте қолданылатын хроматографиялық әдіс.Айнымалы иондардың әртүрлі заряд күйлеріне сәйкес IEC екі түрге бөлінеді, катион алмасу хроматографиясы және анион алмасу хроматографиясы.Катионалмастырғыш хроматографияда қышқылдық топтар бөлгіш ортаның бетімен байланысады.Мысалы, сульфон қышқылы (-SO3H) күшті катион алмасуда (SCX) жиі қолданылатын топ болып табылады, ол H+ диссоциациялайды және теріс зарядты -SO3- тобы осылайша ерітіндідегі басқа катиондарды адсорбциялай алады.Анион алмасу хроматографиясында сілтілі топтар бөлу ортасының бетіне байланысады.Мысалы, төрттік амин (-NR3OH, мұнда R көмірсутек тобы) әдетте күшті анион алмасуда (SAX) пайдаланылады, ол OH- диссоциациялайды және оң зарядталған топ -N+R3 ерітіндідегі басқа аниондарды адсорбциялай алады, нәтижесінде анион пайда болады. алмасу әсері.
Табиғи өнімдердің ішінде флавоноидтар жүрек-қан тамырлары ауруларының алдын алу және емдеудегі рөліне байланысты зерттеушілердің назарын аударды.Флавоноид молекулалары фенолды гидроксил топтарының болуына байланысты қышқыл болғандықтан, ион алмасу хроматографиясы осы қышқыл қосылыстарды бөлу және тазарту үшін әдеттегі қалыпты фаза немесе кері фазалық хроматографияға қосымша балама нұсқа болып табылады.Флэш-хроматографияда ион алмасу үшін жиі қолданылатын бөлу ортасы силикагель матрицасы болып табылады, онда ион алмасу топтары оның бетіне байланысады.Флеш хроматографияда ең жиі қолданылатын ион алмасу режимдері SCX (әдетте сульфон қышқылы тобы) және SAX (әдетте төрттік амин тобы).Santai Technologies компаниясының «Сілтілі қосылыстарды тазалауда SepaFlash күшті катионалмасу хроматографиялық бағандарын қолдану» тақырыбымен бұрын жарияланған қолданба жазбасында SCX бағандары сілтілі қосылыстарды тазарту үшін қолданылған.Бұл постта қышқылдық қосылыстарды тазартуда SAX бағандарын қолдануды зерттеу үшін үлгі ретінде бейтарап және қышқылдық стандарттар қоспасы пайдаланылды.
Эксперименттік бөлім
Сурет 1. SAX бөлу ортасының бетіне байланыстырылған стационарлық фазаның схемалық диаграммасы.
Бұл постта төрттік аминмен байланысқан кремнеземмен алдын ала оралған SAX бағаны пайдаланылды (1-суретте көрсетілгендей).Тазарту үшін үлгі ретінде хромон мен 2,4-дигидроксибензой қышқылының қоспасы пайдаланылды (2-суретте көрсетілгендей).Қоспа метанолда ерітілді және инжектор арқылы флэш-картриджге жүктелді.Жарқылмен тазалаудың эксперименттік қондырғысы 1-кестеде келтірілген.
Сурет 2. Үлгі қоспасындағы екі компоненттің химиялық құрылымы.
| Құрал | SepaBean™ машинасы Т | |||||
| Картридждер | 4 г SepaFlash стандартты сериялы флэш-картридж (тұрақты емес кремний диоксиді, 40 - 63 мкм, 60 Å, Тапсырыс нөмірі: S-5101-0004) | 4 г SepaFlash Bonded Series SAX флэш-картриджі (тұрақты емес кремний диоксиді, 40 - 63 мкм, 60 Å, Тапсырыс нөмірі: SW-5001-004-IR) | ||||
| Толқын ұзындығы | 254 нм (анықтау), 280 нм (бақылау) | |||||
| Мобильді кезең | А еріткіш: N-гексан | |||||
| В еріткіші: этилацетат | ||||||
| Ағын жылдамдығы | 30 мл/мин | 20 мл/мин | ||||
| Үлгіні жүктеу | 20 мг (А және В компонентінің қоспасы) | |||||
| Градиент | Уақыт (CV) | B еріткіш (%) | Уақыт (CV) | B еріткіш (%) | ||
| 0 | 0 | 0 | 0 | |||
| 1.7 | 12 | 14 | 100 | |||
| 3.7 | 12 | / | / | |||
| 16 | 100 | / | / | |||
| 18 | 100 | / | / | |||
Нәтижелер мен пікірталас
Біріншіден, үлгі қоспасы әдеттегі кремнеземмен алдын ала оралған қалыпты фазалық флэш-картриджмен бөлінген.3-суретте көрсетілгендей, үлгідегі екі компонент бірінен соң бірі картриджден шығарылды.Содан кейін үлгіні тазарту үшін SAX флэш-картриджі пайдаланылды.4-суретте көрсетілгендей, қышқылды В құрамдас бөлігі SAX картриджінде толығымен сақталды.Бейтарап А құрамдас бөлігі жылжымалы фазаның элюциясымен картриджден біртіндеп шығарылды.
Сурет 3. Қалыпты қалыпты фазалық картридждегі үлгінің флэш-хроматограммасы.
Сурет 4. SAX картриджіндегі үлгінің флэш-хроматограммасы.
3-сурет пен 4-суретті салыстыратын болсақ, А құрамдас бөлігі екі түрлі флэш-картриджде сәйкес келмейтін шың пішініне ие.Элюция шыңының компонентке сәйкес келетінін растау үшін SepaBean™ машинасының басқару бағдарламалық құралында орнатылған толық толқын ұзындығын сканерлеу мүмкіндігін пайдалана аламыз.Екі бөлудің тәжірибелік деректерін ашыңыз, хроматограммадағы уақыт осіндегі (CV) индикатор сызығына А құрамдас бөлігіне сәйкес келетін элюция шыңының ең жоғары нүктесіне және екінші ең жоғары нүктесіне және осы екеуінің толық толқын ұзындығы спектріне апарыңыз. нүктелер хроматограмманың астында автоматты түрде көрсетіледі (5-суретте және 6-суретте көрсетілгендей).Осы екі бөлудің толық толқын ұзындығы спектрінің деректерін салыстыра отырып, А құрамдас бөлігі екі тәжірибеде тұрақты жұтылу спектріне ие.А құрамдас бөлігінің екі түрлі флэш-картриджде сәйкес келмейтін шың пішіні болғандықтан, А құрамдас бөлігінде қалыпты фазалық картриджде және SAX картриджінде әртүрлі ұстайтын ерекше қоспа бар деген болжам бар.Демек, А құрамдас бөлігі мен осы екі флеш-картридждегі қоспа үшін элюция реті әртүрлі, нәтижесінде хроматограммалардағы шың пішіні сәйкес келмейді.
Сурет 5. А құрамдас бөлігінің толық толқын ұзындығы спектрі және қалыпты фазалық картриджмен бөлінген қоспа.
Сурет 6. A компонентінің толық толқын ұзындығы спектрі және SAX картриджімен бөлінген қоспа.
Жиналатын мақсатты өнім бейтарап құрамдас А болса, тазарту тапсырмасы үлгіні жүктегеннен кейін элюция үшін SAX картриджін тікелей пайдалану арқылы оңай аяқталады.Екінші жағынан, егер жиналатын мақсатты өнім қышқылды В құрамдас бөлігі болса, түсіру-шығару әдісін тәжірибелік қадамдардағы шамалы түзетулермен ғана қабылдауға болады: үлгі SAX картриджіне және бейтарап А құрамдас бөлігіне жүктелгенде. қалыпты фазалық органикалық еріткіштермен толығымен элюцияланды, жылжымалы фазаны құрамында 5% сірке қышқылы бар метанол ерітіндісіне ауыстырыңыз.Жылжымалы фазадағы ацетат иондары SAX картриджінің стационарлық фазасындағы төрттік амин иондары топтарымен байланысу үшін В компонентімен бәсекелеседі, осылайша мақсатты өнімді алу үшін В компонентін картриджден тазартады.Ион алмасу режимінде бөлінген үлгінің хроматограммасы 7-суретте көрсетілген.
Сурет 7. SAX картриджінде ион алмасу режимінде элюцияланған В компонентінің флэш-хроматограммасы.
Қорытындылай келе, қышқыл немесе бейтарап үлгіні әртүрлі тазарту стратегияларын пайдалана отырып, қалыпты фазалық картриджбен біріктірілген SAX картриджі арқылы жылдам тазартуға болады.Сонымен қатар, SepaBean™ машинасының басқару бағдарламалық құралына енгізілген толық толқын ұзындығын сканерлеу мүмкіндігінің көмегімен тазартылған фракциялардың тән жұтылу спектрін оңай салыстыруға және растауға болады, бұл зерттеушілерге элиюцияланған фракциялардың құрамы мен тазалығын тез анықтауға және осылайша жақсартуға көмектесті. жұмыс тиімділігі.
| Заттың нөмірі | Баған өлшемі | Ағын жылдамдығы (мл/мин) | Максималды қысым (psi/бар) |
| SW-5001-004-IR | 5,9 г | 10-20 | 400/27,5 |
| SW-5001-012-IR | 23 г | 15-30 | 400/27,5 |
| SW-5001-025-IR | 38 г | 15-30 | 400/27,5 |
| SW-5001-040-IR | 55 г | 20-40 | 400/27,5 |
| SW-5001-080-IR | 122 г | 30-60 | 350/24,0 |
| SW-5001-120-IR | 180 г | 40-80 | 300/20,7 |
| SW-5001-220-IR | 340 г | 50-100 | 300/20,7 |
| SW-5001-330-IR | 475 г | 50-100 | 250/17.2
|
2-кесте. SepaFlash Bonded Series SAX флэш-картридждері.Қаптама материалдары: ультра таза ретсіз SAX-байланысқан кремний диоксиді, 40 - 63 мкм, 60 Å.
SepaBean™ толық сипаттамалары туралы қосымша ақпарат алу үшінқұрылғыны немесе SepaFlash сериялы флэш-картридждерге тапсырыс беру туралы ақпаратты біздің веб-сайтқа кіріңіз.
Жіберу уақыты: 09 қараша 2018 ж