Rui Huang、Bo Xu
アプリケーションR＆Dセンター
導入
ペプチドは、アミノ酸で構成される化合物であり、それぞれがその配列を構成するアミノ酸残基の異なるタイプと順序のために、独自の物理的および化学的特性を備えています。固相化学合成の開発により、さまざまな活性ペプチドの化学合成が大きな進歩を遂げました。ただし、固相合成によって得られたペプチドの複雑な組成のため、最終生成物は信頼できる分離方法によって精製する必要があります。ペプチドに一般的に使用される精製方法には、イオン交換クロマトグラフィー（IEC）および逆相高性能液体クロマトグラフィー（RP-HPLC）が含まれます。これらの高性能液材料（RP-HPLC）は、低サンプル負荷能力、高コストの分離メディア、複雑で費用のかかる分離機器などの欠点があります。セパフラッシュRP C18カートリッジがチモペンチン（TP-5）の迅速な精製に利用され、要件を満たすターゲット製品が得られました。
図1。20一般的なアミノ酸（www.bachem.comから再現）。
ペプチドの組成に一般的な20種類のアミノ酸があります。これらのアミノ酸は、極性と酸塩基特性に応じて次のグループに分割できます：非極性（疎水性）、極性（充電されていない）、酸性または塩基性（図1に示すように）。ペプチド配列では、配列を構成するアミノ酸がほとんどの場合極のもの（図1のピンク色でマークされている）である場合、システイン、グルタミン、アスパラギン、セリン、スレオニン、チロシンなど。このペプチドは強い極性を持ち、水に非常に溶けます。逆相クロマトグラフィーによるこれらの強力な極性ペプチドサンプルの精製手順中に、疎水性相崩壊と呼ばれる現象が発生します（サンタイテクノロジーによる以前に公開されたアプリケーションノートを参照してください。通常のC18カラムと比較して、改良されたC18AQカラムは、強い極性または親水性サンプルの精製に最も適しています。この投稿では、強力な極性ペプチドがサンプルとして使用され、C18AQカラムで精製されました。その結果、要件を満たすターゲット製品が取得され、以下の研究開発で使用できます。
| 楽器 | セパビアン™マシン2 | |||
| カートリッジ | 12 g Sepaflash C18 RPフラッシュカートリッジ（球状シリカ、20-45μm、100Å、注文nunber：SW-5222-012-SP） | 12 g Sepaflash C18AQ RPフラッシュカートリッジ（球状シリカ、20-45μm、100Å、注文番号：SW-5222-012-SP（AQ）） | ||
| 波長 | 254 nm、220 nm | 214 nm | ||
| 移動相 | 溶媒A：水 溶媒B：アセトニトリル | |||
| 流量 | 15 ml/min | 20 ml/min | ||
| サンプルの読み込み | 30 mg | |||
| 勾配 | 時間（CV） | 溶媒B（％） | 時間（分） | 溶媒B（％） |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
結果と考察
通常のC18カラムとC18AQカラムの間の極ペプチドサンプルの精製性能を比較するために、サンプルのフラッシュ精製に通常のC18カラムを開始として使用しました。図2に示すように、高水比によって引き起こされるC18鎖の疎水性相崩壊により、サンプルは通常のC18カートリッジにほとんど保持されず、移動相によって直接溶出しました。その結果、サンプルは効果的に分離および精製されていませんでした。
図2。通常のC18カートリッジ上のサンプルのフラッシュクロマトグラム。
次に、サンプルのフラッシュ精製にC18AQカラムを使用しました。図3に示すように、ペプチドはカラムに効果的に保持され、その後溶出されました。ターゲット製品は、生のサンプルの不純物から分離され、収集されました。凍結乾燥後、HPLCによって分析された後、精製された製品の純度は98.2％であり、次のステップの研究開発にさらに利用できます。
図3。C18AQカートリッジ上のサンプルのフラッシュクロマトグラム。
結論として、Sepaflash C18AQ RPフラッシュカートリッジとフラッシュクロマトグラフィーシステムセパビアンと組み合わせた™マシンは、強力な極性または親水性サンプルを精製するための高速で効果的なソリューションを提供できます。
Santaiテクノロジーとは異なる仕様を備えたSepaflash C18AQ RPフラッシュカートリッジのシリーズがあります（表2を参照）。
| アイテム番号 | 列サイズ | 流量 （ml/min） | max.pressure （psi/bar） |
| SW-5222-004-SP（aq） | 5.4 g | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP（aq） | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP（aq） | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP（aq） | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP（aq） | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP（aq） | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP（aq） | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP（aq） | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
表2。SepaflashC18AqRPフラッシュカートリッジ。梱包材：高効率球状C18（AQ）結合シリカ、20-45μm、100Å。
Sepabean™マシンの詳細な仕様の詳細、またはSepaflashシリーズFlash Cartridgesの注文情報については、当社のWebサイトをご覧ください。
投稿時間：2018年10月12日