היישום של עמודות כרומטוגרפיה של SepaFlash Strong Anion Exchange בטיהור תרכובות חומציות

תוצאות ודיון

ראשית, תערובת הדגימה הופרדה על ידי מחסנית הבזק פאזה רגילה ארוזה מראש עם סיליקה רגילה.כפי שמוצג באיור 3, שני הרכיבים בדגימה נפלטו מהמחסנית בזה אחר זה.לאחר מכן, נעשה שימוש במחסנית הבזק מסוג SAX לטיהור המדגם.כפי שמוצג באיור 4, הרכיב החומצי B נשמר לחלוטין על מחסנית SAX.הרכיב הנייטרלי A נשלף בהדרגה מהמחסנית עם פליטת השלב הנייד.

איור 3. כרומטוגרמת הבזק של הדגימה על מחסנית פאזה רגילה.

איור 4. כרומטוגרמת הבזק של המדגם על מחסנית SAX.
בהשוואה בין איור 3 לתמונה 4, לרכיב A יש צורת שיא לא עקבית בשתי מחסניות הבזק השונות.כדי לאשר אם שיא הפליטה תואם לרכיב, אנו יכולים להשתמש בתכונת הסריקה באורך הגל המלא המובנית בתוכנת הבקרה של מכונת SepaBean™.פתחו את הנתונים הניסויים של שתי ההפרדות, גררו לקו המחוון על ציר הזמן (CV) בכרומטוגרמה לנקודה הגבוהה ביותר ולנקודה השנייה בגובהה של שיא הפליטה המקבילה לרכיב A, ולספקטרום אורך הגל המלא של שני אלה. נקודות יוצגו אוטומטית מתחת לכרומטוגרמה (כפי שמוצג באיור 5 ובאיור 6).בהשוואת נתוני ספקטרום אורך הגל המלא של שתי ההפרדות הללו, לרכיב A יש ספקטרום ספיגה עקבי בשני ניסויים.מהסיבה שלרכיב A יש צורת שיא לא עקבית בשתי מחסניות פלאש שונות, משערים שיש טומאה ספציפית ברכיב A שיש לה החזקה שונה במחסנית הפאזה הרגילה ובמחסנית SAX.לכן, רצף הפליטה שונה עבור רכיב A והטומאה בשתי מחסניות הבזק אלו, וכתוצאה מכך צורת שיא לא עקבית בכרומטוגרמות.

איור 5. ספקטרום אורך הגל המלא של רכיב A והטומאה מופרדים על ידי מחסנית פאזה רגילה.

איור 6. ספקטרום אורך הגל המלא של רכיב A והטומאה מופרדים על ידי מחסנית SAX.

אם מוצר היעד שייאסף הוא הרכיב הנייטרלי A, ניתן להשלים את משימת הטיהור בקלות על ידי שימוש ישיר במחסנית SAX לפליטה לאחר טעינת הדגימה.מצד שני, אם מוצר היעד שיש לאסוף הוא הרכיב החומצי B, ניתן היה לאמץ את אופן הלכידה-שחרור עם התאמה קלה בלבד בשלבי הניסוי: כאשר הדגימה הועמסה על מחסנית SAX ורכיב A ניטרלי. נחלץ לחלוטין עם ממיסים אורגניים בשלב רגיל, החלף את הפאזה הניידת לתמיסת מתנול המכילה 5% חומצה אצטית.יוני האצטאט בשלב הנייד יתחרו ברכיב B על התקשרות לקבוצות יוני האמינים הרבעוניות על השלב הנייח של מחסנית SAX, ובכך יפלטו את הרכיב B מהמחסנית כדי להשיג את מוצר היעד.הכרומטוגרמה של הדגימה שהופרדה במצב חילופי יונים הוצגה באיור 7.

איור 7. כרומטוגרמת ההבזק של הרכיב B נפלטה במצב חילופי יונים על מחסנית SAX.

לסיכום, ניתן לטהר דגימה חומצית או ניטרלית במהירות על ידי מחסנית SAX בשילוב עם מחסנית פאזה רגילה תוך שימוש באסטרטגיות טיהור שונות.יתר על כן, בעזרת תכונת סריקה באורך גל מלא המובנית בתוכנת הבקרה של מכונת SepaBean™, ניתן היה להשוות ולאשר בקלות את ספקטרום הקליטה האופייני של השברים הנפלטים, מה שעוזר לחוקרים לקבוע במהירות את ההרכב והטוהר של השברים הנפלטים ובכך לשפר יעילות עבודה.