HONGCHENG WANG, Bo Xu
Aplikasi R & D Pusat
Pambuka
Miturut peperangan relatif fase stasioner lan fase mobile, kromatografi Liquid bisa dipérang dadi kromatografi phase normal (NPC) lan dibalik Chromatografi (RPC). Kanggo RPC, polarane fase mobile luwih kuwat tinimbang fase stasioner. RPC wis dadi sing paling akeh digunakake ing mode pemisahan kromatografi Cairan amarga efisiensi dhuwur, resolusi sing apik lan mekanisme penylametan sing jelas. Pramila RPC cocog kanggo pemisahan lan pemurnian saka senyawa polar utawa non-polar, kalebu alkaloid, karbohidrat, protein, protein, c8, c8, pepenyl, Cyano, Amino, lsp. Antarane klompok fungsional sing diikat, sing paling akeh digunakake yaiku C18. Dikira luwih saka 80% RPC saiki nggunakake Fase ikatan C18. Mulane kolom kromatografi C18 wis dadi kolom kolom sing kudu duwe universal kudu saben laboratorium.
Sanajan kolom C18 bisa digunakake ing macem-macem aplikasi, kanggo sawetara conto sing polar banget, kolom C18 biasa bisa duwe masalah nalika digunakake kanggo ngresiki conto kasebut. Ing RPC, pelarut sing biasa digunakake digunakake bisa didhawuhi miturut polaritas: banyu <Methanol <etanitrile <etanol <etanol <Tetrahydool. Kanggo njamin penylametan sing apik ing kolom kasebut kanggo conto kasebut (polar utawa polar sing kuwat utawa hidrofilik), proporsi sistem banyu sing dhuwur kudu digunakake minangka fase mobile. Nanging, nalika nggunakake sistem banyu murni (kalebu banyu murni utawa larutan uyah murni) Minangka phase karbon sing dawa ing fase calon kolom stasioner Column utawa ora bisa diukur. Fenomena iki diarani "runtuh phase hidrofobik" (kaya sing ditampilake ing sisih kiwa kiwa tokoh 1). Sanajan kahanan iki bisa dibalik nalika kolom wis diresiki nganggo larut organik kayata metanol utawa Acetonitrile, isih bisa nyebabake karusakan ing kolom. Mula, perlu kanggo nyegah kahanan kasebut kedadeyan.
Gambar 1. Gambar skematis fase sing diikat ing permukaan Gel Silica ing kolom C18 biasa (kiwa) lan kolom C18aq (tengen).
Kanggo ngatasi masalah ing ndhuwur, produsen Bahan Packing Chromatographic wis nggawe dandan teknis. Salah sawijining perbaikan kasebut nggawe sawetara modifikasi ing permukaan matrik silika, kayata introduksi klompok cyano hidrofilik (kaya sing ditampilake ing sisih tengen tokoh 1), kanggo nggawe permukaan silika luwih hidrofilik. Mangkono C18 rantai ing permukaan silika bisa lengkap ing sangisore kahanan banyu lan ambruk phase hidrofobik bisa nyingkiri. Kolom C18 sing diowahi iki diarani kolom C18 banyu, yaiku kolom C18AQ, sing dirancang kanggo kahanan zat elus sing akeh banget lan bisa ngidinke sistem banyu 100%. Kolom C18aq wis akeh ditrapake ing pamisahan lan pemurnian senyawa polar sing kuwat, kalebu asam organik, kalebu asam organik, peptida, nukleosides lan vitamin larut banyu.
Desaling minangka salah sawijining aplikasi khas kolom C18AQ ing pemurnian lampu kilat kanggo conto uyah utawa buffer ing sampel sampel kanggo nyinaoni conto conto ing sakteruse. Ing kirim iki, FCF biru sing apik banget kanthi polaritas sing kuat digunakake minangka conto lan diresiki ing kolom C18aq. Solvent Sample diganti karo pelarut organik saka solusi buffer, saéngga nggampangake penguapan rotary ing ngisor iki uga nyimpen pelaras lan wektu operasi. Salajengipun, kemurnian sampel wis apik kanthi ngilangi sawetara reged ing sampel.
Bagean eksperimen
Gambar 2. Struktur kimia sampel.
FCF Biru Biru sing sarwa digunakake minangka conto ing kirim iki. Kesucian conto mentah yaiku 86% lan struktur kimia sampel ditampilake ing Gambar 2. Kanggo nyiyapake solusi sampel sing solet, 300 mg powdery solid buffer solid saka 1 mg mg2po4 solusi buffer lan guncang kanthi apik. Solusi conto banjur disuntik menyang kolom Flash kanthi injector. Persiyapan eksperimen saka pembersihan lampu kilat kasebut kadhaptar ing Tabel 1.
| Instrumen | Mesin sepeadean ™2 | |||
| Cartridges | 12 g Cartridge C18 Rp Flash C18 Rp (Silika Spherical, 20 - 45 μm, 100, nomer pesenan: Sw-5222-012-sp) | 12 g Cartridge C18AQ Rp Flash C18AQ (Silika Spherical, 20 - 45 μm, 100, Nomer Pesenan: Sw-5222-012-SP (AQ)) | ||
| Gelombang | 254 nm | |||
| Fase mobile | Solvent A: Banyu Solvent B: Methanol | |||
| Tingkat aliran | 30 ml / min | |||
| Loading sampel | 300 mg (FCF biru sing apik banget kanthi kemurnian 86%) | |||
| Gradient | Wektu (CV) | Solvent B (%) | Wektu (CV) | Solvent B (%) |
| 0 | 10 | 0 | 0 | |
| 10 | 10 | 10 | 0 | |
| 10.1 | 100 | 10.1 | 100 | |
| 17.5 | 100 | 17.5 | 100 | |
| 17.6 | 10 | 17.6 | 0 | |
| 22.6 | 10 | 22.6 | 0 | |
Asil lan diskusi
Carlridge C18AQ Rp Flash C18AQ Rp Flash bisa digunakake kanggo tumindak conto lan pemurnian. Krasa langkah digunakke ing banyu murni sing digunakake minangka fase mobile ing wiwitan egahan lan mbukak nganti 10 volume kolom (CV). Kaya sing ditampilake ing Gambar 3, nalika nggunakake banyu murni minangka fase mobile, conto kasebut disimpen ing karton lampu kilat. Sabanjure, Methanol ing fase mobile langsung ditambahake dadi 100% lan kecerunan kasebut dijaga kanggo 7,5 CV. Sampel kasebut dikelus saka 11,5 nganti 13,5 CV. Ing pecahan sing diklumpukake, solusi sampel kasebut diganti saka Solusi Buffer Nah2po4 menyang Methanol. Mbandhingake solusi sing akeh, Metanol luwih gampang dicopot kanthi penguapan puteran ing langkah sabanjure, sing nggampangake riset ing ngisor iki.
Gambar 3. Kromatogram lampu kilat conto ing cartridge C18AQ.
Kanggo mbandhingake prilaku penylametan C18AQ lan karton C18 biasa kanggo conto polaritas, tes perbandingan paralel ditindakake. Car0 Rp Flash C18 Rp Cart8 Rp Chratogram kanggo conto ditampilake ing Gambar 4. Kanggo kartrij C18 biasa, rasio fase banyu sing paling dhuwur bakal udakara 90%. Mula, kecerunan wiwitan dipasang ing metanol 10% ing banyu 90%. Kaya sing ditampilake ing Gambar 4, amarga ambruk phase hidrofobik hidrofobik sing disebabake rasio banyu sing dhuwur, sampel kasebut ora ana ing kartun C18 biasa lan langsung elutasi dening fase mobile. Akibaté, operasi conto sing ora bisa ditindakake utawa dimurnekake.
Gambar 4. Kromatogram lampu kilat conto ing kartun C18 biasa.
Bandhingake karo linear kecerunan, panggunaan kecerunan langkah duwe kaluwihan ing ngisor iki:
1. Panggunaan pelarut lan wektu mbukak kanggo dimurnek sampel suda.
2 .. Product Target Elutes ing puncak sing cetha, sing nyuda volume fraksi sing diklumpukake lan kanthi mangkono nggampangake penguapan rotary ing ngisor iki uga nyimpen wektu.
3 .. Produk sing diklumpukake ana ing metanol sing gampang diuap, saéngga wektu pangatusan dikurangi.
Kesimpulane, kanggo ngresiki conto sing kuwat polar utawa hidrofilik C18AQ Rp Cartridges sing digabung karo sistem Chromatografi Sycatel ™ Sycentography sing subsiatif bisa nawakake solusi sing cepet lan efisien.
Babagan seri Bubled of SEXFLINH Flash C18 Rp
Ana pirang-pirang kartris C18AQ Rp Rp Rp kanthi spesifikasi saka teknologi santai (kaya sing ditampilake ing Tabel 2).
| Nomer Item | Ukuran kolom | Tingkat aliran (ml / min) | Max.pressure (psi / bar) |
| SW-5222-0044444444444-SP (AQ) | 5.4 g | 5-15 | 400 / 27.5 |
| SW-5222-012-SP (AQ) | 20 g | 10-25 | 400 / 27.5 |
| SW-5222-025-SP (AQ) | 33 g | 10-25 | 400 / 27.5 |
| Sw-5222-040-sp (aq) | 48 g | 15-30 | 400 / 27.5 |
| SW-5222-080-SP (AQ) | 105 g | 25-50 | 350 / 24.0 |
| SW-5222-120-SP (AQ) | 155 g | 30-60 | 300 / 20.7 |
| SW-5222-220-SP (AQ) | 300 g | 40-80 | 300 / 20.7 |
| SW-5222-330-SP (AQ) | 420 g | 40-80 | 250 / 17.2 |
Tabel 2. Cartridges Flash C18AQ Rp C18AQ RP.
Bahan kemasan: efisialisasi Spherical C18 (AQ) -Bed, 20 - 45 μm, 100 taun.
LOGY (kaya sing ditampilake ing Tabel 2).
Wektu Pos: Aug-27-2018