Rui Huang, Bo Xu
განაცხადის R&D ცენტრი
შესავალი
პეპტიდი არის ამინომჟავებისგან შედგენილი ნაერთი, რომელთაგან თითოეულს აქვს უნიკალური ფიზიკური და ქიმიური თვისებები ამინომჟავების ნარჩენების სხვადასხვა ტიპისა და რიგის გამო, რომელიც წარმოადგენს მის თანმიმდევრობას. მყარი ფაზის ქიმიური სინთეზის განვითარებით, სხვადასხვა აქტიური პეპტიდების ქიმიურმა სინთეზმა დიდი პროგრესი განიცადა. ამასთან, მყარი ფაზის სინთეზით მიღებული პეპტიდის რთული შემადგენლობის გამო, საბოლოო პროდუქტი უნდა გაწმენდილი იყოს საიმედო განცალკევების მეთოდებით. პეპტიდების საყოველთაოდ გამოყენებული გამწმენდის მეთოდები მოიცავს იონური გაცვლის ქრომატოგრაფიას (IEC) და გადაკეთებული ფაზის მაღალი ხარისხის თხევადი ქრომატოგრაფიას (RP-HPLC), რომელთაც აქვთ დაბალი ნიმუშის დატვირთვის სიმძლავრის უარყოფითი მხარეები, განცალკევებული მედიის მაღალი ღირებულება, რთული და ძვირადღირებული განცალკევების მოწყობილობა და SANTAI– ის სწრაფი განწმენდისათვის (MW <1 1 KDA), ტექნოლოგიები, რომლებშიც იქნა გამოყენებული Sepaflash RP C18 კარტრიჯი თიმოპენტინის (TP-5) სწრაფი გაწმენდისა და სამიზნე პროდუქტის შეხვედრის მოთხოვნები.
სურათი 1. 20 საერთო ამინომჟავები (რეპროდუცირებულია www.bachem.com– დან).
არსებობს 20 სახის ამინომჟავა, რომლებიც გავრცელებულია პეპტიდების შემადგენლობაში. ეს ამინომჟავები შეიძლება დაიყოს შემდეგ ჯგუფებად მათი პოლარობისა და მჟავების ბაზის თვისებების მიხედვით: არაპოლარული (ჰიდროფობიური), პოლარული (დაუსაბუთებელი), მჟავე ან ძირითადი (როგორც ეს მოცემულია ნახაზზე 1). პეპტიდური თანმიმდევრობით, თუ ამინომჟავები, რომლებიც ქმნიან თანმიმდევრობას, ძირითადად პოლარულია (როგორც ეს აღინიშნება ფიგურაში 1), მაგალითად, ცისტეინი, გლუტამინი, ასპარაგინი, სეროინი, ტრეონინი, ტიროზინი და ა.შ., მაშინ ამ პეპტიდს შეიძლება ჰქონდეს ძლიერი პოლიტიკა და წყალში ძალიან ხსნადი იყოს. ამ ძლიერი პოლარული პეპტიდური ნიმუშების განწმენდის პროცედურის დროს, შეცვლილი ფაზის ქრომატოგრაფიით, მოხდება ფენომენი, სახელწოდებით ჰიდროფობიური ფაზის კოლაფსი (იხილეთ ადრე გამოქვეყნებული განაცხადის შენიშვნა Santai Technologies: Hydrophobic ფაზის ჩამონგრევა, AQ შეცვლილი ფაზის ქრომატოგრაფიის სვეტები და მათი პროგრამები). რეგულარულ C18 სვეტებთან შედარებით, გაუმჯობესებული C18AQ სვეტები ყველაზე შესაფერისია ძლიერი პოლარული ან ჰიდროფილური ნიმუშების გასუფთავებისთვის. ამ პოსტში, ძლიერი პოლარული პეპტიდი იქნა გამოყენებული, როგორც ნიმუში და გაწმენდილი იქნა C18AQ სვეტით. შედეგად, სამიზნე პროდუქტის დაკმაყოფილება მოთხოვნებს იქნა მიღებული და შეიძლება გამოყენებულ იქნას შემდეგ კვლევასა და განვითარებაში.
| ხელსაწყო | სეფაბანი-მანქანა 2 | |||
| კარტრიჯები | 12 გ Sepaflash C18 RP Flash ვაზნა (სფერული სილიკა, 20-45 μm, 100 Å, შეკვეთა Nunber ： SW-5222-012-SP) | 12 გ Sepaflash C18AQ RP Flash კარტრიჯი (სფერული სილიკა, 20-45 μm, 100 Å, შეკვეთის ნომერი ： SW-5222-012-SP (aq))) | ||
| ტალღის სიგრძე | 254 ნმ, 220 ნმ | 214 ნმ | ||
| მობილური ფაზა | გამხსნელი ა: წყალი გამხსნელი ბ: აცეტონიტრილი | |||
| ნაკადის სიჩქარე | 15 მლ/წთ | 20 მლ/წთ | ||
| ნიმუშის დატვირთვა | 30 მგ | |||
| გრადიენტი | დრო (CV) | გამხსნელი B (%) | დრო (წთ) | გამხსნელი B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
შედეგები და დისკუსია
პოლარული პეპტიდური ნიმუშის განწმენდის შესრულების შესადარებლად რეგულარულ C18 სვეტსა და C18AQ სვეტს შორის, ჩვენ გამოვიყენეთ რეგულარული C18 სვეტი ნიმუშის ფლეშ განწმენდის მიზნით, როგორც დაწყება. როგორც ნაჩვენებია 2 - ში, მაღალი წყალხსნარით გამოწვეული C18 ჯაჭვების ჰიდროფობიური ფაზის ჩამონგრევის გამო, ნიმუში ძლივს შეინარჩუნა რეგულარულ C18 ვაზნაზე და პირდაპირ გამოირჩეოდა მობილური ფაზით. შედეგად, ნიმუში არ იყო ეფექტურად განცალკევებული და გაწმენდილი.
სურათი 2. ნიმუშის ფლეშ ქრომატოგრამა რეგულარულ C18 ვაზნაზე.
შემდეგი, ჩვენ გამოვიყენეთ C18AQ სვეტი ნიმუშის ფლეშ განწმენდისთვის. როგორც ნაჩვენებია ნახაზში 3, პეპტიდი ეფექტურად შეინარჩუნა სვეტზე და შემდეგ გამოირჩეოდა. სამიზნე პროდუქტი გამოეყო ნედლი ნიმუშის მინარევებისგან და შეგროვდა. ლიოფილიზაციის შემდეგ და შემდეგ HPLC– ს მიერ გაანალიზებული, გაწმენდილი პროდუქტს აქვს სიწმინდე 98.2% და მისი გამოყენება შემდგომში შეიძლება გამოყენებულ იქნას შემდეგი ნაბიჯის კვლევისა და განვითარებისთვის.
სურათი 3. ნიმუშის ფლეშ ქრომატოგრამა C18AQ კარტრიჯზე.
დასკვნის სახით, Sepaflash C18AQ RP Flash კარტრიჯი შერწყმულია Flash Chromatography System Sepabean-მანქანას შეუძლია შესთავაზოს სწრაფი და ეფექტური ხსნარი ძლიერი პოლარული ან ჰიდროფილური ნიმუშების განწმენდის მიზნით.
არსებობს Sepaflash C18AQ RP Flash ვაზნების სერია, რომელსაც აქვს სხვადასხვა სპეციფიკაციები Santai Technology– დან (როგორც ეს მოცემულია ცხრილი 2 - ში).
| პუნქტის ნომერი | სვეტის ზომა | ნაკადის სიჩქარე (მლ/წთ) | Max.Pressure (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP (aq) | 5.4 გ | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP (aq) | 20 გ | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP (aq) | 33 გ | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP (aq) | 48 გ | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP (aq) | 105 გ | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP (aq) | 155 გ | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP (aq) | 300 გ | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP (aq) | 420 გ | 40-80 | 250/17.2 |
ცხრილი 2. Sepaflash C18AQ RP Flash Cartridges. შეფუთვის მასალები: მაღალი ეფექტურობის სფერული C18 (aq)-დამარცხებული სილიკა, 20-45 μm, 100.
დამატებითი ინფორმაციისთვის Sepabean ™ აპარატის დეტალური სპეციფიკაციების შესახებ, ან შეკვეთის შესახებ ინფორმაცია Sepaflash სერიის Flash Cartridges– ზე, ეწვიეთ ჩვენს ვებ - გვერდს.
პოსტის დრო: -12-2018 ოქტომბერი