Хоншенг Ванг, Бо Ху
Өтініш R & D Center
Кіріспе
Стационарлық фазалық және мобильді фазаның салыстырмалы полярлықтарына сәйкес, сұйық хроматографияны қалыпты фазалық хроматографияға (NPC) және кері фазалық хроматографияға (RPC) бөлуге болады. RPC үшін мобильді фазаның полярлығы стационарлық фазадан әлдеқайда күшті. RPC сұйық хроматографиялық бөлу режимдерінде оның жоғары тиімділігіне, дұрыс шешуге және таза сақтау механизміне байланысты ең көп қолданысқа айналды. Сондықтан ЖЗҚ әртүрлі полярларды, полярларды, көмірсулардың, стероидтарды, стероидтарды, стероидтарды, стероидтарды, стероидтар, ақуыздар, ақуыздар, ақуыздар және т.б., ең көп қолданылатын стационарлық кезеңдер, оның ішінде әр түрлі функционалды топтар, соның ішінде C18, C8, C4, Фенил, циано, амин және т.б. Осы байланысқан функционалды топтардың ішінде ең көп қолданылатын функционалды топтардың бірі - C18. Қазіргі уақытта RPC-тің 80% -дан астамы C18 байланыс фазасын қолданады деп есептеледі. Сондықтан C18 хроматографиялық баған әр зертхананың әмбебап бағанына айналды.
C18 бағанын өте кең қолданбаларда қолдануға болады, бірақ өте полярлы немесе жоғары гидрофильді болып табылатын кейбір үлгілер үшін C18 бағандары осындай үлгілерді тазарту үшін пайдаланылған кезде проблемалар болуы мүмкін. RPC-де жиі қолданылатын электродтар еріткіштерін олардың полярлығына сәйкес тапсырыс беруге болады: су <methanol <acetonitrile <ethanol <tetrahydrofuran <изопропанол. Осы үлгілер үшін (күшті полярлы немесе жоғары гидрофильді) бағанада жақсы ұстап тұруды қамтамасыз ету, мобильді фаза ретінде сулы жүйенің көп бөлігін пайдалану қажет. Алайда, таза су жүйесін (таза суды немесе таза тұзды, оның ішінде таза суды немесе таза тұзды) пайдалану кезінде, C18 бағанының стационарлық фазасындағы ұзын көміртек тізбегі суды болдырмайды және бір-бірімен араласпайды, нәтижесінде бағанның сақтық сыйымдылығы азаяды немесе тіпті сақтандырылмайды. Бұл құбылыс «гидрофобты фазалық күйреу» деп аталады (1-суреттің сол жағында көрсетілгендей). Егер баған метанол немесе ацетонитрильді органикалық еріткіштермен жуылған кезде, бұл жағдай қайтымды болып қалады, ол әлі де бағанға зақым келтіруі мүмкін. Сондықтан, бұл жағдайдың алдын алу керек.
1-сурет. C18 бағанындағы кремний гель бетіне байланыстырылған фазалардың схемалық диаграммасы (сол жақта) және C18AQ бағанында (оң жақта).
Жоғарыда аталған мәселелерді шешу үшін хроматографиялық орау материалдарын өндірушілер техникалық жетілдірулер жүргізді. Осы жетілдірулердің бірі кремний матрицасының бетінде бірнеше модификациялар жасау болып табылады, мысалы, кремний гельінің гельінің гельінің гидрогрикасы гельдің гидрофилді гидрофильді гидрофильді гидрофиялық топтарды енгізу сияқты. Сонымен, кремний бетіне C18 тізбектері өте сулы жағдайда толығымен ұзартылуы мүмкін, ал гидрофобты фазалық жағынан құлап кетуге болмайды. Бұл өзгертілген C18 бағандары сулы С18 бағандары, атап айтқанда C18AQ бағандары, яғни сулы электроуция шарттары үшін жасалған және 100% сулы жүйеге шыдай алады. C18AQ бағандары күшті поляр қосылыстарын, соның ішінде органикалық қышқылдарды, пептидтер, нуклеозидтер мен суда еритін дәрумендерді бөлу және тазарту кезінде кеңінен қолданылады.
Тұзсыздандыру - бұл үлгілерге арналған C18AQ бағандарының бірі, олар үлгілерге немесе буферлік компоненттерді сынамалардағы, олар үшін тұз бен буферлік компоненттерді кетіреді, бұл үлгіні қолдануға мүмкіндік береді. Бұл лауазымда жарқын көк FCF күшті полярлығы бар, C18AQ бағанында үлгі және тазартылған. Үлгі еріткішті органикалық еріткіш алмастырды, осылайша «Буферлі ерітіндіс» ерітіндісімен ауыстырылды, осылайша келесі айналмалы булануды жеңілдетеді, сонымен қатар еріткіштер мен жұмыс уақытын үнемдейді. Сонымен қатар, үлгінің тазалығы үлгінің ішіндегі қоспаларды алу арқылы жақсарды.
Тәжірибелік бөлім
Сурет 2. Үлгідің химиялық құрылымы.
Бриллиантты көк FCF осы лауазымдағы үлгі ретінде пайдаланылды. Үлгі үлгілерінің тазалығы 86%, ал үлгінің химиялық құрылымы 2-суретте көрсетілген. Үлгі шешімін дайындау үшін, 300 мг ұнтақты көк фкфтің қатты беріктігі 1 м-нан 36По4 буферлі ерітіндіде ерітілді және толығымен айқын шешімге айналды. Содан кейін үлгі шешімі инжектор арқылы Flash бағанына енгізілді. Флэшті тазартудың тәжірибелік қондырғысы 1-кестеде келтірілген.
| Аспап | SEPABEAN ™ машинасы2 | |||
| Картридждер | 12 г SEPAFLASH C18 RP флэш-картриджі (сфералық кремний, 20 - 45 мкм, 100 å, тапсырыс нөмірі: SW-5222-012-SP) | 12 г сепафлаш C18AQ RP флэш-картриджі (сфералық кремний, 20 - 45 мкм, 100) тапсырыс нөмірі: SW-5222-012-SP (AQ))) | ||
| Толқын ұзындығы | 254 нм | |||
| Ұялы фаза | Ас: Су: су Ерітінді В: метанол | |||
| Ағымдық мөлшерлеме | 30 мл / мин | |||
| Жүктемені жүктеу | 300 мг (бриллиантты көк фКФ тазалығы 86%) | |||
| Градиандық | Уақыт (CV) | В (%) ерітіндісі | Уақыт (CV) | В (%) ерітіндісі |
| 0 | 10 | 0 | 0 | |
| 10 | 10 | 10 | 0 | |
| 10.1 | 100 | 10.1 | 100 | |
| 17.5 | 100 | 17.5 | 100 | |
| 17.6 | 10 | 17.6 | 0 | |
| 22.6 | 10 | 22.6 | 0 | |
Нәтижелер мен пікірталас
Сепафлаш C18AQ RP флэш-картриджі үлгіні тұзсыздандыру және тазарту үшін пайдаланылды. Қандай қадам градиент пайдаланылды, оның ішінде таза су атудың басында мобильді кезең ретінде пайдаланылған және 10 баған көлемі үшін (CV) жүгірді. 3-суретте көрсетілгендей, таза суды мобильді фаза ретінде пайдалану кезінде, үлгі флэш картриджінде толығымен сақталды. Әрі қарай, мобильді фазадағы метанол 100% дейін, ал градиент 7,5 дана болды. Үлгі 11,5-тен 13,5 дюйм-ден 13,5 дана болды. Жиналған фракцияларда үлгі ерітіндісі NAH2PO4 буферінің шешімінен метанолға ауыстырылды. Жоғары сулы ерітіндісімен салыстырғанда метанол келесі қадамда айналмалы булану арқылы алып тастау оңай болды, бұл келесі зерттеулерге жеңілдетеді.
3-сурет. C18AQ картриджіндегі үлгінің хроматограммасы.
C18AQ картриджінің сақталуын және тұрақты C18 картриджін салыстыру үшін, күшті полярлық сынағы үшін, параллельді салыстыру сынағы жүргізілді. Sepaflash C18 RP флэш-картриджі пайдаланылды және үлгінің үлгісі үшін флэш хроматограмы 4-суретте көрсетілген. Тұрақты C18 картридждері үшін ең жоғары төзімді сулы фазалық арақатынас 90% құрайды. Сондықтан бастау градиенті 90% суда 10% метанолда орнатылды. 4-суретте көрсетілгендей, жоғары сулы қатынастардан туындайтын C18 тізбегінің гидрофобты фазаларының құлдырауына байланысты, үлгі C18 картриджінде әрең сақталған және оны тікелей ұялы фаза арқылы шығарды. Нәтижесінде іріктеу немесе тазарту үлгісінің жұмысын аяқтау мүмкін емес.
Сурет 4. Үлгі C18 картриджіндегі үлгінің флэш-хроматограммасы.
Сызықтық градиеньмен салыстырғанда, қадам градиентінің қолданылуы келесі артықшылықтарға ие:
1. Үлгіні тазарту үшін еріткіш пайдалану және жұмыс уақыты қысқарады.
2. Мақсатты өнім өткір шыңмен толықтырылады, бұл жиналған фракциялардың көлемін азайтады және осылайша келесі айналмалы булануды, сондай-ақ уақытты үнемдейді.
3. Жиналған өнім метанолда, оны булану оңай, сондықтан кептіру уақыты қысқарады.
Қорытындылай келе, полярлы немесе жоғары гидрофильді, бұл полярлы немесе жоғары гидрофильді, SEPAFLASH C18AQ RP Flash картридждері дайындалған флэш-хроматография жүйесімен біріктіреді Sepabean ™ машинасы жылдам және тиімді шешім ұсына алады.
Сепафлаш байланысы туралы C18 RP Flash картридждері туралы
SAPAFLASH C18AQ C18AQ RP сериялары бар, Santai Technology әр түрлі техникалық сипаттамалары бар (2-кестеде көрсетілгендей).
| Элемент нөмірі | Баған өлшемі | Ағымдық мөлшерлеме (ML / MIN) | Max.pressure (PSI / BAR) |
| SW-5222-004-SP (AQ) | 5.4 г | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP (AQ) | 20 г | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP (AQ) | 33 г | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP (AQ) | 48 г | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP (AQ) | 105 г | 25-50 | 350 / 24.0 |
| SW-5222-120-SP (AQ) | 155 г | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP (AQ) | 300 г | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP (AQ) | 420 г | 40-80 | 250 / 17.2 |
Кесте 2. Sepaflash C18AQ RP флэш картридждері.
Қойма материалдары: жоғары тиімділігі жоғары сфералық C18 (AQ) - 100 - 45 мкм, 100 åå
Логика (2-кестеде көрсетілгендей).
POST уақыты: AUG-27-2018