הונגצ'נג וואנג, בו שו
מרכז מו"פ של יישומים
מָבוֹא
על פי הקוטביות היחסית של שלב נייח ושלב נייד, ניתן לחלק כרומטוגרפיה נוזלית לכרומטוגרפיה של פאזה רגילה (NPC) ולכרומטוגרפיה שלב הפוך (RPC). עבור RPC, הקוטביות של השלב הנייד חזקה יותר מזו של השלב הנייח. RPC הפכה לזו הנפוצה ביותר במצבי הפרדה של כרומטוגרפיה נוזלית בגלל היעילות הגבוהה שלה, רזולוציה טובה ומנגנון השמירה הברור. לפיכך RPC מתאים להפרדה וטיהור של תרכובות קוטביות או לא קוטביות שונות, כולל אלקלואידים, פחמימות, חומצות שומן, סטרואידים, חומצות גרעין, חומצות אמינו, פפטידים, חלבונים וכו '. RPC, השלב המנחות ביותר הוא המטריקה של סיליקום, כולל קבוצות C1, C18, C18, C18, C18, C18 C18, C18, C18, C18, C18, C18, C18, C18, C18, C18, C18, C18, Compatile, Cyano, Amino וכו 'בין הקבוצות הפונקציונליות המלוכדות הללו, האחת הנפוצה ביותר היא C18. ההערכה היא כי למעלה מ- 80% מ- RPC משתמשים כעת בשלב C18 של C18. לכן טור הכרומטוגרפיה של C18 הפך לטור אוניברסלי חובה לכל מעבדה.
למרות שניתן להשתמש בעמודה C18 במגוון רחב מאוד של יישומים, עם זאת, עבור כמה דגימות שהוא מאוד קוטב או הידרופילי מאוד, עמודות C18 רגילות עשויות להיות לבעיות בעת שימוש לטהר דגימות כאלה. ב- RPC ניתן להזמין את ממיסי ההתחלה הנפוצים על פי הקוטביות שלהם: מים <מתנול <אצטוניטריל <אתנול <טטרהידרפורן <איזופרופנול. כדי להבטיח שמירה טובה בעמודה עבור דגימות אלה (קוטביות חזקות או הידרופיליות מאוד), יש צורך בשיעור גבוה של מערכת מימית כדי לשמש כשלב הנייד. עם זאת, כאשר משתמשים במערכת מים טהורה (כולל מים טהורים או תמיסת מלח טהור) כשלב הנייד, שרשרת הפחמן הארוכה בשלב הנייח של עמוד C18 נוטה להימנע מהמים ולערבב זה עם זה, וכתוצאה מכך ירידה מיידית ביכולת השמירה של העמוד או אפילו ללא שמירה. תופעה זו נקראת "קריסת פאזה הידרופובית" (כפי שמוצג בחלק השמאלי של איור 1). למרות שמצב זה הפיך כאשר העמוד נשטף בממסים אורגניים כמו מתנול או אצטוניטריל, הוא עדיין יכול לגרום נזק לטור. לכן יש צורך למנוע את המצב הזה.
איור 1 איור 1. התרשים הסכמטי של השלבים המלוכדים על פני ג'ל סיליקה בעמודה C18 רגילה (משמאל) ועמודה C18AQ (מימין).
כדי לטפל בבעיות שהוזכרו לעיל, יצרני חומרי האריזה הכרומטוגרפיים ביצעו שיפורים טכניים. אחד השיפורים הללו הוא ביצוע כמה שינויים על פני המטריצה של הסיליקה, כמו הצגת קבוצות ציאנו הידרופיליות (כפי שמוצג בחלק הנכון של איור 1), כדי להפוך את פני הג'ל לסיליקה הידרופילית יותר. לפיכך ניתן היה להרחיב את שרשראות ה- C18 על פני הסיליקה בתנאים מימיים ביותר וניתן להימנע מהתמוטטות השלב ההידרופובי. עמודות C18 שהשתנו אלה נקראות עמודות C18 מימיות, כלומר עמודות C18AQ, המיועדות לתנאי חיסול מימיים ביותר ויכולים לסבול מערכת 100% מימית. עמודות C18AQ יושמו באופן נרחב בהפרדה וטיהור של תרכובות קוטביות חזקות, כולל חומצות אורגניות, פפטידים, נוקלאוזידים וויטמינים מסיסים במים.
התפלה היא אחד היישומים האופייניים של עמודות C18AQ בטיהור הפלאש לדגימות, המסיר את רכיבי המלח או החיץ בממס המדגם כדי להקל על יישום המדגם במחקרים הבאים. בפוסט זה, ה- FCF הכחול המבריק עם קוטביות חזקה שימש כמדגם וטוהר בעמודת C18AQ. ממס הדגימה הוחלף על ידי ממס אורגני מתמיסת חיץ, ובכך הקל את האידוי הסיבובי הבא כמו גם חסכון ממסים וזמן הפעלה. יתר על כן, טוהר המדגם שופר על ידי הסרת כמה זיהומים במדגם.
קטע ניסיוני
איור 2. המבנה הכימי של הדגימה.
ה- FCF הכחול המבריק שימש כמדגם בפוסט זה. טוהר הדגימה הגולמית היה 86% והמבנה הכימי של הדגימה הוצג באיור 2. כדי להכין את תמיסת הדגימה, 300 מ"ג מוצק גולמי אבקתי של FCF כחול מבריק הומס בתמיסת חיץ NAH2PO4 1 M וניפדה היטב כדי להפוך לפיתרון ברור לחלוטין. לאחר מכן הוזרק את תמיסת הדגימה לעמודת הפלאש על ידי מזרק. ההגדרה הניסיונית של טיהור הפלאש מופיעה בטבלה 1.
| מַכשִׁיר | מכונת ™ Sepabean2 | |||
| מחסניות | 12 גרם מחסנית פלאש C18 RP C18 RP (סיליקה כדורית, 20-45 מיקרומטר, 100 Å, מספר הזמנה: SW-5222-012-SP) | 12 גרם Sepaflash C18AQ RP מחסנית פלאש (סיליקה כדורית, 20-45 מיקרומטר, 100 Å, מספר הזמנה ： SW-5222-012-SP (AQ)） | ||
| אֹרֶך גַל | 254 ננומטר | |||
| שלב נייד | ממיס א 'מים ממס B ： מתנול | |||
| קצב זרימה | 30 מ"ל/דקה | |||
| טעינה לדוגמא | 300 מ"ג (FCF כחול מבריק עם טוהר 86%) | |||
| מִדרוֹן | זמן (קורות חיים) | ממס B (%) | זמן (קורות חיים) | ממס B (%) |
| 0 | 10 | 0 | 0 | |
| 10 | 10 | 10 | 0 | |
| 10.1 | 100 | 10.1 | 100 | |
| 17.5 | 100 | 17.5 | 100 | |
| 17.6 | 10 | 17.6 | 0 | |
| 22.6 | 10 | 22.6 | 0 | |
תוצאות ודיון
מחסנית פלאש של Sepaflash C18AQ RP שימשה להתפלה וטיהור מדגם. נעשה שימוש בשיפוע שלב בו שימשו מים טהורים כשלב הנייד בתחילת החיסון ופועלים עבור 10 נפחי עמודות (קורות חיים). כפי שמוצג באיור 3, כאשר משתמשים במים טהורים כשלב הנייד, הדגימה נשמרה לחלוטין על מחסנית הפלאש. בשלב הבא, המתנול בשלב הנייד הוגדל ישירות ל 100% והשיפוח נשמר במשך 7.5 קורות חיים. הדגימה התחמקה בין 11.5 ל 13.5 קורות חיים. בשברים שנאספו הוחלף תמיסת הדגימה מתמיסת חיץ NAH2PO4 למתנול. בהשוואה לפיתרון מימי מאוד, היה הרבה יותר קל להסיר מתנול על ידי אידוי סיבובי בשלב שלאחר מכן, מה שמאפשר את המחקר הבא.
איור 3 איור 3. כרומטוגרמת הפלאש של הדגימה על מחסנית C18AQ.
כדי להשוות את התנהגות השמירה של מחסנית C18AQ ומחסנית C18 רגילה לדגימות של קוטביות חזקה, בוצעה בדיקת השוואה מקבילה. נעשה שימוש במחסנית פלאש של Sepaflash C18 RP, והכרומטוגרמה של הפלאש עבור הדגימה הוצגה באיור 4. עבור מחסניות C18 רגילות, יחס הפאזה המימי הסובל ביותר הוא כ 90%. לכן שיפוע ההתחלה נקבע על 10% מתנול ב 90% מים. כפי שמוצג באיור 4, כתוצאה מהתמוטטות השלב ההידרופובי של שרשראות C18 הנגרמות על ידי יחס מימי גבוה, הדגימה בקושי נשמרה על מחסנית C18 הרגילה והוחמקה ישירות על ידי השלב הנייד. כתוצאה מכך, לא ניתן להשלים את פעולת ההתפלה או הטיהור של הדגימה.
איור 4 איור 4. כרומטוגרמת הפלאש של הדגימה על מחסנית C18 רגילה.
בהשוואה עם שיפוע לינארי, השימוש במדרגה שלב יש את היתרונות הבאים:
1. השימוש בממס וזמן ההפעלה לטיהור הדגימה מצטמצם.
2. מוצר היעד מתממש בשיא חד, שמפחית את נפח השברים שנאספו ובכך מאפשר את האידוי הסיבובי הבא כמו גם את זמן החיסכון.
3. המוצר שנאסף נמצא במתנול שקל להתאדות, ולכן זמן הייבוש מופחת.
לסיכום, לטיהור הדגימה שהוא קוטב חזק או הידרופילי מאוד, Sepaflash C18AQ RP מחסניות פלאש המשלבות עם מכונת Sepabean ™ Sepabean System עם מערכת הכרומטוגרפיה הפלאית יכולה להציע פיתרון מהיר ויעיל.
על מחסניות הפלאש של Sepaflash Combed C18 RP
יש סדרה של מחסניות הפלאש של Sepaflash C18AQ RP עם מפרטים שונים מטכנולוגיית סנטאי (כפי שמוצג בטבלה 2).
| מספר פריט | גודל העמודה | קצב זרימה (ml/min) | מקסימום (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP (AQ) | 5.4 גרם | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP (AQ) | 20 גרם | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP (AQ) | 33 גרם | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP (AQ) | 48 גרם | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP (AQ) | 105 גרם | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP (AQ) | 155 גרם | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP (AQ) | 300 גרם | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP (AQ) | 420 גרם | 40-80 | 250/17.2 |
טבלה 2. SEPAFLASH C18AQ RP מחסניות פלאש.
חומרי אריזה: סיליקה כדורית בעלת יעילות גבוהה (AQ)-סיליקה, 20-45 מיקרומטר, 100 Å.
logy (כפי שמוצג בטבלה 2).
זמן הודעה: אוגוסט 27-2018