Руй Хуан, Бо Сю
Қолданбалы ҒЗТКЖ орталығы
Кіріспе
Пептид – амин қышқылдарынан тұратын қосылыс, олардың әрқайсысы оның ретін құрайтын аминқышқылдары қалдықтарының әртүрлі типтері мен тәртібіне байланысты бірегей физикалық және химиялық қасиеттерге ие.Қатты фазалық химиялық синтездің дамуымен әртүрлі белсенді пептидтердің химиялық синтезі үлкен жетістіктерге жетті.Дегенмен, қатты фазалық синтез арқылы алынған пептидтің күрделі құрамына байланысты соңғы өнімді сенімді бөлу әдістерімен тазарту керек.Пептидтер үшін жиі қолданылатын тазарту әдістеріне ион алмасу хроматографиясы (IEC) және кері фазалық жоғары өнімді сұйықтық хроматографиясы (RP-HPLC) жатады, олардың кемшіліктері төмен үлгіні жүктеу қабілеті, бөлу ортасының жоғары құны, күрделі және қымбат бөлу жабдықтары, Шағын молекулалы пептидтерді (МВт < 1 кДа) жылдам тазарту үшін бұрын Santai Technologies компаниясы сәтті қолдану нұсқасын жариялаған болатын, онда SepaFlash RP C18 картриджі тимопентинді (ТП-5) жылдам тазарту үшін пайдаланылды. талаптарға сай мақсатты өнім алынды.
Сурет 1. 20 қарапайым аминқышқылдары (www.bachem.com сайтынан көшірілген).
Пептидтердің құрамында жиі кездесетін аминқышқылдарының 20 түрі бар.Бұл аминқышқылдарды полярлығы мен қышқылдық-негіздік қасиетіне қарай келесі топтарға бөлуге болады: полюссіз (гидрофобты), полярлы (зарядсыз), қышқылдық немесе негіздік (1-суретте көрсетілгендей).Пептидтер тізбегінде, егер тізбекті құрайтын амин қышқылдары негізінен полярлы болса (1-суретте қызғылт түспен белгіленген), мысалы, цистеин, глутамин, аспарагин, серин, треонин, тирозин және т.б., онда бұл пептид күшті болуы мүмкін. полярлық және суда жақсы ериді.Бұл күшті полярлы пептид үлгілерін кері фазалық хроматография арқылы тазарту процедурасы кезінде гидрофобты фазаның құлдырауы деп аталатын құбылыс орын алады (Santai Technologies бұрын жарияланған қолданба ескертпесін қараңыз: Гидрофобты фазаның құлауы, AQ кері фазалық хроматография бағандары және олардың қолданбалары).Кәдімгі C18 бағандарымен салыстырғанда, жақсартылған C18AQ бағандары күшті полярлық немесе гидрофильді үлгілерді тазарту үшін ең қолайлы.Бұл постта күшті полярлы пептид үлгі ретінде пайдаланылды және C18AQ бағанымен тазартылды.Нәтижесінде талаптарға сәйкес келетін мақсатты өнім алынды және оны келесі зерттеулер мен тәжірибелерде қолдануға болады.
| Құрал | SepaBean™машина 2 | |||
| Картридждер | 12 г SepaFlash C18 RP флэш-картриджі (сфералық кремний диоксиді, 20 - 45 мкм, 100 Å, тапсырыс нөмірі: SW-5222-012-SP) | 12 г SepaFlash C18AQ RP флэш-картриджі (сфералық кремний диоксиді, 20 - 45 мкм, 100 Å, тапсырыс нөмірі: SW-5222-012-SP(AQ)) | ||
| Толқын ұзындығы | 254 нм, 220 нм | 214 нм | ||
| Мобильді кезең | Еріткіш A: Су В еріткіші: ацетонитрил | |||
| Ағын жылдамдығы | 15 мл/мин | 20 мл/мин | ||
| Үлгіні жүктеу | 30 мг | |||
| Градиент | Уақыт (CV) | B еріткіш (%) | Уақыт (мин) | B еріткіш (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
Нәтижелер мен пікірталас
Кәдімгі C18 бағанасы мен C18AQ бағанының арасындағы полярлы пептид үлгісін тазарту өнімділігін салыстыру үшін біз үлгіні жылдам тазалау үшін әдеттегі C18 бағанын қолдандық.2-суретте көрсетілгендей, C18 тізбегінің гидрофобты фазасының ыдырауына байланысты жоғары су қатынасы нәтижесінде үлгі қалыпты C18 картриджінде әрең ұсталды және жылжымалы фаза арқылы тікелей элюцияланды.Нәтижесінде үлгі тиімді түрде бөлінбеді және тазартылмады.
Сурет 2. Қалыпты C18 картриджіндегі үлгінің флэш-хроматограммасы.
Содан кейін үлгіні жарқылмен тазарту үшін C18AQ бағанын қолдандық.3-суретте көрсетілгендей, пептид бағанада тиімді түрде ұсталды, содан кейін элюцияланды.Мақсатты өнім шикі үлгідегі қоспалардан бөлініп, жиналды.Лиофилизациядан кейін және HPLC арқылы талданғаннан кейін тазартылған өнім 98,2% тазалыққа ие және келесі қадамдағы зерттеулер мен әзірлемелер үшін одан әрі пайдаланылуы мүмкін.
Сурет 3. C18AQ картриджіндегі үлгінің флэш-хроматограммасы.
Қорытындылай келе, SepaFlash C18AQ RP флэш-картриджі SepaBean флеш хроматография жүйесімен біріктірілген.™машина күшті полярлы немесе гидрофильді үлгілерді тазарту үшін жылдам және тиімді шешім ұсына алады.
SepaFlash C18AQ RP флэш-картридждерінің сериясы Santai Technology-тен әртүрлі сипаттамаларға ие (2-кестеде көрсетілгендей).
| Заттың нөмірі | Баған өлшемі | Ағын жылдамдығы (мл/мин) | Максималды қысым (psi/бар) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5,4 г | 5-15 | 400/27,5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 г | 10-25 | 400/27,5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 г | 10-25 | 400/27,5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 г | 15-30 | 400/27,5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 г | 25-50 | 350/24,0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 г | 30-60 | 300/20,7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 г | 40-80 | 300/20,7 |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 г | 40-80 | 250/17.2 |
Кесте 2. SepaFlash C18AQ RP флэш-картридждері.Орам материалдары: С18(AQ)-байланысқан жоғары тиімді сфералық кремний диоксиді, 20 - 45 мкм, 100 Å.
SepaBean™ машинасының егжей-тегжейлі сипаттамалары немесе SepaFlash сериялы флэш-картридждеріне тапсырыс беру туралы қосымша ақпарат алу үшін біздің веб-сайтқа кіріңіз.
Хабарлама уақыты: 12 қазан 2018 ж