היישום של עמודות כרומטוגרפיה של Anion Strong Enaon בהחלפתו בטיהור תרכובות חומציות

תוצאות ודיון

ראשית, תערובת הדגימה הופרדה על ידי מחסנית פלאש שלב רגיל ארוז מראש בסיליקה רגילה. כפי שמראה באיור 3, שני הרכיבים במדגם התחמקו מהמחסנית בזה אחר זה. בשלב הבא נעשה שימוש במחסנית פלאש של SAX לטיהור המדגם. כפי שמראה באיור 4, הרכיב החומצי B נשמר לחלוטין על מחסנית הסקס. הרכיב הנייטרלי A התחמק בהדרגה מהמחסנית עם חיסול השלב הנייד.

איור 3 איור 3. כרומטוגרמת הפלאש של הדגימה על מחסנית שלב רגיל רגיל.

איור 4 איור 4. כרומטוגרמת הפלאש של הדגימה על מחסנית SAX.
בהשוואה לאיור 3 ואיור 4, לרכיב A יש צורת שיא לא עקבית בשתי מחסניות הפלאש השונות. כדי לאשר אם שיא Elution מתאים לרכיב, אנו יכולים להשתמש בתכונת הסריקה באורך הגל המלא המובנית בתוכנת הבקרה של מכונת ™ Sepabean. פתח את הנתונים הניסויים של שתי ההפרדות, גרור לקו המחוון בציר הזמן (CV) בכרומטוגרמה לנקודה הגבוהה ביותר ולנקודה השנייה הגבוהה ביותר של שיא Elution המתאים לרכיב A, והספקטרום המלא של אורך הגל של שתי נקודות אלה יוצג אוטומטית מתחת לכרומטוגרם (כמוצג באיור 5 ואיור 6). בהשוואה בין נתוני הספקטרום המלא של אורך הגל של שתי ההפרדות הללו, לרכיב A יש ספקטרום ספיגה עקבי בשני ניסויים. מהסיבה של הרכיב A יש צורת שיא לא עקבית בשתי מחסניות פלאש שונות, משערים כי יש טומאה ספציפית ברכיב A שיש לו שמירה שונה על מחסנית הפאזה הרגילה ומחסנית הסקס. לפיכך, רצף ה- eluting שונה עבור הרכיב A והטומאה בשתי מחסניות הבזק הללו, וכתוצאה מכך צורת שיא לא עקבית בכרומטוגרמות.

איור 5. איור 5. הספקטרום המלא באורך הגל של הרכיב A והטומאה המופרדת על ידי מחסנית פאזה רגילה.

איור 6 איור 6. הספקטרום המלא באורך הגל של הרכיב A והטומאה המופרדת על ידי מחסנית SAX.

אם מוצר היעד שייאסף הוא הרכיב הנייטרלי A, ניתן בקלות להשלים את משימת הטיהור על ידי שימוש ישירות במחסנית SAX לצורך חיסול לאחר טעינת הדגימה. לעומת זאת, אם מוצר היעד שיש לאסוף הוא המרכיב החומצי B, ניתן לאמץ את דרך שחרור הלכידה עם רק התאמה קלה בשלבים הניסויים: כאשר המדגם הועמס על מחסנית הסקס והרכיב הנייטרלי A היה מחוסם לחלוטין עם חומצה אקטונית שלב רגיל, החליפו את הפאזה הניידת לפתרון מתנול המכיל 5%. יוני האצטט בשלב הנייד יתמודדו עם הרכיב B על קשירה לקבוצות אמין יונים הרבעוניות בשלב הנייח של מחסנית SAX, ובכך יביאו את הרכיב B מהמחסנית כדי להשיג את מוצר היעד. הכרומטוגרמה של הדגימה המופרדת במצב חילופי יונים הוצגה באיור 7.

איור 7. איור 7. כרומטוגרמת הפלאש של הרכיב B התחמקה במצב חילופי יונים במחסנית SAX.

לסיכום, מדגם חומצי או נייטרלי יכול להיות מטוהר במהירות על ידי מחסנית SAX בשילוב עם מחסנית פאזה רגילה תוך שימוש באסטרטגיות טיהור שונות. יתרה מזאת, בעזרת תכונת סריקה באורך גל מלא המובנית בתוכנת הבקרה של מכונת ™ Sepabean, ניתן היה להשוות בקלות את ספקטרום הקליטה האופייני של השברים המחוספסים, ולסייע לחוקרים לקבוע במהירות את ההרכב והטהרה של השברים המחוספסים ובכך לשפר את יעילות העבודה.