Hongcheng Wang、Bo Xu
アプリケーションR＆Dセンター
導入
固定相と移動相の相対極性によれば、液体クロマトグラフィーは正常相クロマトグラフィー（NPC）および逆相クロマトグラフィ（RPC）に分割できます。 RPCの場合、移動相の極性は固定相の極性よりも強いです。 RPCは、高効率、良好な解像度、明確な保持メカニズムにより、液体クロマトグラフィー分離モードで最も広く使用されています。したがって、RPCは、アルカロイド、炭水化物、脂肪酸、ステロイド、核酸、アミノ酸、ペプチド、タンパク質など、アルカロイド、炭水化物、脂肪酸、ステロイドなど、さまざまな極性または非極性化合物の分離と精製に適しています。シアノ、アミノなど。これらの結合官能基の中で、最も広く使用されているものはC18です。現在、RPCの80％以上がC18結合位相を使用していると推定されています。したがって、C18クロマトグラフィーカラムは、すべての実験室で必須の普遍的な列になりました。
ただし、C18カラムは非常に幅広いアプリケーションで使用できますが、非常に極性または高親水性の一部のサンプルでは、そのようなサンプルを浄化するために使用される場合、通常のC18カラムに問題がある場合があります。 RPCでは、一般的に使用される溶出溶媒は極性に従って順序付けられます。これらのサンプル（強い極性または高親水性）のカラムの適切な保持を保証するには、水系の高い割合を移動相として使用する必要があります。ただし、純水システム（純水または純粋な塩溶液を含む）を移動相として使用する場合、C18カラムの固定相の長い炭素鎖は、水を回避し、互いに混合する傾向があり、カラムの保持能力の瞬間的な減少または保持さえありません。この現象は、「疎水性相崩壊」と呼ばれます（図1の左側に示すように）。この状況は、カラムをメタノールやアセトニトリルなどの有機溶媒で洗浄すると可逆的ですが、カラムに損傷を引き起こす可能性があります。したがって、この状況が発生しないようにする必要があります。
図1。通常のC18カラム（左）およびC18AQカラム（右）のシリカゲルの表面上の結合相の概略図。
上記の問題に対処するために、クロマトグラフィーパッキング材料メーカーは技術的な改善を行っています。これらの！したがって、シリカ表面上のC18鎖は、非常に水性条件下で完全に拡張でき、疎水性相崩壊は回避できます。これらの修正されたC18カラムは、水性溶出条件向けに設計され、100％水系に耐えることができるC18AQ列、つまりC18AQカラムと呼ばれます。 C18AQカラムは、有機酸、ペプチド、ヌクレオシド、水溶性ビタミンを含む強力な極性化合物の分離と精製に広く適用されています。
脱塩は、サンプルのフラッシュ精製中のC18AQカラムの典型的な用途の1つであり、サンプル溶媒の塩成分または緩衝液成分を除去して、その後の研究でサンプルの適用を容易にします。この投稿では、強い極性を備えた鮮やかな青いFCFをサンプルとして使用し、C18AQカラムで精製しました。サンプル溶媒をバッファー溶液から有機溶媒に置き換えたため、溶媒と動作時間を節約するだけでなく、次の回転蒸発を促進しました。さらに、サンプルのいくつかの不純物を除去することにより、サンプルの純度が改善されました。
実験セクション
図2。サンプルの化学構造。
鮮やかな青いFCFは、この投稿のサンプルとして使用されました。生のサンプルの純度は86％で、サンプルの化学構造を図2に示しました。サンプル溶液を準備するために、鮮やかな青いFCFの300 mgの粉末固体を1 m Nah2po4バッファー溶液に溶解して、完全に明確な溶液になりました。次に、サンプル溶液をインジェクターによってフラッシュカラムに注入しました。フラッシュ精製の実験セットアップを表1に示します。
| 楽器 | Sepabean™マシン2 | |||
| カートリッジ | 12 g Sepaflash C18 RPフラッシュカートリッジ（球状シリカ、20-45μm、100Å、注文番号：SW-5222-012-SP） | 12 g Sepaflash C18AQ RPフラッシュカートリッジ（球状シリカ、20-45μm、100Å、注文番号：SW-5222-012-SP（aq）)） | ||
| 波長 | 254 nm | |||
| 移動相 | 溶媒A：水 溶媒B：メタノール | |||
| 流量 | 30 ml/min | |||
| サンプルの読み込み | 300 mg（86％の純度の鮮やかな青いFCF） | |||
| 勾配 | 時間（CV） | 溶媒B（％） | 時間（CV） | 溶媒B（％） |
| 0 | 10 | 0 | 0 | |
| 10 | 10 | 10 | 0 | |
| 10.1 | 100 | 10.1 | 100 | |
| 17.5 | 100 | 17.5 | 100 | |
| 17.6 | 10 | 17.6 | 0 | |
| 22.6 | 10 | 22.6 | 0 | |
結果と考察
Sepaflash C18AQ RPフラッシュカートリッジをサンプル脱塩と精製に使用しました。ステップグラジエントが利用され、純水が溶出の開始時に移動相として使用され、10カラムのボリューム（CV）で動作しました。図3に示すように、純水を移動相として使用する場合、サンプルはフラッシュカートリッジに完全に保持されました。次に、移動相のメタノールは100％に直接増加し、勾配は7.5 cvで維持されました。サンプルは11.5〜13.5 cvに溶出しました。収集された画分では、サンプル溶液をNAH2PO4バッファー溶液からメタノールに置き換えました。高多量の溶液と比較すると、メタノールは、次の研究を促進する後続のステップでの回転蒸発により除去されやすくなりました。
図3。C18AQカートリッジ上のサンプルのフラッシュクロマトグラム。
強力な極性のサンプルについては、C18AQカートリッジと通常のC18カートリッジの保持挙動を比較するために、並列比較テストを実行しました。 Sepaflash C18 RPフラッシュカートリッジを使用し、サンプルのフラッシュクロマトグラムを図4に示しました。通常のC18カートリッジについては、最高許容容量の水相比は約90％です。したがって、開始勾配は、90％の水で10％メタノールに設定されました。図4に示すように、高い水性比によって引き起こされるC18鎖の疎水性相崩壊により、サンプルは通常のC18カートリッジにほとんど保持されず、移動相によって直接溶出しました。その結果、サンプルの脱塩または精製の動作を完了することはできません。
図4。通常のC18カートリッジ上のサンプルのフラッシュクロマトグラム。
線形勾配と比較すると、ステップグラデーションの使用には次の利点があります。
1.サンプル精製の溶媒の使用と実行時間が短縮されます。
2。ターゲット製品は、収集された画分の量を減らし、したがって、次の回転蒸発と時間の節約を促進する鋭いピークで溶出します。
3.収集された生成物はメタノールで蒸発しやすいため、乾燥時間が短縮されます。
結論として、強く極性または高親水性のサンプルの精製のために、Sepaflash C18AQ RPフラッシュカートリッジが検定フラッシュクロマトグラフィーシステムSepabean™マシンを組み合わせて、高速で効率的なソリューションを提供できます。
SepaflashボンドシリーズC18 RPフラッシュカートリッジについて
Santaiテクノロジーとは異なる仕様を備えたSepaflash C18AQ RPフラッシュカートリッジのシリーズがあります（表2を参照）。
| アイテム番号 | 列サイズ | 流量 （ml/min） | max.pressure （psi/bar） |
| SW-5222-004-SP（aq） | 5.4 g | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP（aq） | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP（aq） | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP（aq） | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP（aq） | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP（aq） | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP（aq） | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP（aq） | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
表2。SepaflashC18AqRPフラッシュカートリッジ。
梱包材：高効率球状C18（AQ）結合シリカ、20-45μm、100Å。
logy（表2に示すように）。
投稿時間：2018年8月27日