מינגזו יאנג, בו שו
מרכז מחקר ופיתוח יישומים
מבוא
אנטיביוטיקה היא סוג של מטבוליטים משניים המיוצרים על ידי מיקרואורגניזמים (כולל חיידקים, פטריות, אקטינומיציטים) או תרכובות דומות המיוצרות בצורה כימית או מסונתזת למחצה.אנטיביוטיקה יכולה לעכב את הצמיחה וההישרדות של מיקרואורגניזמים אחרים.האנטיביוטיקה הראשונה שהתגלתה על ידי האדם, פניצילין, התגלתה על ידי המיקרוביולוג הבריטי אלכסנדר פלמינג בשנת 1928. הוא הבחין כי החיידקים בסביבת העובש אינם יכולים לגדול בצלחת תרבית סטפילוקוקוס שהייתה מזוהמת בעובש.הוא הניח שהעובש חייב להפריש חומר אנטיבקטריאלי, שאותו כינה פניצילין בשנת 1928. עם זאת, החומרים הפעילים לא טוהרו באותה תקופה.בשנת 1939 החליטו ארנסט צ'יין והווארד פלורי מאוניברסיטת אוקספורד לפתח תרופה שיכולה לטפל בזיהומים חיידקיים.לאחר יצירת קשר עם פלמינג כדי להשיג זנים, הם חילצו וטיהרו בהצלחה פניצילין מהזנים.על פיתוחם המוצלח של פניצילין כתרופה טיפולית, פלמינג, צ'יין ופלורי חלקו את פרס נובל לרפואה לשנת 1945.
אנטיביוטיקה משמשת כסוכנים אנטיבקטריאליים לטיפול או מניעת זיהומים חיידקיים.ישנן מספר קטגוריות עיקריות של אנטיביוטיקה המשמשות כסוכנים אנטיבקטריאליים: אנטיביוטיקה β-lactam (כולל פניצילין, צפלוספורין וכו'), אנטיביוטיקה אמינוגליקוזיד, אנטיביוטיקה מקרולידים, אנטיביוטיקה טטרציקלין, כלורמפניקול (אנטיביוטיקה סינתטית מלאה) וכו'. המקורות לאנטיביוטיקה כוללים אנטיביוטיקה. תסיסה ביולוגית, חצי סינתזה וסינתזה כוללת.האנטיביוטיקה המיוצרת על ידי תסיסה ביולוגית צריכה לעבור שינוי מבני על ידי שיטות כימיות עקב יציבות כימית, תופעות לוואי רעילות, ספקטרום אנטיבקטריאלי ונושאים אחרים.לאחר שינוי כימי, האנטיביוטיקה יכולה להשיג יציבות מוגברת, הפחתת תופעות לוואי רעילות, הרחבת ספקטרום אנטיבקטריאלי, עמידות מופחתת לתרופות, שיפור הזמינות הביולוגית, ובכך שיפור ההשפעה של הטיפול התרופתי.לכן, אנטיביוטיקה חצי סינתטית היא כיום הכיוון הפופולרי ביותר בפיתוח תרופות אנטיביוטיות.
בפיתוח של אנטיביוטיקה סינטטית למחצה, לאנטיביוטיקה יש תכונות של טוהר נמוך, הרבה תוצרי לוואי ורכיבים מורכבים שכן הם מופקים ממוצרי תסיסה מיקרוביאליים.במקרה זה, הניתוח והבקרה של זיהומים באנטיביוטיקה חצי סינתטית חשובים במיוחד.על מנת לזהות ולאפיין ביעילות זיהומים, יש צורך להשיג כמות מספקת של זיהומים מהתוצר הסינטטי של אנטיביוטיקה חצי סינתטית.בין טכניקות הכנת הטומאה הנפוצות, כרומטוגרפיית הבזק היא שיטה חסכונית עם יתרונות כמו כמות טעינת דגימה גדולה, עלות נמוכה, חיסכון בזמן וכו'. כרומטוגרפיית הבזק הועסקה יותר ויותר על ידי חוקרים סינתטיים.
בפוסט זה, הטומאה העיקרית של אנטיביוטיקה aminoglycoside חצי סינתטית נוצלה כדגימה וטיהרה על ידי מחסנית SepaFlash C18AQ בשילוב עם מכונת הבזק של מערכת הכרומטוגרפיה SepaBean™.מוצר היעד העומד בדרישות הושג בהצלחה, דבר המצביע על פתרון יעיל ביותר לטיהור התרכובות הללו.
חלק ניסיוני
הדוגמה סופקה בחביבות על ידי חברת תרופות מקומית.המדגם היה מעין פחמימות פוליציקליות אמינו והמבנה המולקולרי שלה היה דומה לאנטיביוטיקה של אמינוגליקוזיד.הקוטביות של המדגם הייתה גבוהה למדי, מה שהפך אותה למסיסה מאוד במים.הדיאגרמה הסכמטית של המבנה המולקולרי של הדגימה הוצגה באיור 1. הטוהר של הדגימה הגולמית היה כ-88% כפי שניתח על ידי HPLC.לטיהור התרכובות הללו בעלות קוטביות גבוהה, המדגם בקושי יישמר בעמודות C18 הרגילות על פי הניסיון הקודם שלנו.לכן, עמודת C18AQ הופעלה לטיהור המדגם.
איור 1. הדיאגרמה הסכמטית של המבנה המולקולרי של המדגם.
כדי להכין את תמיסת הדגימה, דגימה גולמית של 50 מ"ג הומסה ב-5 מ"ל מים טהורים ולאחר מכן עברה אולטרסאונד על מנת להפוך אותה לתמיסה שקופה לחלוטין.תמיסה המדגם הוזרק לאחר מכן לתוך עמודת הבזק על ידי מזרק.מערך הניסוי של טיהור הבזק היה רשום בטבלה 1.
כלי | מכונת SepaBean™ 2 | |
מחסניות | 12 גרם מחסנית הבזק SepaFlash C18AQ RP (סיליקה כדורית, 20 - 45 מיקרומטר, 100 Å, מספר הזמנה:SW-5222-012-SP(AQ)) | |
אֹרֶך גַל | 204 ננומטר, 220 ננומטר | |
שלב נייד | ממס א': מים ממס B: אצטוניטריל | |
קצב זרימה | 15 מ"ל/דקה | |
טעינת מדגם | 50 מ"ג | |
מִדרוֹן | זמן (דקות) | ממס B (%) |
0 | 0 | |
19.0 | 8 | |
47.0 | 80 | |
52.0 | 80 |
תוצאות ודיון
כרומטוגרמת הבזק של הדגימה על מחסנית C18AQ הוצגה באיור 2. כפי שמוצג באיור 2, המדגם הקוטבי מאוד נשמר ביעילות על מחסנית C18AQ.לאחר lyopholization עבור השברים שנאספו, למוצר היעד היה טוהר של 96.2% (כפי שמוצג באיור 3) על ידי ניתוח HPLC.התוצאות הצביעו על כך שניתן יהיה לנצל את המוצר המטוהר בשלב הבא במחקר ופיתוח.
איור 2. כרומטוגרמת הבזק של המדגם על מחסנית C18AQ.
איור 3. כרומטוגרמת HPLC של מוצר היעד.
לסיכום, מחסנית הבזק SepaFlash C18AQ RP בשילוב עם מערכת הכרומטוגרפיה הבזק SepaBean™ יכולה להציע פתרון מהיר ויעיל לטיהור דגימות קוטביות מאוד.
על מחסניות הבזק של SepaFlash C18AQ RP
קיימות סדרות של מחסניות הבזק של SepaFlash C18AQ RP עם מפרטים שונים מ-Santai Technology (כפי שמוצג בטבלה 2).
מספר פריט | גודל עמודה | קצב זרימה (מ"ל/דקה) | מקסימום לחץ (psi/bar) |
SW-5222-004-SP(AQ) | 5.4 גרם | 5-15 | 400/27.5 |
SW-5222-012-SP(AQ) | 20 גרם | 10-25 | 400/27.5 |
SW-5222-025-SP(AQ) | 33 גרם | 10-25 | 400/27.5 |
SW-5222-040-SP(AQ) | 48 גרם | 15-30 | 400/27.5 |
SW-5222-080-SP(AQ) | 105 גרם | 25-50 | 350/24.0 |
SW-5222-120-SP(AQ) | 155 גרם | 30-60 | 300/20.7 |
SW-5222-220-SP(AQ) | 300 גרם | 40-80 | 300/20.7 |
SW-5222-330-SP(AQ) | 420 גרם | 40-80 | 250/17.2 |
טבלה 2. מחסניות הבזק של SepaFlash C18AQ RP.חומרי אריזה: סיליקה כדורית בעלת יעילות גבוהה מלוכדת C18(AQ), 20 - 45 מיקרומטר, 100 Å.
למידע נוסף על מפרטים מפורטים של מכונת SepaBean™, או מידע על הזמנה על מחסניות פלאש מסדרת SepaFlash, אנא בקר באתר האינטרנט שלנו.
זמן פרסום: 26 באוקטובר 2018