რუი ჰუანგ, ბო ქსუ
განაცხადის R&D ცენტრი
შესავალი
პეპტიდი არის ამინომჟავებისგან შემდგარი ნაერთი, რომელთაგან თითოეულს აქვს უნიკალური ფიზიკური და ქიმიური თვისებები მისი თანმიმდევრობის შემადგენელი ამინომჟავების ნარჩენების სხვადასხვა ტიპებისა და რიგის გამო.მყარი ფაზის ქიმიური სინთეზის განვითარებით, სხვადასხვა აქტიური პეპტიდების ქიმიურმა სინთეზმა დიდი პროგრესი განიცადა.თუმცა, მყარი ფაზის სინთეზით მიღებული პეპტიდის რთული შემადგენლობის გამო, საბოლოო პროდუქტი უნდა გაიწმინდოს საიმედო გამოყოფის მეთოდებით.პეპტიდებისთვის ხშირად გამოყენებული გამწმენდი მეთოდები მოიცავს იონგაცვლის ქრომატოგრაფიას (IEC) და შებრუნებული ფაზის მაღალი ხარისხის თხევადი ქრომატოგრაფიას (RP-HPLC), რომლებსაც აქვთ ნაკლოვანებები: ნიმუშის დაბალი დატვირთვის სიმძლავრე, გამყოფი მედიის მაღალი ღირებულება, რთული და ძვირადღირებული გამოყოფის მოწყობილობა. და ა.შ. მცირე მოლეკულური პეპტიდების სწრაფი გაწმენდისთვის (MW < 1 kDa), წარმატებული განაცხადის შემთხვევა ადრე გამოქვეყნდა Santai Technologies-ის მიერ, რომელშიც SepaFlash RP C18 ვაზნა გამოიყენებოდა თიმოპენტინის (TP-5) სწრაფი გაწმენდისთვის. მიღებული იქნა მოთხოვნილებების შესაბამისი სამიზნე პროდუქტი.
სურათი 1. 20 ჩვეულებრივი ამინომჟავა (რეპროდუცირებულია www.bachem.com-დან).
პეპტიდების შემადგენლობაში გავრცელებულია ამინომჟავების 20 სახეობა.ეს ამინომჟავები შეიძლება დაიყოს შემდეგ ჯგუფებად მათი პოლარობისა და მჟავა-ტუტოვანი თვისებების მიხედვით: არაპოლარული (ჰიდროფობიური), პოლარული (დაუხტვილი), მჟავე ან ძირითადი (როგორც ნაჩვენებია სურათზე 1).პეპტიდურ თანმიმდევრობაში, თუ თანმიმდევრობის შემადგენელი ამინომჟავები ძირითადად პოლარულია (როგორც ვარდისფერში მონიშნულია სურათზე 1), როგორიცაა ცისტეინი, გლუტამინი, ასპარაგინი, სერინი, ტრეონინი, ტიროზინი და ა.შ., მაშინ ამ პეპტიდს შეიძლება ჰქონდეს ძლიერი პოლარობა და წყალში ხსნადი.ამ ძლიერი პოლარული პეპტიდის ნიმუშების შებრუნებული ფაზის ქრომატოგრაფიით გაწმენდის პროცედურის დროს მოხდება ფენომენი, რომელსაც ეწოდება ჰიდროფობიური ფაზის კოლაფსი (იხილეთ Santai Technologies-ის ადრე გამოქვეყნებული განაცხადის შენიშვნა: Hydrophobic Phase Collapse, AQ Reversed Phase Chromatography Columns and their Applications).ჩვეულებრივ C18 სვეტებთან შედარებით, გაუმჯობესებული C18AQ სვეტები ყველაზე შესაფერისია ძლიერი პოლარული ან ჰიდროფილური ნიმუშების გასაწმენდად.ამ პოსტში, ძლიერი პოლარული პეპტიდი იყო გამოყენებული, როგორც ნიმუში და გაწმენდილი იქნა C18AQ სვეტით.შედეგად, მიღებული იქნა სამიზნე პროდუქტი, რომელიც აკმაყოფილებს მოთხოვნებს და შეიძლება გამოყენებულ იქნას შემდგომ კვლევებსა და განვითარებაში.
| ინსტრუმენტი | SepaBean™მანქანა 2 | |||
| ვაზნები | 12 გ SepaFlash C18 RP ფლეშ ვაზნა (სფერული სილიციუმი, 20 - 45 μm, 100 Å, შეკვეთის ნომერი: SW-5222-012-SP) | 12 გ SepaFlash C18AQ RP ფლეშ კარტრიჯი (სფერული სილიციუმი, 20 - 45 μm, 100 Å, შეკვეთის ნომერი: SW-5222-012-SP(AQ)) | ||
| ტალღის სიგრძე | 254 ნმ, 220 ნმ | 214 ნმ | ||
| მობილური ფაზა | გამხსნელი A: წყალი გამხსნელი B: აცეტონიტრილი | |||
| Დინების სიჩქარე | 15 მლ/წთ | 20 მლ/წთ | ||
| ნიმუშის ჩატვირთვა | 30 მგ | |||
| გრადიენტი | დრო (CV) | გამხსნელი B (%) | დრო (წთ) | გამხსნელი B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
Შედეგები და დისკუსია
იმისათვის, რომ შევადაროთ პოლარული პეპტიდის ნიმუშის გამწმენდი ეფექტურობა ჩვეულებრივ C18 სვეტსა და C18AQ სვეტს შორის, ჩვენ გამოვიყენეთ ჩვეულებრივი C18 სვეტი ნიმუშის ფლეშ გამწმენდისთვის, როგორც დასაწყისი.როგორც სურათზე 2-ზეა ნაჩვენები, C18 ჯაჭვების ჰიდროფობიური ფაზის კოლაფსის გამო, რომელიც გამოწვეულია მაღალი წყლიანი თანაფარდობით, ნიმუში ძლივს ინახებოდა ჩვეულებრივ C18 ვაზნაზე და პირდაპირ გამოირეცხებოდა მობილური ფაზაში.შედეგად, ნიმუში არ იყო ეფექტურად გამოყოფილი და გაწმენდილი.
სურათი 2. ნიმუშის ფლეშ ქრომატოგრამა ჩვეულებრივ C18 ვაზნაზე.
შემდეგი, ჩვენ გამოვიყენეთ C18AQ სვეტი ნიმუშის ფლეშ გასაწმენდად.როგორც ნაჩვენებია სურათზე 3, პეპტიდი ეფექტურად ინახებოდა სვეტზე და შემდეგ გამოირეცხებოდა.სამიზნე პროდუქტი გამოეყო ნედლი ნიმუშის მინარევებისაგან და შეგროვდა.ლიოფილიზაციის შემდეგ და შემდეგ გაანალიზებულია HPLC-ით, გაწმენდილი პროდუქტი აქვს 98.2% სისუფთავეს და შეიძლება შემდგომ გამოყენებული იქნას შემდგომი საფეხურის კვლევისა და განვითარებისთვის.
სურათი 3. ნიმუშის ფლეშ ქრომატოგრამა C18AQ ვაზნაზე.
დასასრულს, SepaFlash C18AQ RP ფლეშ კარტრიჯი კომბინირებულია ფლეშ ქრომატოგრაფიის სისტემასთან SepaBean™მანქანას შეუძლია შესთავაზოს სწრაფი და ეფექტური გადაწყვეტა ძლიერი პოლარული ან ჰიდროფილური ნიმუშების გასაწმენდად.
არსებობს SepaFlash C18AQ RP ფლეშ ვაზნების სერია Santai Technology-სგან განსხვავებული სპეციფიკაციებით (როგორც ნაჩვენებია ცხრილში 2).
| პუნქტის ნომერი | სვეტის ზომა | Დინების სიჩქარე (მლ/წთ) | მაქს.წნევა (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5,4 გ | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 გ | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 გ | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 გ | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 გ | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 გ | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 გ | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 გ | 40-80 | 250/17.2 |
ცხრილი 2. SepaFlash C18AQ RP ფლეშ ვაზნები.შესაფუთი მასალები: მაღალი ეფექტურობის სფერული C18(AQ) შეკრული სილიციუმი, 20 - 45 μm, 100 Å.
დამატებითი ინფორმაციისთვის SepaBean™ აპარატის დეტალური სპეციფიკაციების ან SepaFlash სერიის ფლეშ ვაზნების შესახებ ინფორმაციის შეკვეთის შესახებ, გთხოვთ, ეწვიოთ ჩვენს ვებგვერდს.
გამოქვეყნების დრო: ოქტ-12-2018