Rui Huang, Bo Xu
Pusat R&D Aplikasi
Pambuka
Peptida minangka senyawa sing kasusun saka asam amino, sing saben duwe sifat fisik lan kimia sing unik amarga macem-macem jinis lan urutan residu asam amino sing dadi urutane.Kanthi pangembangan sintesis kimia fase padhet, sintesis kimia saka macem-macem peptida aktif wis nggawe kemajuan gedhe.Nanging, amarga komposisi rumit saka peptida sing diduweni dening sintesis fase padhet, produk pungkasan kudu diresiki kanthi cara pamisahan sing dipercaya.Cara pemurnian sing umum digunakake kanggo peptida kalebu kromatografi pertukaran ion (IEC) lan kromatografi cair kinerja dhuwur fase terbalik (RP-HPLC), sing nduweni kekurangan kapasitas muatan sampel sing sithik, biaya media pemisahan sing dhuwur, peralatan pamisahan sing rumit lan larang, lsp. Kanggo pemurnian kanthi cepet saka peptida molekul cilik (MW <1 kDa), kasus aplikasi sing sukses sadurunge diterbitake dening Santai Technologies, ing ngendi kartrid SepaFlash RP C18 digunakake kanggo pemurnian thymopentin (TP-5) kanthi cepet lan produk target ketemu syarat wis dijupuk.
Gambar 1. 20 asam amino umum (direproduksi saka www.bachem.com).
Ana 20 jinis asam amino sing umum ing komposisi peptida.Asam amino iki bisa dipérang dadi klompok ing ngisor iki miturut polaritas lan sifat asam-basa: non-polar (hidrofobik), polar (tanpa muatan), asam utawa basa (kaya sing dituduhake ing Gambar 1).Ing urutan peptida, yen asam amino sing mbentuk urutan kasebut biasane polar (kaya sing ditandhani kanthi warna jambon ing Gambar 1), kayata Cysteine, Glutamine, Asparagine, Serine, Threonine, Tyrosine, lan liya-liyane. polaritas lan banget larut ing banyu.Sajrone prosedur pemurnian kanggo conto peptida kutub sing kuwat iki kanthi kromatografi fase terbalik, fenomena sing diarani ambruk fase hidrofobik bakal kedadeyan (deleng cathetan aplikasi sing sadurunge diterbitake dening Santai Technologies: Hydrophobic Phase Collapse, AQ Reversed Phase Chromatography Columns lan Aplikasie).Dibandhingake karo kolom C18 biasa, kolom C18AQ sing luwih apik paling cocok kanggo pemurnian sampel polar utawa hidrofilik sing kuwat.Ing kirim iki, peptida polar kuwat digunakake minangka sampel lan diresiki dening kolom C18AQ.Akibaté, produk target sing nyukupi syarat kasebut dipikolehi lan bisa digunakake ing riset lan pangembangan ing ngisor iki.
| Instrumen | SepaBean™mesin 2 | |||
| Kartrid | 12 g SepaFlash C18 RP flash cartridge (silika bola, 20 - 45 μm, 100 Å, Order nunber:SW-5222-012-SP) | 12 g Kartrid lampu kilat SepaFlash C18AQ RP (silika bola, 20 - 45 μm, 100 Å, Nomer pesanan:SW-5222-012-SP(AQ)) | ||
| Dawane gelombang | 254 nm, 220 nm | 214 nm | ||
| Fase seluler | Solvent A: Banyu Solvent B: asetonitril | |||
| Laju aliran | 15 ml/min | 20 ml/min | ||
| Sample loading | 30 mg | |||
| Gradien | Wektu (CV) | Pelarut B (%) | Wektu (min) | Pelarut B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
Hasil karo diskusi
Kanggo mbandhingake kinerja pemurnian sampel peptida polar antarane kolom C18 biasa lan kolom C18AQ, kita nggunakake kolom C18 biasa kanggo pemurnian lampu kilat sampel minangka wiwitan.Minangka ditampilake ing Figure 2, amarga ambruk phase hidrofobik chain C18 disebabake rasio banyu dhuwur, sampel lagi wae disimpen ing cartridge C18 biasa lan langsung eluted metu dening fase seluler.Akibaté, sampel ora dipisahake lan diresiki kanthi efektif.
Gambar 2. Kromatogram lampu kilat sampel ing kartrid C18 biasa.
Sabanjure, kita nggunakake kolom C18AQ kanggo pemurnian lampu kilat saka sampel.Minangka ditampilake ing Figure 3, peptida iki èfèktif ditahan ing kolom lan banjur eluted metu.Produk target dipisahake saka impurities ing sampel mentah lan diklumpukake.Sawise lyophilization lan banjur analisa dening HPLC, produk dimurnèkaké nduweni kemurnian 98,2% lan bisa luwih dimanfaatake kanggo riset lan pangembangan langkah sabanjure.
Gambar 3. Kromatogram lampu kilat sampel ing kartrid C18AQ.
Kesimpulane, kartrid lampu kilat SepaFlash C18AQ RP digabungake karo sistem kromatografi lampu kilat SepaBean™Mesin bisa menehi solusi sing cepet lan efektif kanggo ngresiki conto polar utawa hidrofilik sing kuwat.
Ana seri saka SepaFlash C18AQ RP flash cartridges karo specifications beda saka Teknologi Santai (minangka ditampilake ing Tabel 2).
| Nomer Item | Ukuran Kolom | Laju alur (mL/min) | Max. Tekanan (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5,4 g | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
Tabel 2. SepaFlash C18AQ RP flash cartridges.Bahan pengemasan: Silika ikatan bola C18(AQ) efisiensi tinggi, 20 - 45 μm, 100 Å.
Kanggo informasi luwih lengkap babagan spesifikasi rinci mesin SepaBean™, utawa informasi pesenan ing kartrid lampu kilat seri SepaFlash, bukak situs web kita.
wektu Post: Oct-12-2018