Hongcheng Wang, Bo Xu
განაცხადის R&D ცენტრი
შესავალი
სტაციონარული ფაზისა და მობილური ფაზის ფარდობითი პოლარობის მიხედვით, თხევადი ქრომატოგრაფია შეიძლება დაიყოს ნორმალურ ფაზაში ქრომატოგრაფიად (NPC) და შეცვლილი ფაზის ქრომატოგრაფია (RPC). RPC– სთვის, მობილური ფაზის პოლარობა უფრო ძლიერია, ვიდრე სტაციონარული ფაზა. RPC გახდა ყველაზე ფართოდ გამოყენებული თხევადი ქრომატოგრაფიის განცალკევების რეჟიმებში მისი მაღალი ეფექტურობის, კარგი რეზოლუციის და მკაფიო შეკავების მექანიზმის გამო. ამრიგად, RPC შესაფერისია სხვადასხვა პოლარული ან არაპოლარული ნაერთების განცალკევებისა და გაწმენდისა და გაწმენდის ჩათვლით, მათ შორის ალკალოიდები, ნახშირწყლები, ცხიმოვანი მჟავები, სტეროიდები, ნუკლეინის მჟავები, ამინომჟავები, პეპტიდები, ცილები და ა.შ., RPC– ში, ყველაზე ხშირად გამოყენებული სტაციონარული ფაზა, C18, მათ შორისაა C18, მათ შორისაა C18, მათ შორის C18, მათ შორის C18, მათ შორის C18, მათ შორის C18, მათ შორის C18, მათ შორის C18, მათ შორის C18, მათ შორის C18, მათ შორის C18. ციანო, ამინო და ა.შ. ამ შემაერთებელ ფუნქციურ ჯგუფებს შორის, ყველაზე ფართოდ გამოყენებული არის C18. დადგენილია, რომ RPC- ის 80% -ზე მეტი ახლა იყენებს C18 მიბმული ფაზას. ამიტომ C18 ქრომატოგრაფიის სვეტი გახდა აუცილებელი უნივერსალური სვეტი ყველა ლაბორატორიისთვის.
მიუხედავად იმისა, რომ C18 სვეტი შეიძლება გამოყენებულ იქნას აპლიკაციების ძალიან ფართო სპექტრში, ზოგი ნიმუშისთვის, რომელიც ძალიან პოლარული ან უაღრესად ჰიდროფილურია, რეგულარულ C18 სვეტებს შეიძლება ჰქონდეთ პრობლემები ამგვარი ნიმუშების გასასუფთავებლად. RPC– ში, ჩვეულებრივ, გამოყენებული გამხსნელების შეკვეთა შესაძლებელია მათი პოლარობის მიხედვით: წყალი <მეტანოლი <აცეტონიტრილი <ეთანოლი <Tetrahydrofuran <იზოპროპანოლი. ამ ნიმუშებისთვის სვეტზე კარგი შეკავების უზრუნველსაყოფად (ძლიერი პოლარული ან უაღრესად ჰიდროფილური), წყლის სისტემის მაღალი წილი აუცილებელია, როგორც მობილური ფაზა. ამასთან, სუფთა წყლის სისტემის (სუფთა წყლის ან სუფთა მარილის ხსნარის ჩათვლით), როგორც მობილური ფაზის გამოყენებისას, C18 სვეტის სტაციონარული ფაზის გრძელი ნახშირბადის ჯაჭვი ტენდენციაა თავიდან აიცილოს წყალი და აურიოთ ერთმანეთთან, რის შედეგადაც ხდება სვეტის შენახვის სიმძლავრის მყისიერი შემცირება ან თუნდაც შეკავება. ამ ფენომენს ეწოდება "ჰიდროფობიური ფაზის კოლაფსი" (როგორც ეს ნაჩვენებია ნახაზის 1 მარცხენა ნაწილში). მიუხედავად იმისა, რომ ეს სიტუაცია შექცევადია, როდესაც სვეტი გარეცხილია ორგანული გამხსნელებით, როგორიცაა მეტანოლი ან აცეტიონიტრილი, მან მაინც შეიძლება გამოიწვიოს სვეტის დაზიანება. აქედან გამომდინარე, აუცილებელია თავიდან აიცილოთ ეს სიტუაცია.
სურათი 1. სილიციუმის გელის ზედაპირზე შემაერთებელი ფაზების სქემატური დიაგრამა რეგულარულად C18 სვეტში (მარცხნივ) და C18AQ სვეტში (მარჯვნივ).
ზემოხსენებული პრობლემების გადასაჭრელად, ქრომატოგრაფიული შეფუთვის მასალების მწარმოებლებმა გააკეთეს ტექნიკური გაუმჯობესება. ერთ -ერთი ასეთი გაუმჯობესება არის სილიციუმის მატრიცის ზედაპირზე გარკვეული ცვლილებების შეტანა, მაგალითად, ჰიდროფილური ციანო ჯგუფების დანერგვა (როგორც ეს მოცემულია ნახაზის 1 ნაწილში), რათა სილიციუმის გელის ზედაპირი უფრო ჰიდროფილური გახდეს. ამრიგად, სილიციუმის ზედაპირზე C18 ჯაჭვები შეიძლება სრულად გაგრძელდეს უაღრესად წყალხსნარ პირობებში და თავიდან აიცილოთ ჰიდროფობიური ფაზის კოლაფსი. ამ მოდიფიცირებულ C18 სვეტებს უწოდებენ წყალხსნარ C18 სვეტებს, კერძოდ C18AQ სვეტებს, რომლებიც განკუთვნილია უაღრესად წყალხსნარიანი პირობებისთვის და შეუძლია მოითმენს 100% წყალხსნარ სისტემას. C18AQ სვეტები ფართოდ იქნა გამოყენებული ძლიერი პოლარული ნაერთების განცალკევებისა და განწმენდისას, მათ შორის ორგანული მჟავების, პეპტიდების, ნუკლეოზიდების და წყალში ხსნადი ვიტამინების ჩათვლით.
Desalting არის C18AQ სვეტების ერთ - ერთი ტიპიური პროგრამა ნიმუშების ფლეშ განწმენდისას, რომელიც აშორებს მარილის ან ბუფერულ კომპონენტებს ნიმუშის გამხსნელში, რათა ხელი შეუწყოს ნიმუშის გამოყენებას შემდგომ კვლევებში. ამ პოსტში, ბრწყინვალე ლურჯი FCF, რომელსაც აქვს ძლიერი პოლარობა, გამოიყენებოდა როგორც ნიმუში და გაწმენდილი იყო C18AQ სვეტში. ნიმუშის გამხსნელი შეიცვალა ორგანული გამხსნელით ბუფერული ხსნარისგან, რითაც ხელი შეუწყო შემდეგი მბრუნავი აორთქლების, აგრეთვე გამხსნელების დაზოგვას და ოპერაციულ დროს. გარდა ამისა, ნიმუშის სიწმინდე გაუმჯობესდა ნიმუშში გარკვეული მინარევების ამოღებით.
ექსპერიმენტული განყოფილება
სურათი 2. ნიმუშის ქიმიური სტრუქტურა.
ბრწყინვალე ლურჯი FCF გამოიყენეს, როგორც ნიმუში ამ პოსტში. ნედლეული ნიმუშის სიწმინდე იყო 86%, ხოლო ნიმუშის ქიმიური სტრუქტურა ნაჩვენებია ნახაზში 2. ნიმუშის ხსნარის მოსამზადებლად, 300 მგ ფხვნილის ნედლი მყარი ბრწყინვალე ლურჯი FCF დაიშალა 1 მ Nah2PO4 ბუფერულ ხსნარში და კარგად შეირყა, რომ გახდეს სრულიად მკაფიო გადაწყვეტა. ნიმუშის ხსნარი შემდეგ ინექციური ფლეშ სვეტში შეიტანეს ინჟექტორის მიერ. Flash გამწმენდის ექსპერიმენტული დაყენება მოცემულია ცხრილში 1.
| ხელსაწყო | Sepabean ™ მანქანა2 | |||
| კარტრიჯები | 12 გ Sepaflash C18 RP Flash ვაზნა (სფერული სილიკა, 20-45 μm, 100 Å, შეკვეთის ნომერი: SW-5222-012-SP) | 12 გ Sepaflash C18AQ RP Flash ვაზნა (სფერული სილიკა, 20-45 μm, 100 Å, შეკვეთის ნომერი ： SW-5222-012-SP (aq)） | ||
| ტალღის სიგრძე | 254 ნმ | |||
| მობილური ფაზა | გამხსნელი ： წყალი გამხსნელი B ： მეტანოლი | |||
| ნაკადის სიჩქარე | 30 მლ/წთ | |||
| ნიმუშის დატვირთვა | 300 მგ (ბრწყინვალე ლურჯი FCF სიწმინდით 86%) | |||
| გრადიენტი | დრო (CV) | გამხსნელი B (%) | დრო (CV) | გამხსნელი B (%) |
| 0 | 10 | 0 | 0 | |
| 10 | 10 | 10 | 0 | |
| 10.1 | 100 | 10.1 | 100 | |
| 17.5 | 100 | 17.5 | 100 | |
| 17.6 | 10 | 17.6 | 0 | |
| 22.6 | 10 | 22.6 | 0 | |
შედეგები და დისკუსია
Sepaflash C18AQ RP Flash კარტრიჯი გამოიყენებოდა ნიმუშის დასუფთავებისა და განწმენდის მიზნით. Step გრადიენტი იქნა გამოყენებული, რომელშიც სუფთა წყალი გამოიყენებოდა, როგორც მობილური ფაზა elution– ის დასაწყისში და მართავდა 10 სვეტის მოცულობას (CV). როგორც ნაჩვენებია ნახაზში 3, სუფთა წყლის, როგორც მობილური ფაზის გამოყენებისას, ნიმუში მთლიანად შეინარჩუნა Flash ვაზნაზე. შემდეგი, მობილური ფაზის მეთანოლი პირდაპირ გაიზარდა 100% -მდე, ხოლო გრადიენტი შენარჩუნდა 7.5 CV- ზე. ნიმუში გამოვიდა 11.5 -დან 13.5 სვ -მდე. შეგროვებულ ფრაქციებში, ნიმუშის ხსნარი შეიცვალა NAH2PO4 ბუფერული ხსნარიდან მეთანოლამდე. უაღრესად წყალხსნართან შედარებით, მეთანოლი გაცილებით ადვილი იყო მომდევნო ეტაპზე მბრუნავი აორთქლების შედეგად, რაც ხელს უწყობს შემდეგ კვლევებს.
სურათი 3. ნიმუშის ფლეშ ქრომატოგრამა C18AQ კარტრიჯზე.
C18AQ კარტრიჯისა და რეგულარული C18 ვაზნის შენარჩუნების ქცევის შესადარებლად, ძლიერი პოლარობის ნიმუშებისთვის, ჩატარდა პარალელური შედარების ტესტი. გამოყენებული იქნა Sepaflash C18 RP Flash ვაზნა და ნიმუშისთვის Flash ქრომატოგრამა ნაჩვენებია ნახაზში 4. რეგულარული C18 ვაზნებისთვის, ყველაზე მაღალი ტოლერანტული წყლის ფაზის თანაფარდობაა დაახლოებით 90%. ამიტომ დაწყების გრადიენტი დაყენდა 10% მეთანოლში 90% წყალში. როგორც ნაჩვენებია სურათი 4 -ში, მაღალი წყალხსნარით გამოწვეული C18 ჯაჭვების ჰიდროფობიური ფაზის ჩამონგრევის გამო, ნიმუში ძლივს შეინარჩუნა რეგულარულ C18 ვაზნაზე და პირდაპირ გამოირჩეოდა მობილური ფაზით. შედეგად, ვერ დასრულდება ნიმუშის დესალტირების ან გამწმენდის მოქმედება.
სურათი 4. ნიმუშის ფლეშ ქრომატოგრამა რეგულარულ C18 ვაზნაზე.
ხაზოვან გრადიენტთან შედარებით, ნაბიჯის გრადიენტის გამოყენებას აქვს შემდეგი უპირატესობები:
1. გამხსნელის გამოყენება და ნიმუშის გაწმენდის დრო შემცირდება.
2. სამიზნე პროდუქტი მკვეთრი მწვერვალით გამოირჩევა, რაც ამცირებს შეგროვებული ფრაქციების მოცულობას და ამით ხელს უწყობს შემდეგ მბრუნავ აორთქლებას, ასევე დაზოგვის დროს.
3. შეგროვებული პროდუქტი მეთანოლშია, რომლის აორთქლებაც მარტივია, ამრიგად, საშრობი დრო მცირდება.
დასკვნის სახით, ნიმუშის გაწმენდის მიზნით, რომელიც მკაცრად არის პოლარული ან უაღრესად ჰიდროფილური, Sepaflash C18AQ RP Flash ვაზნები, რომლებიც აერთიანებს მოსამზადებელ ფლეშ ქრომატოგრაფიულ სისტემას Sepabean ™ აპარატს შეუძლია შემოგთავაზოთ სწრაფი და ეფექტური გადაწყვეტა.
Sepaflash- ის შემაკავშირებელ სერიის შესახებ C18 RP Flash Cartridges
არსებობს Sepaflash C18AQ RP Flash ვაზნების სერია, რომელსაც აქვს სხვადასხვა სპეციფიკაციები Santai Technology– დან (როგორც ეს მოცემულია ცხრილი 2 - ში).
| პუნქტის ნომერი | სვეტის ზომა | ნაკადის სიჩქარე (მლ/წთ) | Max.Pressure (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP (aq) | 5.4 გ | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP (aq) | 20 გ | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP (aq) | 33 გ | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP (aq) | 48 გ | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP (aq) | 105 გ | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP (aq) | 155 გ | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP (aq) | 300 გ | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP (aq) | 420 გ | 40-80 | 250/17.2 |
ცხრილი 2. Sepaflash C18AQ RP Flash Cartridges.
შეფუთვის მასალები: მაღალი ეფექტურობის სფერული C18 (aq)-დამარცხებული სილიკა, 20-45 μm, 100.
logy (როგორც ნაჩვენებია ცხრილი 2).
პოსტის დრო: აგვისტო -27-2018